3株生防菌对猕猴桃软腐病的作用

为探究生防菌对猕猴桃软腐病的作用,选用前期获得的3株生防菌(贝莱斯芽孢杆菌P2-1、耐盐芽孢杆菌PL7和多黏芽孢杆菌NL4)进行室内抑菌试验、猕猴桃软腐病接种和自然发病防治试验,并研究了3株生防菌对猕猴桃果实病程相关基因表达的影响。试验结果表明,菌株P2-1、PL7和NL4对猕猴桃软腐病菌(Botryosphaeria dothidea)菌丝生长的抑制率分别为83.49%、74.82%和49.33%,P2-1的抑制效果最好,PL7次之,NL4最差;3株生防菌对接种猕猴桃软腐病均具有抑制作用,其中以P2-1的效果最好,PL7次之,NL4最差;3株生防菌均能显著降低猕猴桃软腐病自然发病率,其中以P2-1处理的发病率最低;3株生防菌处理均对猕猴桃果实品质无影响;3株生防菌处理猕猴桃果实后,果实中基因PR1、PR5和SOD的表达显著上调。研究结果可为菌株P2-1、PL7和NL4开发为防治猕猴桃软腐病的生物制剂提供参考。

马铃薯淀粉废水资源化制备Paenibacillus polymyxa农用菌剂

马铃薯淀粉废水中含有高浓度的淀粉、蛋白质等有机物。利用马铃薯淀粉废水培养植物促生菌,是实现其资源化利用的方法。采用单因素方法结合中心复合设计(CCD)的方法,对废水体积分数(浓度)、培养温度、初始pH这3个因素进行研究,优化马铃薯淀粉废水培养Paenibacillus polymyxa EBL06菌株的适宜生长条件。实验得到马铃薯淀粉废水培养P.polymyxa的最佳条件:废水COD为13.7 g·L^−1,初始pH为7.17,培养温度为31.4℃。该条件下,培养21 h后,微生物活菌数为6.2×10^9 cfu·mL^−1,与模型预测结果基本一致,可以达到《农用微生物菌剂国家标准》(GB 20287-2006)。为了验证该菌剂的应用效果,进行了蔬菜种植实验。结果表明:P.polymyxa菌剂能有效提高小白菜的产量与品质,作物鲜重、干重、株高,以及维生素C含量别提高了68.6%、13.7%、5.6%、41.3%;相比于只施用化肥的组,菌剂同尿素的混施能提高氮肥的利用效率,小白菜植株中维生素含量提高了25.3%、硝酸盐含量减少了15.3%。以上研究结果可为马铃薯淀粉废水的资源化利用,以及P.polymyxa菌剂的应用推广提供参考。

欧美杨细菌性溃疡病菌的拮抗细菌筛选鉴定

【目的】筛选获得欧美杨细菌性溃疡病菌杨树朗斯代尔氏菌(Lonsdalea populi)的拮抗细菌。【方法】以欧美杨细菌性溃疡病病原菌L.populi CFCC 13731为靶标菌,采用平板拮抗法筛选拮抗菌株,并通过牛津杯法测定其防效。通过观察菌株形态、生理生化实验、16S rRNA序列分析,对高效拮抗菌株进行鉴定。【结果】筛选获得10株具有拮抗作用的菌株,复筛获得1株菌株(k1)对L.populi具有较好的拮抗效果,鉴定结果表明菌株k1为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。【结论】筛选获得的多粘类芽孢杆菌k1对L.populi具有较好的拮抗作用,在欧美杨细菌性溃疡病防治中将具有较大的应用潜力。

灰葡萄孢拮抗细菌的种类鉴定及生长条件研究

经形态和生理生化鉴定,对灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)拮抗能力强、防病效果好的3株细菌进行分类,W10为地衣芽孢杆菌[Bacilluslicheniformis(Weigmann)Chester],W3和Y2 11 1为多粘类芽孢杆菌[Paenibacilluspolymyxa(Praz mowski)Ashetal]。这2种对蔬菜灰霉病的高效拮抗菌为中国首次报道和应用。3株拮抗细菌的生长条件基本一致。最适培养时间为24～72h,最适生长温度是27～30℃,最适培养液pH值为7～8。

生防细菌LM-3的鉴定及其抗菌蛋白的研究

LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强烈的抑制作用.抗菌蛋白对链霉蛋白酶E和胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感;高温(120℃)处理20min后抗菌蛋白仍保留84.71%的活性;酸碱处理发现抗菌蛋白在pH 8.5时最为稳定,而在pH 2.5时80℃处理1h完全失活;25W紫外灯(2400lx)照射8h对其活性没有影响.发酵上清液经硫酸铵盐析、高温(100℃)处理和SDS-PAGE分析,该抗菌蛋白的分子量介于6kDa和14.2kDa之间.

拮抗细菌对番茄植株抗灰霉病的诱导

通过拮抗细菌多粘类芽孢杆菌W3、Y2和地衣芽孢杆菌W1 0诱导接种和灰霉病菌挑战接种试验 ,明确了 3菌株培养液和去菌液对番茄植株抗灰霉病的诱导作用。 3株拮抗细菌的诱导抗病效果为 2 3 .4%～ 64.5% ,其中W3诱导作用最强。W 3培养液及其去菌液处理后 5d ,诱导效果达最大值 ,且 1 2d后仍有诱抗作用。在 1 0 2 ～ 1 0 1 0 cfu/ml范围内 ,拮抗细菌的诱导活性随浓度增加而增强 ,以≥ 1 0 8cfu/ml的效果最好。拮抗细菌处理叶上部各叶片间诱抗效果无明显差异。

灰葡萄孢拮抗细菌在番茄植物体表的定殖

通过耐利福平标记菌株回收,研究了灰葡萄孢拮抗细菌(地衣芽孢杆菌W10和多粘类芽孢杆菌W3、Y2 11 1)在番茄叶片和果实上的定殖能力及其影响因素。试验表明,拮抗细菌在较高浓度(107～109cfu/ml)下,定殖时间可达10～15d。接种灰霉病菌对拮抗细菌的定殖有一定影响,特别是在接种灰霉病菌1d后接种拮抗细菌和同时接种灰霉病菌与拮抗细菌的情况下,拮抗细菌的定殖能力显著下降,提示该类拮抗细菌的防病效果要好于治病效果。此外,温度较高(25～35℃)、湿度较大(RH95%～100%)、12h光暗交替对拮抗细菌的定殖有利。

海洋细菌L_1-9双抗菌株的定殖能力及其对黄瓜枯萎病的防治作用

采用抗生素标记法,对海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株进行标记,抗性菌株L1-9Str,rif对链霉素和利福平的抗性浓度分别为160μg/m L和20μg/m L。双抗菌株L1-9Str,rif的抑菌特性及其对链霉素和利福平的抗性经多次传代仍比较稳定。盆栽试验表明,该双抗菌株能在黄瓜根部土壤及根组织、茎基部、子叶和真叶组织中定殖。菌株L1-9Str,rif在黄瓜外根际、根际和根表土壤及黄瓜组织中的定殖动态基本一致,初期黄瓜组织中L1-9Str,rif菌量较少,随着时间的延长,菌量逐渐增加,达到高峰后逐渐减少。菌株L1-9Str,rif在根表土壤中菌量最多(1.76×109 CFU/g),其次是根际土壤,外根际土壤中菌量较少;在黄瓜组织中,菌株L1-9Str,rif其在子叶中的定殖能力最强(5.63×104 CFU/g),其次是根和茎基部(0-2 cm);调查至第26 d时在根部土壤中的含菌量仍保持在稳定的水平,其中根表土壤中含菌量最高(2.41×107 CFU/g),在黄瓜组织样品中,子叶中的含菌量最高(4.15×104 CFU/g);温室防病实验结果表明,菌株L1-9和L1-9Str,rif菌株对黄瓜枯萎病具有良好的防治效果,不同时期防效均达70%以上。上述结果表明来自海洋的多黏类芽孢杆菌L1-9菌株能在黄瓜根部土壤及幼苗组织中定殖,是一株有潜力的黄瓜枯萎病生防菌株。

梨渣固态发酵培养多粘类芽孢杆菌的工艺

为了充分利用梨渣这一资源,该文以新鲜鸭梨渣为主要原料,采用固态发酵方式,研究了梨渣与麸皮比例、外加氮源、无机盐、装瓶量、培养温度和时间对生防用多粘类芽孢杆菌D1生长及产芽孢的影响。研究发现,梨渣是一个良好的固态发酵原料,适合培养多粘类芽孢杆菌。当梨渣与麸皮的质量比为5∶2时,获得最大活细胞数,为2.5×109 cfu/g。向梨渣发酵培养基中添加尿素、硝酸钠和豆饼粉可明显提高活菌数和芽孢数,其中添加豆饼粉的效果较好。培养基中添加质量分数为0.5%磷酸二氢钾极大地促进了菌体生长和芽孢的形成。随着培养基装瓶量的增加,芽孢数也随之明显减少。多粘类芽孢杆菌D1的较适培养温度为34°C,较适培养时间为120 h。适宜培养条件下的活菌数、芽孢数和芽孢率分别为5.09×109 cfu/g、4.78×109 cfu/g和93.9%。该研究结果为利用梨渣发酵生产多粘类芽孢杆菌菌剂提供参考。

1株植物病原真菌拮抗细菌的鉴定

从泰山土壤中分离获得1株细菌4'531,对其进行了形态特征观察、生理生化特征测定及16S rDNA序列分析,并构建了包括其在内的10株相关种属菌株的系统发育树,最后研究了其对烟赤星病(Alternariaalternate)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、棉立枯病菌(Rhizoctonia solani)3种植物病原真菌的拮抗作用。结果表明,4'531菌株属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus),与其亲缘关系较近菌株Paenibacillus polymyxa(AJ320493)的同源性达98%;结合形态和生理生化特征,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为DQ279739;4'531菌株对3种供试植物病原真菌均有明显的拮抗作用。

甜瓜角斑病拮抗菌的鉴定及生长条件研究

G-14是从新疆昌吉及吐鲁番甜瓜根际土壤中筛选得到的一株革兰氏阴性生防菌,管碟法测定结果表明,它对3种甜瓜细菌性病原菌具有明显拮抗作用。根据形态观察、培养性状并结合微生物自动鉴定仪及对G-14的16SrDNA基因序列比对,对该菌株进行了鉴定。结果表明：拮抗菌G-14属于多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）,在第4 h进入对数生长期,最适生长温度为25-28℃,最适pH值6-7,为兼性厌氧菌。

拮抗细菌对部分水果产后病原真菌的抑制及防腐作用

研究了桔抗细菌即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W10和多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)W3、Y2对苹果轮纹病菌、柑桔炭疽病菌和柑桔青霉病菌的抑制作用。结果表明,拮抗细菌对病菌菌丝生长、产孢和芽管伸长均有显著的抑制作用,其中W10菌株抑菌作用最强。显微镜观察显示,车抗细菌可引起病菌菌丝异常,即菌丝扭曲,菌丝细胞畸形,菌丝颜色变淡,菌丝断裂离解等。离体果实接种试验表明,菌株W10能明显推迟水果发病,降低果腐率,抑制病斑扩展。

固定化高效苯胺降解菌的制备及处理苯胺印染废水的研究

用苯胺作为唯一的碳源和氮源,从某印染废水处理厂的污泥中通过驯化培养分离出一株高效苯胺降解菌,命名为JHX-8。依据菌落形态、理化特性以及16S rDNA序列测定,将菌株确定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。对该菌株以不同材料进行固定化,考察固定化后菌株对苯胺降解率的影响,结果表明,聚乙烯醇-硅藻土载体中的菌株JHX-8对苯胺的降解率最高。通过考察培养条件,如苯胺质量浓度、培养温度和初始pH对苯胺降解率的影响,确定最佳培养条件为:苯胺最大耐受质量浓度2 000mg/L、培养温度30℃、初始pH=7.0时,对苯胺的降解率高达99.48%。在印染废水的实际处理方面,通过固定化菌株JHX-8对印染废水的应用研究表明应用到处理苯胺印染废水中前景可观。

针叶苗木立枯病拮抗细菌SB-SF5的分离与鉴定

从黑龙江省牡丹江地区东京城林业局苗圃土壤中分离获得一株对苗木立枯病病原真菌具有拮抗作用的细菌,经形态观察、生理生化特征分析及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为EU286527。

多粘类芽孢杆菌LRS-1对番茄青枯病害根际土壤细菌群落的影响

通过对健康阴性对照(CK)、番茄青枯菌阳性胁迫处理(RS)和生防菌LRS-1+番茄青枯菌处理(LRS1)3个处理的盆栽番茄根际土壤样品16S rRNA基因的V3-V4区进行高通量测序,结合生物信息学相关分析,就多粘类芽孢杆菌LRS-1对番茄青枯病态根际土壤细菌多样性及互作网络的影响进行研究。结果表明:与健康土壤相比,青枯病原菌胁迫下番茄根际土壤细菌群落Alpha多样性指数明显降低,而接种生防菌LRS-1后的番茄根际土壤细菌多样性指数有所提高;Venn分析结果显示接种生防菌LRS-1后的番茄根际土壤细菌群落相似度得到改善;放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)等细菌群落在各处理根际土壤中基本均属于优势物种类群,但处理间细菌群落结构及相对丰度存在差异;接种后生防菌LRS1不仅可以在青枯菌胁迫下的根际土壤中良好定殖,还能明显降低青枯病原菌丰度。就细菌互作网络关系而言,青枯菌胁迫易致细菌群间负面互作网络关系增多,而接种生防菌LRS-1则利于番茄根系土壤细菌互作网络关系的稳定与和谐。

多粘类芽孢杆菌绿色制备纳米银及其抑菌活性

本文利用一株桑叶内生菌——多粘类芽孢杆菌381的无细胞发酵液进行纳米银的胞外合成。微生物合成的纳米银溶液呈现红棕色,紫外全波长扫描结果显示在418 nm处有典型吸收峰。对纳米银合成的条件进行优选,结果表明,以内生菌株的LB培养液为还原剂和稳定剂,在与0.01 M硝酸银溶液以1:1体积比条件下37℃避光反应72 h,可以获得分散性良好的纳米银颗粒溶液。偏碱性条件有利于菌株发酵液还原制备纳米银,以pH 9时效果最好。平板打孔法实验表明,纳米银溶液随剂量增加,对桑青枯菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用均可增强,但对桑疫病菌的抑制效果不明显。液体培养法表明,合成的纳米银溶液对两株病原菌的最小抑菌浓度分别为50和30 ug/mL。

一株抗真菌内生多粘芽孢杆菌的分离鉴定及对水稻恶苗病菌的抑制作用

目的:从番茄叶片中筛选具广谱抑真菌活性的拮抗内生细菌,研究其对水稻恶苗病菌的抑制作用。方法:采用对峙培养法筛选拮抗内生细菌,根据菌株形态、生理生化特性结合16S rRNA基因序列分析鉴定菌株;采用硫酸铵沉淀法提取抗菌粗蛋白,研究其对水稻恶苗病菌菌丝生长和孢子萌发的影响。结果:从番茄叶片中筛选到一株抗真菌内生多粘芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)SD-6,该菌株具有广谱抑菌活性,对供试的13种植物病原真菌均具较强的抑制作用;该菌株产生的抗菌粗蛋白能够显著抑制水稻恶苗病菌菌丝生长和孢子萌发,并能导致萌发孢子畸形和破裂。结论:从番茄叶片中分离到一株能产生抗真菌蛋白并具有广谱高效抑真菌作用的内生多粘芽孢杆菌,该菌株及其抗菌蛋白具有防治水稻恶苗病的潜力。

一株拮抗赤霉病的小麦内生细菌的筛选和抑菌活性

对安徽省淮北市小麦植株根、茎、叶中内生细菌的数量进行了调查和筛选,并测定了其抑菌活性。小麦根、茎和叶中的内生细菌的数量分别为7.01×105、4.26×105和0.94×105CFU·g-1鲜重。从健康小麦植株体内分离到131株内生细菌,通过对峙实验,筛选到6株对禾谷镰刀菌有拮抗作用的菌株,占所分离内生细菌总数的4.58%。来自根系组织中的菌株HB022的抑菌效果最佳,抑菌半径为17.0mm。根据形态特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析,将菌株HB022初步鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。抑菌试验结果表明,100倍稀释的菌株HB022无菌发酵滤液对禾谷镰刀菌菌丝生长具有明显抑制作用,5倍稀释的无菌发酵滤液可完全抑制禾谷镰刀菌分生孢子萌发。可见,内生细菌HB022具有潜在生防应用前景。

多粘类芽孢杆菌LRS-1对辣椒疫霉病害根际土壤细菌多样性的影响

【目的】研究多粘类芽孢杆菌LRS-1生防菌对患疫霉病的辣椒根际土壤细菌多样性的影响。【方法】通过对无病阴性对照(CK)、辣椒疫霉菌阳性处理(PC)和生防菌+辣椒疫霉菌处理(LRS1)3个处理的盆栽根际土壤样品16S r RNA基因的V3-V4区进行高通量测序,并对下机数据予以相关生物信息学分析,获得了不同处理根际土壤细菌的OTU丰度、Alpha多样性、OTUs分布、群落组成差异以及PCA聚类分析等数据结果。【结果】各处理间的根际土壤细菌群落变化明显,疫霉菌处理明显降低了根际土壤细菌群落的丰富度和多样性,而接种多粘类芽孢杆菌LRS-1则可明显改善根际土壤细菌群落丰富度与多样性;接种LRS-1明显提高了辣椒根际土壤细菌种类组成的相似性,并改善疫霉菌胁迫下的细菌种类组成;各处理的优势物种类群均分布于变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria),但疫霉胁迫条件下Sphingomonadaceae、Clostridiales物种丰度显著降低,而Burkholderiales、Micrococcales等物种丰度显著增加,接种LRS-1可改善此态势,且明显提高该生防菌所在的Paenibacillus物种比例。【结论】上述结果既证实了LRS-1在"疫霉-辣椒-LRS-1-根际土壤"复合体系下较好的定殖适应性,更体现了LRS-1对疫霉病态土壤根际细菌多样性具有明显的维持与修复作用。