河南食管癌高发区食管癌及癌旁组织AnnexinⅡ表达失调变化

背景与目的:作者对河南食管癌高发区正常人和食管癌患者蛋白质组差异蛋白分析发现AnnexinⅡ是主要差异候选蛋白之一。本研究通过分析该地区食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)及癌旁形态学正常食管上皮(normal epithelium,NOR)、基底细胞过度增生(basal cell hyperplasia,BCH)、不典型增生(dysplasia,DYS)和原位癌(carcinoma in situ,CIS)中AnnexinⅡ动态表达状况,探讨AnnexinⅡ在ESCC癌变过程中的作用及机制。方法:采用ABC免疫组织化学法分析了河南食管癌高发区33例ESCC手术标本和癌旁NOR,以及BCH、DYS和CIS中AnnexinⅡ蛋白表达变化;另应用RT-PCR方法检测了ESCC手术标本和癌旁NOR中AnnexinⅡ mRNA差异表达情况。结果:在90.6%的NOR中有AnnexinⅡ蛋白表达,免疫染色评分≥4,随着病变加重其表达下降,CIS时AnnexinⅡ蛋白完全失表达的比例达到了50.0%。高分化SCC时AnnexinⅡ蛋白表达又升高,而后随着SCC失分化表达逐渐降低,低分化SCC中45.4%病灶AnnexinⅡ失表达。但RT-PCR并没有检测到NOR和SCC中AnnexinⅡ mRNA的差异表达。结论:AnnexinⅡ表达增强或降低可能与癌前病变逆转或进展相关,并有可能成为高危人群筛查及食管癌早期诊断的分子指标。

肾透明细胞癌中AnnexinⅡ的表达及其临床意义

目的:探讨AnnexinⅡ在人肾透明细胞癌和癌旁组织样本中的表达情况及其临床意义。方法:采用Western blot方法检测29例新鲜肾透明细胞癌及相应癌旁组织中AnnexinⅡ蛋白的表达;采用免疫组织化学方法检测120例肾透明细胞癌及相应癌旁组织中AnnexinⅡ的表达情况,并将结果与患者的临床病理参数及预后进行相关性分析。结果:AnnexinⅡ在肾透明细胞癌及相应癌旁组织中均有表达,前者的表达水平较后者显著升高(P<0.01);免疫组织化学显示肾透明细胞癌组织中,AnnexinⅡ的阳性表达率高达67.5%,与癌旁组织存在明显差异(P<0.01);AnnexinⅡ在肾透明细胞癌组织中以胞膜表达为主,其表达状况与肾透明细胞癌患者的临床分期(P<0.05),组织学分级(P<0.05),肾被膜受侵(P<0.01)和远地转移(P<0.01)紧密相关;并且AnnexinⅡ的表达状况与肾透明细胞癌患者的5年生存率显著相关。结论:AnnexinⅡ在肾透明细胞癌组织中过表达,其与肾癌的发展密切相关,在肾癌的侵袭及转移过程中可能发挥重要作用。

乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达

目的:检测乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9及AnnexinⅡ蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例乳腺浸润性导管癌组织及60例乳腺纤维腺瘤组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达,并分析3者与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系。结果:乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的阳性表达率分别是91.7%、86.7%及90.0%,明显高于各自在乳腺纤维腺瘤组织中的表达率(6.7%、6.7%及3.3%,P<0.001);伴有淋巴结转移的浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05);组织学分级越高,以上3种蛋白的表达率越高(P<0.05)。结论:CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的异常高表达可能促进了乳腺浸润性导管癌的发展。

AnnexinⅡ基因反义表达载体对肺癌细胞生长的影响

目的 研究annexinⅡ基因反义表达载体 (annexinⅡ pLXSN)对人肺腺癌细胞株SPC A 1生长的影响。方法 ①提取SPC A 1细胞总RNA ,应用RT PCR法扩增目的片断 ,通过双酶切定向克隆的方法构建annexinⅡ基因反义表达载体。②应用脂质体将annexinⅡ pLXSN导入SPC A 1细胞 (SPC A 1 annexinⅡ )。半定量RT PCR法分析转染细胞中annexinⅡmRNA的表达。③观察反义RNA对SPC A 1细胞生物学行为的影响。结果 ①反义表达载体成功导入SPC A 1细胞 ;半定量RT PCR证实SPC A 1 annexinⅡ细胞中annexinⅡmRNA表达量较亲代细胞下降约 2 /3。②对转染前后的细胞观察表明 ,SPC A 1 annexinⅡ细胞生长减慢 ,克隆形成率降低 ,3 H TdR掺入率下降 ,细胞增殖被阻滞于G0 ～G1 期。结论 annexinⅡ具有促进肺癌细胞增殖的作用 。

AnnexinⅡ、Caspase-3蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义

目的进一步探讨卵巢癌的发生机制。方法选择同期手术切除的组织标本,卵巢癌52份(观察组)、卵巢良性上皮性肿瘤18份(对照组),采用免疫组化SP法检测其AnnexinⅡ、凋亡蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达情况,采用Spearman相关分析法分析两指标间及其与卵巢癌临床病理特征的关系。结果观察组与对照组AnnexinⅡ蛋白阳性表达率分别为80.77%(42/52)、44.45%(8/18),Caspase-3蛋白阳性表达率分别为48.08%(25/52)、94.44%(17/18),两两比较P均<0.05;AnnexinⅡ蛋白表达与卵巢癌组织学类型、组织学分级无关,与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),Caspase-3蛋白表达与卵巢癌组织类型、病理学分级、淋巴结转移无关,与卵巢癌临床分期有显著相关性(P<0.05);AnnexinⅡ和Caspase-3蛋白在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。结论AnnexinⅡ、Caspase-3蛋白异常表达在卵巢癌发生、发展中起重要作用,且两者存在协同性。

反义annexinⅡ对人肺腺癌细胞系SPC-A-1裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 分析annexinⅡ基因反义表达载体对裸鼠移植瘤生长的影响。方法 在裸鼠皮下分别接种SPC A 1(亲代组 )和SPC A 1 annexinⅡ(反义组 )细胞 ,测定成瘤时间、肿瘤体积及重量 ,显微镜下观察肿瘤细胞及其对周围组织的影响。结果 成瘤时间反义组明显晚于亲代组。反义组接种后形成的肿瘤体积、重量均显著低于亲代组 ,且无一例出现局部侵犯 ,而亲代组则有 2例侵犯周围组织。结论 annexinⅡ基因在促进肿瘤细胞生长及对周围组织的侵袭方面具有重要作用。

AnnexinⅡ、S100A4在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)与钙结合蛋白S100A4的表达,分析其与甲状腺乳头状癌发生及淋巴结转移的关系以及二者的相关性。方法应用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测50例甲状腺乳头状癌组织、14例甲状腺腺瘤组织、26例结节性甲状腺肿组织和10例正常甲状腺组织中AnnexinⅡ、S100A4蛋白和AnnexinⅡmRNA的表达。结果甲状腺乳头状癌中AnnexinⅡ、S100A4蛋白和AnnexinⅡmRNA的阳性表达率分别为82.00%(41/50)、78.00%(39/50)和74.00%(37/50),均明显高于甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织及正常甲状腺组织(P<0.05);三者在癌组织中的表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移有关(P<0.05);AnnexinⅡ蛋白与S100A4蛋白的表达呈正相关性(r=0.380,P=0.025);AnnexinⅡ蛋白与AnnexinⅡmRNA的表达呈正相关性(r=0.434,P=0.008)。结论 AnnexinⅡ蛋白、AnnexinⅡmRNA及S100A4蛋白的高表达与甲状腺乳头状癌的发生和淋巴结转移密切相关,二者联合检测有助于鉴别甲状腺良恶性病变,并预测肿瘤的发展和预后。

AnnexinⅡ在4株人乳腺癌细胞中的表达及意义

目的:研究人乳腺癌细胞中AnnexinⅡ基因的表达情况,阐明AnnexinⅡ基因与乳腺癌细胞侵袭力的关系.方法:采用SYBR实时荧光定量PCR,Western Blot技术分别检测MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7共4株人乳腺癌细胞AnnexinⅡ mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞化学检测AnnexinⅡ蛋白在4株人乳腺癌细胞中的定位;Millicell小室测定4株人乳腺癌细胞体外侵袭能力.结果:MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ mRNA表达量分别为0.67±0.21,0.38±0.03,0.05±0.03,(4.06±0.81)×10-5,任两组细胞间AnnexinⅡ mRNA的表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ蛋白表达量:WesternBlot结果分别为1.47±0.06,1.10±0.05,0.70±0.03,0.09±0.01;免疫细胞化学结果分别为3423±312,2767±147,2001±245,353±128;任两组细胞间AnnexinⅡ蛋白表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的体外侵袭力分别为135.3±7.6,147.2±8.9,79.4±2.9,15.3±4.4,除MDA-MB-435S细胞与MDA-MB-231细胞无显著差异外,其余两组细胞侵袭力有显著性差异(P<0.05).结论:在所检测的4株人乳腺癌细胞中,AnnexinⅡ表达量与细胞体外侵袭力呈正相关.

AnnexinⅡ与肿瘤的研究进展

AnnexinⅡ是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,有一个短的决定其生物学特性的疏水N-端结构域和一个参与磷脂结合的核心区。AnnexinⅡ参与了多种生物学活动,包括信号转导、细胞迁移、DNA合成、细胞增殖和凋亡等。近来多项研究表明,AnnexinⅡ在多种肿瘤中表达失调,且其表达水平和肿瘤的发生、浸润、转移、临床分期和愈后密切相关。仅就AnnexinⅡ的生物学特点及其与肿瘤的关系研究进行综述。

annexinⅡ在人表皮角质形成细胞分化中的表达

目的 :探讨annexinⅡ在正常人表皮角质形成细胞(normalhumanepidermalkeratinocytes,NHEK)分化中的表达 .方法 :①体外培养NHEK ,采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基 (KGM) ,通过改变培养基中的钙离子浓度来调节NHEK的增殖和分化 ,采用免疫细胞化学 (ICC)技术分别检测annexinⅡ在增殖和分化NHEK中的表达 .②采用免疫组织化学 (IHC)技术检测成人及新生儿表皮NHEK中annexinⅡ蛋白的表达 .结果 :①低钙 (0 .0 7mmol L)培养条件下 ,annexinⅡ呈弱阳性表达 ,且主要分布于核周 .高钙 (1.5mmol L)条件下培养 2 4h后 ,annexinⅡ仍呈弱阳性表达 ,但表达的部位出现明显变化 ,主要分布于细胞间 ;4 8h后 ,annexinⅡ于胞质及胞膜均呈强阳性表达 .②人正常皮肤切片的IHC结果显示 :annexinⅡ主要分布于基底上层的分化NHEK中 .结论 :annexinⅡ可能参与人表皮NHEK分化的调控 .

siRNA沉默AnnexinⅡ基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的影响

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响。方法体外化学合成AnnexinⅡ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜观察转染效率。收集siRNA干扰的细胞,RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测AnnexinⅡmRNA和蛋白的抑制水平,并采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Millicell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化。结果AnnexinⅡ-siRNA能有效抑制AnnexinⅡmRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。结论采用siRNA干扰AnnexinⅡmRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明AnnexinⅡ与乳腺癌的发生、发展及转移有一定的关系。

AnnexinⅡ的遗传学研究

Annexins蛋白是一类具有典型生物学特征的大分子,参与一系列与Ca2+相关的生物学活动。AnnexinⅡ作为该家族的成员,同样参与了多种生物学活动,现在已经受到越来越多的关注。本文就Annexins家族、AnnexinⅡ的生物学特征以及生物学功能的研究进展作一综述。

AnnexinⅡ和NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达意义

目的检测胃腺癌组织中AnnexinⅡ、NF-κBp65蛋白的表达,探讨两者在胃腺癌组织中的表达意义。方法用免疫组化S-P法检测33例胃腺癌组织、20例萎缩性胃炎组织和33例胃正常组织中AnnexinⅡ、NF-κBp65蛋白的表达情况,分析其与胃腺癌组织临床病理学特征的关系。结果1)AnnexinⅡ、NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率分别为81.82%、75.76%,均显著高于萎缩性胃炎组织(45.00%、40.00%)(P<0.05)和胃正常组织(24.24%、15.15%)(P<0.05);2)AnnexinⅡ蛋白在伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中的阳性表达率(95.00%)明显高于无淋巴结转移组织(61.54%)(P<0.05),NF-κBp65蛋白在低分化腺癌中的阳性表达率(93.75%)明显高于中高分化腺癌(58.82%)(P<0.05),NF-κBp65蛋白在伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中的阳性表达率(90.00%)明显高于无淋巴结转移组织(53.85%)(P<0.05);3)AnnexinⅡ蛋白和NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.467,P<0.05)。结论Annexin Ⅱ、NF-κBp65蛋白的高表达可能在胃腺癌的发生发展和浸润转移中起重要作用。

AnnexinⅡ在特发性间质性肺炎肺组织中的表达及可能作用的初步探讨

目的检测膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在特发性间质性肺炎(IIP)中的表达情况,探讨AnnexinⅡ的可能作用机制。方法采用免疫组织化学技术检测IIP及正常肺组织中AnnexinⅡ的表达情况。结果AnnexinⅡ主要表达于肺泡上皮细胞、肺泡间隔纤维细胞的胞浆中。在正常肺组织中,AnnexinⅡ为弥漫的棕褐色强阳性表达,而在IIP肺组织中,为黄色中至弱阳性表达。免疫组织化学染色强度评分结果显示,普通型间质性肺炎组肺组织中AnnexinⅡ的表达强度低于非特异性间质性肺炎组。结论AnnexinⅡ在特发性间质性肺炎中起重要的作用,可能是作为肺纤维化判断预后的重要指标。

人间隙连接蛋白31相互作用蛋白AnnexinⅡ的筛选与证实

间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250￣266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化、经蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为特异性抗Cx31的抗体.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,Q-TOF质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,运用抗体pull-down实验,筛选到可能相互作用蛋白annexinⅡ,经过免疫共沉淀、细胞免疫共定位等实验证实annexinⅡ与Cx31相互作用.

血管抑素与膜联蛋白AnnexinⅡ在血管瘤与血管畸形中的表达

目的探讨血管抑素(AS)与膜联蛋白AnnexinⅡ在血管瘤与血管畸形中的表达及意义。方法采用Realtime-qPCR方法检测毛细血管瘤、海绵状血管瘤、蔓状血管瘤中AnnexinⅡ与AS的表达水平,以正常皮肤组织作对照。结果毛细血管瘤组AS,AnnexinⅡ的表达水平分别是正常皮肤组织的2.39和1.76倍。其他各组AS的表达略低于正常对照组,血管瘤与血管畸形中AnnexinⅡ的表达差异无统计学意义。结论 AS可能参与血管瘤发生过程,AnnexinⅡ在各种血管性皮肤病中作用无特异性,AS抑制血管增生的作用可能由多种途径介导。

AnnexinⅡ基因克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人AnnexinⅡ全长cDNA序列,并构建其真核表达载体。方法根据Genbank中AnnexinⅡ基因的碱基序列,利用RT-PCR的方法从人肾脏组织中扩增编码AnnexinⅡ基因,将目的片段与pBS-T载体连接,利用亚克隆的方法将AnnexinⅡ的cDNA片段克隆到pcDNA3.1载体中,并进行序列测定。结果DNA测序证实该片段序列与Genbank完全一致。结论成功克隆人Annexin II全长cDNA序列,并构建出pcDNA3.1—Annexin II真核表达载体,为进一步研究其在肾脏疾病中的作用和机制奠定基础。

SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及应用

目的建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,并用其测定人乳腺癌细胞MDAMB-231和MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡmRNA的保守序列设计特异性引物,提取人乳腺癌细胞总RNA,并逆转录为cDNA,胶回收纯化PCR产物,并与pGM-T载体连接构建质粒标准品,进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0.997,融解曲线分析显示单个峰,pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.2%、7.8%(高拷贝)和9.1%、12.3%(低拷贝)。进一步研究表明人乳腺癌细胞MDA-MB-231中AnnexinⅡmRNA水平显著高于MCF-7细胞(P<0.01)。结论建立的检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好,可用于人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA的定量检测。

AnnexinⅡ及其与人类疾病研究进展

Annexins蛋白家族是一组钙离子（Ca^2＋）介导的磷脂结合蛋白，各成员在结构上表现为同源相似性。该豸谳的成员之一AnnexinⅡ在生物膜结构域的建立或稳定、胞膜运输、形成离子通道、DNA合成及细胞增殖等方面起重要作用，并且细胞外的AnnexinⅡ还作为受体，参与纤溶、细胞间粘附、配体介导的细胞信号转导和病毒感染等，AnnexinⅡ的异常表达参与人类多种疾病。现将AnnexinⅡ的结构、功能及其与人类疾病的关系综述如下。

AnnexinⅡ蛋白和p53蛋白在卵巢腺癌中的表达及意义

目的:探讨钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)和p53蛋白在卵巢腺癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测77例卵巢腺癌和30例卵巢腺瘤组织中AnnexinⅡ蛋白和p53蛋白的表达。结果:AnnexinⅡ蛋白阳性率在卵巢腺瘤组织中为46.67%(14/30),在卵巢腺癌组织中为80.52%(62/77),两组相比有显著性差异(P<0.05);p53蛋白阳性率在卵巢腺瘤组织中为0.0%(0/30),在卵巢腺癌组织中为70.13%(54/77),两组相比有显著性差异(P<0.05);AnnexinⅡ蛋白、p53蛋白阳性表达与卵巢腺癌的组织学分级、临床分期和淋巴结转移均有关(P<0.05)。卵巢腺癌中AnnexinⅡ蛋白、p53蛋白阳性表达呈正相关。结论:AnnexinⅡ蛋白、p53蛋白阳性表达与卵巢腺癌的发生、发展和淋巴结转移均有关,p53蛋白可促进AnnexinⅡ蛋白的表达。