薯蓣皂苷对缺血性脑损伤模型大鼠cAMP/PKA通路、NHE1和GLUTs蛋白的调控作用

目的探究薯蓣皂苷对缺血性脑损伤模型大鼠环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶(PK)A通路、葡萄糖转运蛋白(GLUTs)、1型Na^(+)/H^(+)交换蛋白(NHE1)的调控作用。方法60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术(J)组、模型(MCAO)组、尼莫地平(N)组(15 ml/kg)、薯蓣皂苷高、中、低剂量(H、M、L)组(200、100、50 mg/kg),每组10只,线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型,造模成功后灌胃给药7 d(1次/d)。测定各组大鼠神经功能评分,Western印迹检测脑组织中GLUTs和NHE1蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液cAMP、PKA水平。结果与J组比较,MCAD组神经功能评分显著增高,脑脊液中cAMP、PKA含量显著降低,GLUTs表达水平显著减少,NHE1表达水平显著升高(均P<0.01)。与MCAO显著组相比,H、M、L组能显著改善神经病学症状(P<0.01,P<0.05),显著升高cAMP、PKA含量及GLUTs表达水平,并显著降低NHE1表达水平(P<0.01,P<0.05),其中H组效果最佳,与N组接近。结论薯蓣皂苷可通过上调cAMP/PKA通路,升高GLUTs、降低NHE1水平,来缓解MCAO模型大鼠脑组织缺血缺氧,保护脑组织。

中国拉祜族PP1PK血型频率调查

目的 了解中国拉祜族人群中P1PK血型和GLOB血型表现频率,掌握拉祜族人群遗传现状。掌握该类血型表现型频率可为患者临床输血安全提供数据支撑,为孕妇提供妊娠建议及用血指导。方法 随机抽取中国拉祜族人群无关个体,进行P1PK、P血型血清学鉴定及基因测序分析,分析P1PK血型和GLOB血型表现频率。结果 从300名拉祜族人群中检出6例抗-PP1Pk(原抗-Tja,以下均称抗-PP1Pk)反应阴性血型,鉴定为罕见的P1-PK-P-血型(原称Tja-血型或p血型,以下均称为p血型)。拉祜族人群P1PK、GLOB血型系统中p血型表型频率为2.0%(6/300)。结论 拉祜族人群p血型表型频率明显高于欧州(5.8人/每百万人)和中国香港地区(1人/每百万人),存在显蓍的民族特异性和地域种族差异性。

镉诱导LLC-PK_1细胞凋亡与bcl-2、p53蛋白表达关系的研究

目的 探讨镉诱导LLC PK1 细胞凋亡及与bcl 2、p5 3(mtp5 3)蛋白表达的相互关系。方法 采用透射电镜观察凋亡小体、流式细胞仪分析凋亡率、琼脂糖凝胶DNA电泳方法确定镉对LLC PK1 细胞诱导的凋亡作用 ,以及流式细胞仪分别测定bcl 2和p5 3基因表达产物bcl 2蛋白、mtp5 3蛋白。结果 透射电镜观察发现 4 0 μmol LCdCl2 作用LLC PK1 细胞 12h后 ,出现典型的凋亡小体 ;流式细胞仪分析其凋亡率为 32 6 1% ,并高于对照组 (1 0 8% ) (P <0 0 1) ;琼脂糖凝胶DNA电泳呈明显梯形条带。 0、10、2 0、4 0 μmol LCdCl2 作用LLC PK1 细胞 4h、8h ,8h后 ,bcl 2基因表达逐渐下降 ,并呈良好的剂量 -反应关系 (r=- 0 910 ,P <0 0 5 ) ;作用 4h、8h后mtp5 3蛋白表达均明显下降 ,并有剂量 -反应关系 (r值分别为 - 0 716、- 0 972 ,P值均 <0 0 5 )。结论 镉诱导LLC PK1 细胞凋亡可能与镉抑制bcl 2、mtp5

金属离子水解常数pK_1的人工神经网络研究

A functional-link net(FLN) was applied to study the relationships between the structural parameters of metal ions and their Hytrosis Constants pK1. These structural parameters such as radius, electric charge, electronegativity (electricity shouldering) and valence electron structure parameter of the metal ion. The results are satisfactory, and better than that obtained by using linearly statistic methods. Through comparing hytrolysis constants pK1 with hydration-energy ?H, the non-linear characteristic of pK1 have deeply discussed. 19 unknown pK1 of metal ion were predicted with the method.

氧化应激介导达氟沙星诱导LLC-PK1细胞周期阻滞

目的探讨达氟沙星诱导LLC-PK1细胞氧化应激后细胞损伤的分子机制。方法不同浓度的达氟沙星处理LLCPK1细胞后,通过WST-1法检测细胞增殖抑制情况,DHE、Amplex Ultra Red法分别检测超氧阴离子自由基(O2·-)、H2O2含量,Rhodamine123法检测线粒体膜电位,流式细胞仪检测分析细胞周期及RT-PCR法检测细胞周期相关基因表达含量的变化。结果达氟沙星呈浓度依赖性的抑制LLC-PK1细胞的增殖、升高细胞内O2·-、H2O2含量、诱导细胞周期阻滞,但线粒体膜电位没有显著性下降。100μmol/L浓度达氟沙星处理LLC-PK1细胞后细胞出现G2期周期阻滞,ROS升高含量在自身抗氧化系统修复范围内,细胞并没有出现明显损伤;而浓度达到400μmol/L时细胞发生氧化应激出现可逆性的G1期细胞阻滞,此时细胞周期素抑制蛋白p53、p21、p27m RNA表达显著升高,LLC-PK1细胞对氧化应激造成的损伤进行修复。结论 400μmol/L浓度范围内的达氟沙星处理LLC-PK1细胞24h所致的氧化应激诱导细胞周期阻滞,细胞损伤在自身修复范围之内并未导致细胞凋亡。

不同种属H1启动子驱动miR-1在PK15细胞中的表达情况

【目的】筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础。【方法】分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表达的真核表达载体,利用脂质体法转染PK15细胞后,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测不同种属H1启动子表达载体驱动miR-1表达效率。【结果】经酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了3个miR-1过表达载体(pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1),以其转染PK15细胞24和48 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分细胞都发出绿色荧光,且含有H1启动子细胞的荧光强于无H1启动子细胞。转染pEGFP-pH1-miR-1细胞、转染pEGFP-hH1-miR-1细胞、转染pEGFP-miR-1细胞的miR-1相对表达量分别为105.02、99.00和79.65,其miR-1表达水平均极显著高于转染pEGFP-C 1细胞和空白对照组细胞(P<0.01)。【结论】重组质粒pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1均能在PK15细胞中高效表达miR-1,即猪源与人源的H1启动子均能提高外源性miR-1表达,可用于后续的miR-1功能研究。

茎瘤芥BjPKS1基因的克隆及遗传转化

茎瘤芥(榨菜)具有瘤茎膨大的性状,该特征是一种重要的经济性状。在前期研究中,我们获得一个可能与瘤茎膨大有关的基因片段,该基因与拟南芥PKS1基因相似。通过RACE技术获得了该基因全长序列,命名为BjPKS1。该基因的mRNA序列全长1440bp,其预测的ORF长度为1131bp,编码的氨基酸序列长度为376aa。多序列比对发现,预测的氨基酸序列与其他物种的PKS基因家族蛋白具有高度相似性,在多个区域都高度保守,进化分析显示Bj PKS与拟南芥的PKS1基因关系最近。荧光定量RT-PCR结果显示,该基因在茎瘤芥瘤茎膨大发育的过程中表达量明显上升。将该基因转化拟南芥,转基因植株株高和节间都明显缩短。结果表明BjPKS1可能具有其他物种中同源基因相似的分子功能,其在茎瘤芥瘤茎膨大过程中的作用有待进一步研究。

低氧对LLC-PK_1细胞增殖及去分化的影响

目的：研究低氧对近端肾小管细胞株（ＬＬＣ－ＰＫ１）细胞增殖和去分化的作用。方法：ＬＬＣ－ＰＫ１细胞分别置于低氧（３％Ｏ２）和正常氧（１８％Ｏ２）孵箱中培养，用３Ｈ－胸腺嘧啶掺入法和细胞计数，观察细胞增殖情况；以钠依赖葡萄糖和氨基异丁酸（ＡＩＢ）转运为指标，观察细胞分化程度；用放射核素法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性。结果：与正常氧培养比较，低氧培养１６ｈ，３Ｈ－胸腺嘧啶掺入显著增加；培养２４ｈ，细胞数显著增加；培养７２ｈ，细胞摄取α－甲基糖甙和ＡＩＢ显著降低。细胞低氧培养４ｈ，细胞膜与细胞质ＰＫＣ活性比率增高，随后降至原先水平；但继续培养至２４ｈ，ＰＫＣ活性再次增高，直至７２ｈ，表明ＰＫＣ呈急性和持续双相激活。ＰＫＣ抑制剂可显著抑制低氧诱导的３Ｈ－胸腺嘧啶掺入，并显著增加α－甲基糖甙和ＡＩＢ转运。结论：慢性低氧可诱导ＬＬＣ－ＰＫ１细胞的增殖和去分化。

类猪圆环病毒P1诱导PK15细胞自噬的研究

旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比,感染组PK15细胞内出现典型自噬形态学变化。揭示类猪圆环病毒P1能诱导PK15细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。

猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究

为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。

猪肾细胞(PK15细胞)ABCA1基因与miRNA-758关系的研究

为了研究猪肾细胞(PK15细胞)中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)mRNA与miRNA-758表达量之间的关系,试验利用miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照分别转染PK15细胞,利用Real-time qPCR技术检测转染24 h后细胞内ABCA1 mRNA与miR-758相对表达量并讨论其之间的关系。结果表明:在PK15细胞中转染miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照后,ABCA1 mRNA表达量均极显著升高(P<0.01)。转染miR-758模拟物的PK15细胞miRNA-758表达量高于对照组30 000多倍,差异极显著(P<0.01);而其他转染组miR-758表达量均低于对照组,但差异不显著(P>0.05)。说明miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照均可导致PK15细胞内ABCA1 mRNA表达量升高;miR-758模拟物可促进PK15细胞miR-758表达量上升30 000多倍,而对ABCA1 mRNA表达量并未表现出抑制作用,PK15细胞中ABCA1mRNA的表达量不受miR-758模拟物影响或受影响小;miR-758抑制物确实能够抑制miR-758表达量,并使ABCA1 mRNA表达量升高。

分子连接性指数与对无机含氧酸酸性PK_1值的预测

基于原子的最高主量子数,成σ键数目,未参与形成离域π键的弧对电子数和元素的Allen电负性,建立了一种分子连接性指数(1X)。它与26种单中心无机含氧酸酸性PK1的线性方程为:PK1=23.1941-10.67111X,r=-0.9978。结果表明:1X具有良好的结构选择性和性质相关性,可用于预测其它单中心无机含氧酸酸性的PK1值。

江苏省临床病猪弓形虫感染风险因素及PK1基因型分析

为了解江苏省临床病猪弓形虫病流行特征及虫株遗传多样性,采集江苏不同地区送诊的临床病猪肺门淋巴结组织,以529bp重复序列为靶基因进行弓形虫PCR检测,以确定病猪的感染率并分析其感染风险因素;检测为阳性的样本,选择弓形虫PK1遗传标记位点进行基因型鉴定。结果显示,采集的65例病猪中,18例确认感染弓形虫,感染率为27.69%;病猪日龄与季节是江苏省临床病猪弓形虫感染的主要风险因素;PK1-Ⅱ型是该地区猪感染弓形虫的优势基因型。研究结果在一定程度上揭示江苏省猪弓形虫病的流行特征。

P1PK血型不合引起胎死宫内的罕见病例研究1例

目的分析1例胎死宫内患者血型血清学及分子生物学特点,明确患者血型及不规则抗体类型。方法采用血清学方法对患者的ABO、P1PK血型及不规则抗体进行鉴定;对编码P1PK抗原形成关键酶的α1,4-半乳糖基转移酶基因(α1,4-galactosyltransferase gene,A4GALT)进行测序,分析DNA序列,确定突变位点。结果血清学实验证实患者为P1PK血型系统的p表型,患者血清中存在抗-PP1PK;测序结果显示,患者的A4GALT编码区出现304-305insG突变。结论患者为P1PK血型系统的p表型,其A4GALT基因突变类型为304-305insG,患者体内的抗-PP1PK可能为其胎死宫内的原因。

解放牌CA1120PK1L2型载货汽车总体设计

目前 ,载货汽车柴油化是重要的发展方向 ,而国产柴油机与国际先进水平还有差距。因此 ,一汽集团在CA1120PK2L2型车的基础上 ,换装德国道依茨公司生产的BF6M1013E柴油机设计开发了CA1120PK1L2型载货汽车。由于发动机对提高整车动力性、经济性以及满足环保要求等方面都极为重要 ,因此重点围绕发动机的选择及布置过程 ,简要介绍了整车的总体设计思想。

TUM_2-PK、NSE、CEA和CYFRA21-1联合检测对肺癌诊断的临床价值

目的:探讨肿瘤M2型丙酮酸激酶(tumor M2pyruvate kinase,TU M2-PK)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段(CYFRA21-1)联合检测对肺癌诊断的临床价值。方法:研究对象分3组,肺癌组、良性肺疾病(BLD)组和正常对照组。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆TU M2-PK,电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测血清NSE、CEA、CYFRA21-1,所有数据均由SPSS15.0版统计软件进行分析处理。结果:①肺癌患者TU M2-PK、NSE、CEA、CYFRA21-1浓度和敏感度明显高于肺部良性疾病组和正常对照组(P<0.01);②TU M2-PK、NSE、CYFRA21-1和CEA四项联合检测的灵敏度和准确性高于单项检测(P<0.05)。结论:TU M2-PK联合检测NSE、CEA和CYFRA21-1可提高肺癌检测的敏感性和准确性,是诊断肺癌有价值的组合方法。

RinPKS 1基因过表达载体的构建及遗传转化树莓

RinPKS 1基因编码的蛋白是具有催化合成柚皮素查尔酮和苯亚甲基丙酮的能力双功能酶,即具有CHS和BAS活性。BAS又是树莓酮生物合成途径中的关键酶。【目的】为了验证RinPKS 1在树莓酮生物合成途径中是否发挥作用。【方法】将RinPKS1基因与pCambia 1304连接,构建成植物过表达载体PCA-RinPKS 1,通过根癌农杆菌介导,将RinPKS1遗传转化入树莓中,以提高树莓中树莓酮的含量。利用q-PCR分别检测转PCA-RinPKS1和阴性对照(空载体)的树莓材料中RinPKS 1基因的表达量。【结果】转RinPKS1基因树莓材料中RinPKS1的表达量比转阴性对照(空载体)有很大提高,分别是根高出15.8倍;茎高出3.17倍;叶高出4.39倍。【结论】RinPKS 1在树莓中得到转录水平过表达。

解放CA3160PK2BT1型汽车用于运材的试验研究

通过对8辆解放CA3160PK2BT1型汽车两个冬运期的木材运输试验,对该型汽车的可靠性、经济性、维修性、适用性及主要技术经济指标等项目进行了考核。采用的试验方法科学合理,试验数据准确、可靠。对木材运输企业在运材汽车选型及使用经验方面具有重要的理论和使用参考价值。