儿童清咽解热口服液体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用及其抗炎活性研究

目的:研究儿童清咽解热口服液体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用及其抗炎活性。方法:以利巴韦林(Ribavirin)作为阳性对照药物,在HEP-2细胞水平上,采用CellTiter-GloTM免疫荧光法测定受试样品的细胞毒性,通过间接免疫荧光法测定流感病毒蛋白表达水平,以检测细胞培养液上清中病毒复制水平,评价儿童清咽解热口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)的作用,同时采用AlphaLISA法检测培养上清中IL-6、IL-8、MCP-1等炎症因子的表达水平。结果:儿童清咽解热口服液半数中毒浓度(CC_(50))为15.33mg·mL^(-1),对呼吸道合胞病毒(RSV)的半数有效浓度(EC_(50))为1.27mg·mL^(-1),炎性指标IL-6、IL-8、MCP-1的半数有效浓度(EC_(50))分别为0.73mg·mL^(-1)、0.83mg·mL^(-1)和0.61mg·mL^(-1)。呼吸道合胞病毒(RSV)选择指数(SI)为12.07,炎性指标IL-6、IL-8、MCP-1的SI分别为21、18.5和25.3。结论:在HEP-2细胞水平上,儿童清咽解热口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒具有明显的抗病毒作用,并显示出良好的抗炎活性。

异荭草苷体内外抗呼吸道合胞病毒活性研究

【目的】研究清热消炎中草药淡竹叶中异荭草苷的体内外抗病毒活性,并初步探讨其作用机制。【方法】采用MTT法测定异荭草苷的细胞毒性,并以异荭草苷的最大无毒浓度为起始浓度,采用空斑减数法测定其体外抗RSV活性,计算其抗病毒的选择性指数(SI值);继而采用空斑减数法,研究异荭草苷对RSV复制周期不同阶段的影响,采用实时定量PCR法,检测异荭草苷对病毒蛋白m RNA合成的影响;选取3周龄BALB/c雄性小鼠研究异荭草苷体内抗RSV活性,小鼠灌胃给药4 d,经鼻腔滴入RSV病毒液造模,继续灌胃给药3 d,取小鼠肺组织称重、切片、HE染色,显微镜下观察肺组织病理性改变,并用空斑减数法检测小鼠肺组织内病毒含量。【结果】异荭草苷体外抑制RSV A2株和LONG株的IC50分别为(3.6±0.8)μg/m L和(2.4±0.2)μg/m L,比阳性药利巴韦林的活性略低,因异荭草苷的细胞毒性比利巴韦林小,其抗RSV的选择性指数(SI)为利巴韦林8.3倍;初步的作用机制研究表明,异荭草苷主要抑制RSV在宿主细胞内的复制过程,也可一定程度地抑制病毒进入宿主细胞,实时定量PCR结果显示,异荭草苷可以不同程度地降低RSV的L、F和P蛋白对应的m RNA的表达;异荭草苷可降低小鼠肺组织的病毒滴度,且可缓解病毒引起的炎症。【结论】清热消炎中药淡竹叶中的异荭草苷,具有较好的体内外抗病毒活性,且能一定程度缓解病毒性炎症;该化合物主要在病毒进入宿主细胞后的复制阶段(复制晚期)起作用,能抑制与病毒复制晚期相关的L、F和P蛋白的m RNA表达。

天然咖啡酰基奎宁酸类化合物抗RSV活性及其构效关系研究

目的:研究天然来源的咖啡酰基奎宁酸类化合物体外抗呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)的活性及其构效关系。方法:采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法对咖啡酰基奎宁酸类化合物抗RSV体外活性进行筛选,MTT法检测化合物对HEp-2细胞的细胞毒性,通过3D-QSAR(three-dimensional quantitative structureactivity relationship)模型分析其构效关系。结果:CPE结果显示咖啡酰基奎宁酸类化合物均表现出较好的抗RSV作用,其中活性最好的4,5-双咖啡酰基奎宁酸甲酯(CQA-4)的IC_(50)=2.5μmol/L,选择性指数SI>153.8,远远优于阳性对照药物利巴韦林(IC_(50)=8.3μmol/L,SI>20);3D-QSAR分析结果显示,咖啡酰基为咖啡酰基奎宁酸衍生物抗RSV的活性基团。结论:天然来源的咖啡酰基奎宁酸类衍生物均具有抗RSV活性,其中双咖啡酰基奎宁酸类化合物活性最好。构效关系研究表明,该类化合物抗RSV活性受其构型和取代基的影响很大。

黄芩苷抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究

目的探讨黄芩苷(baicalin)的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染作用及最佳浓度。方法应用微量细胞培养技术,观察RSV感染人喉癌(Hep-2)细胞病变效应(CPE)。观察不同浓度黄芩苷对人肺癌腺上皮(A549)细胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测黄芩苷对A549细胞的毒性作用和RSV感染后细胞存活率的影响。结果黄芩苷浓度≤0.156mg/ml时,A549细胞未显示明显CPE,MTT比色法结果与CPE观察结果相符;浓度在0.078～1.25mg/ml时,RSV感染的A549细胞仅出现轻微CPE,0.625mg/ml时对CPE有最好的保护作用;治疗指数(TI)为19.23;MTT比色法也显示以上浓度范围黄芩苷组的细胞存活率明显高于RSV感染组,差异有统计学意义(P均<0.05),其中以0.3125mg/ml组的细胞存活率最高,达82.09%。结论黄芩苷具有体外抗RSV感染作用,有效浓度为0.078～1.25mg/ml,最佳作用浓度为0.156mg/ml。

咽康片抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的 :探讨咽康片的抗病毒作用。方法 :采用微量细胞培养法进行抗病毒疗效和病毒滴定。结果 :咽康对呼吸道合胞病毒的最小治疗浓度为 4 .0 6μl/ml(30 .4 7μg/ml) ,咽康对呼吸道合胞病毒的治疗指数 (therapy index,TI)等于 16。经最小有效剂量咽康作用后 ,呼吸道合胞病毒的滴度 0 .1m l/10 3.5TCID50 下降为 0 .1m l/10 1 .3TCID50 。结论 :咽康在体外对呼吸道合胞病毒有一定的治疗作用。

金银花主要成分绿原酸对RSV感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响

目的研究金银花主要成分绿原酸对RSV感染RAW264.7细胞中TLR3通路的影响,初步阐释其可能的抗RSV机制。方法 RSV感染RAW264.7细胞,采用金银花主要成分绿原酸进行干预,Western Blot法检测TLR3、TBK1、IRF3和P-IRF3,ELISA法检测细胞上清液中IFN-β含量。结果绿原酸能够显著下调RSV诱导的TLR3、TBK1和P-IRF3蛋白的高表达(P<0.01),进而下调RSV诱导的IFN-β的高表达(P<0.01),绿原酸的下调作用低于利巴韦林。结论 RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活,从而促进IFN-β的表达,而绿原酸通过调节TLR3信号通路关键信号分子TLR3、TBK1、IRF3适度下调IFN-β的这种过表达。

植物药抗呼吸道合胞病毒有效部位研究进展

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Viruses,RSV)是造成婴幼儿呼吸道感染的最主要病毒性病原体之一,同时也是老年人、免疫缺陷者感染的一种主要病原。具有较强的传染性。目前西药治疗尚缺乏理想药物,亦无可靠疫苗。当前从植物中筛选有效成分已成为抗RSV新药研发的热点和趋势,鉴于此,文章就近10年来有关植物药抗RSV有效成分研究的文献进行了检索、整理、综述。

空气触媒抗RSV病毒的效果观察

目的利用细胞培养技术评价空气触媒抗呼吸道合胞病毒(RSV)效果。方法采用Hela细胞病变抑制法,观察空气触媒对RSV所致细胞病变的抑制作用,并以0.2%过氧乙酸作为对照。结果在细胞毒性试验中,空气触媒对Hela细胞无可观察到的毒性,而0.2%过氧乙酸则需要稀释200倍以上;在抗病毒试验中,空气触媒在稀释2～4倍时,可明显抑制RSV对Hela细胞所致的细胞病变,类似于0.2%过氧乙酸在300～400倍时的抗RSV效果。结论空气触媒可明显抑制由RSV所致的Hela细胞病变。

苦瓜籽总甙体外抗HSV-Ⅰ和RSV活性研究

从苦瓜种子中提取苦瓜籽总甙,并测定了此总甙体外抗HSV-Ⅰ和RSV的活性.实验结果表明,0.375×10-3g/mL苦瓜籽总甙药液可抑制HSV-Ⅰ对Vero细胞和RSV对Hep-2细胞的损害.且此浓度对正常Vero细胞和Hep-2细胞均无毒性作用.

重组人干扰素γ体外抗呼吸道合胞病毒的作用观察

目的:观察国产重组人干扰素γ(rHuIFN-γ)体外抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的作用。方法:RSV在96孔板中通过Hela细胞进行增殖,不同浓度的IFN-γ加入孔板中,测定药物对RSV感染所致细胞病变的抑制作用。结果:IFN-γ在HeLa细胞上的半数中毒浓度(TC_(50))为2．80万IU·mL^(-1),在HeLa细胞中抗RSV的半数有效浓度(EC_(50))为4．78 IU·mL^(-1),治疗指数(TI)为5857．74。结论:IFN-γ在体外对RSV有显著抑制作用,并呈明显的量效关系。

地龙抗呼吸道合胞病毒的有效部位筛选

目的:研究地龙不同极性的粗提取物经纯化分离后对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抗病毒活性,从而确定抗病毒的有效部位。方法:预实验依次用乙酸乙酯、95%乙醇水溶液、水作为溶剂提取药物,采用RSV-Hep-2细胞感染模型,初步检测地龙的体外抗RSV活性。依据预实验的结果,分别采用水提醇沉法和醇提水沉法对粗提取物进一步地分离和纯化,将处理后的上清液和沉淀物分别进行体外抗病毒实验。然后根据实验结果将醇提水沉后的沉淀过大孔树脂DM130,分别用25%、50%、75%的乙醇水溶液洗脱,将洗脱液浓缩后做抗病毒实验,在显微镜下观察细胞的病变,用酶标仪测定中性红染色A540值,计算其治疗指数。结果:乙酸乙酯、乙醇、水3种粗提取物中水粗提取物对呼吸道合胞病毒的抑制效果最好,TI=74.21。将粗提取液水提醇沉或醇提水沉后发现醇提水沉的沉淀对呼吸道合胞病毒的抑制效果最好,TI=107.11。将地龙醇提水沉的沉淀过大孔树脂DM130发现75%乙醇2号水溶液冲洗的洗脱液抑制呼吸道合胞病毒的效果最好,TI=63.05.结论:地龙的醇溶性成分对RSV病毒具有明显的抑制作用。

单克隆抗体桥联酶标法快速诊断婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎调查研究

１９９１年１１月～１９９２年４月对河南省部分市及地区６９５例婴幼儿肺炎和毛细支气管炎住院患儿，采用单克隆抗体桥联酶标法快速诊断呼吸道合胞病毒肺炎。采集标本时间均在发病７天以内，男４０９例，女２８６例；年龄≤３岁６８８例，＞３岁７例。本调查显示，肺炎患儿呼吸道合胞病毒阳性检出率河南省各地为１４．９％～５６．１％，其总阳性检出率为４２．３％。表明该年度在本省广大地区呼吸道合胞病毒感染呈普遍流行趋势，其冬春季节发病月份以１１～１２月份为最高（５５．６％～５７．４％），其次为１～２月份（３５．２％～４０．０％）。呼吸道合胞病毒是婴幼儿肺炎主要病原体之一，早期快速诊断可及时指导治疗，并为小儿呼吸道感染流行病学监测和预防提供了依据。

婴幼儿急性下呼吸道感染和支气管哮喘抗肺炎支原体、肺炎衣原体和RSV抗体检测分析

目的：了解婴幼儿急性下呼吸道感染和支气管哮喘抗肺炎支原体、肺炎衣原体和RSV抗体水平。方法：采用回顾性分析方法,将接受间接免疫荧光法检测的急性下呼吸道感染和支气管哮喘的婴幼儿患儿120例和对照组100例无相关呼吸道疾病婴幼儿的血清抗肺炎支原体（MP）抗体、抗肺炎衣原体（CP）抗体和抗呼吸道合胞病毒（RSV）抗体检测结果进行对比分析。结果：①观察组血清抗MP抗体阳性率最高,为35.83%,抗CP抗体阳性率最低,为22.50%,与对照组相比差异有统计学意义（χ^2=14.78,P〈0.05;χ^2=7.22,P〈0.05）。②婴幼儿患儿各年龄段中MP IgM、CP IgM和RSV IgM分布情况,血清MP IgM和CP IgM阳性率在13岁组最高,RSVIgM阳性率30天1岁组中最高。③抗RSV抗体在支气管哮喘中阳性率最高分别为55.56%,抗MP抗体阳性率在非典型肺炎中最高,为46.27%。④观察组患儿MP抗体、抗CP抗体和抗RSV抗体检测,单项指标的临床诊断实验评价抗MP抗体的敏感性和真实性最高,分别为37.66%和54.00%。结论：抗MP抗体、抗CP抗体和抗RSV抗体的检测是诊断婴幼儿急性下呼吸道感染和支气管哮喘中重要的参考指标。

人源化抗RSV病毒抗体在CHO-S细胞中的高效表达

为了有效预防及治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S细胞中表达了人源化抗RSV病毒抗体。以pCHO1.0为载体,分别通过Eco RⅤ(5')和PacⅠ(3')、AvrⅡ(5')和Bst Z17Ⅰ(3')双酶切,将轻、重链克隆进载体,采用电转的方法,将构建好的质粒转染进CHO-S宿主细胞,通过嘌呤霉素和甲氨蝶呤压力筛选以及有限稀释法,获得能稳定表达抗体的单克隆细胞株。在摇瓶中进行仅补加葡萄糖的流加培养试验,CHO-S细胞在培养7 d时活细胞密度达到最大,为1.3×10~7 cells/ml,在培养12 d时细胞活性降低至80%以下,结束培养,最终抗体表达水平达到130 mg/L,上清液中抗体总活性达到2.90×10~5 IU/ml。经蛋白A亲和色谱纯化,抗体纯度达到98%以上。