scFv-LAA0融合蛋白的制备及对人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用观察

目的：制备重组抗白介素4受体（IL-4R）单链抗体基因与竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶（LAAO）的融合蛋白（scFv-LAAO融合蛋白），并观察其对人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用。方法①采用重叠延伸PCR技术将抗IL-4R单链抗体与竹叶青蛇毒LAAO基因连接成scFv-LAAO融合基因，构建重组质粒pET28a-scFv-LAAO，转染BL21（DE3）原核表达菌，诱导表达scFv-LAAO融合蛋白，用SDS-PAGE法检测scFv-LAAO融合蛋白的分子量，用Western blotting法检测scFv-LAAO融合蛋白的His-tag表达。②设空白对照组、环磷酰胺组和融合蛋白组（包括高、中、低剂量融合蛋白组），分别用培养基、2．0 mg／mL环磷酰胺及4．0、2．0、1．0 mg／mL的scFv-LAAO融合蛋白培养人肺腺癌H460细胞，用MTT法测算环磷酰胺组和高、中、低剂量融合蛋白组细胞增殖抑制率。取75只小鼠，建立荷肺腺癌动物模型，随机分为空白对照组、环磷酰胺组和融合蛋白组（包括高、中、低剂量融合蛋白组），分别腹腔注射生理盐水、0．1 mL／10 g体质量的环磷酰胺和100、50和20 mg／kg的scFv-LAAO融合蛋白，1次／d，连用10 d后停药，停药7 d后称量各组小鼠瘤重，计算环磷酰胺组和高、中、低各剂量融合蛋白组抑瘤率；同时统计存活时间。结果 scFv-LAAO融合基因长度2000～3000 bp。用融合基因转染BL21（DE3）原核表达菌后，将细菌裂解从裂解液中分离出的蛋白分子量86 kD，与scFv-LAAO融合蛋白分子量相符，且用Western blotting法在分离到的蛋白中检出scFv-LAAO融合蛋白组氨酸标签。环磷酰胺组和高剂量融合蛋白组人肺腺癌H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间相比，P均＞0．05；环磷酰胺组和高剂量融合蛋白组H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间高于低、中剂量融合蛋白组，P均＜0．05；低剂量融合蛋白组H460细胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存时间低于中剂量融合蛋白组，P均＜0．05。结论成功制备scFv-LAAO融合蛋白。scFv-LAAO融合蛋白可以抑制人肺腺癌细胞H460、小鼠肺腺癌增殖。

TLR4 2244 G/A基因多态性与原发抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎易感性的关系

目的研究广西人群Toll样受体4(TLR4)2244 G/A基因多态性与原发抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎(AAV)的关联性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测122例AAV患者(AAV组)和225例健康成人(对照组)TLR4 2244 G/A位点的基因型,并收集实验对象的临床资料和实验室资料。结果 (1)AAV组和对照组TLR4 2244 G/A位点基因型及等位基因分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)AAV组3种基因型间水肿发生率、尿素氮、肌酐、IgG水平相比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)病理分析提示AAV组3种基因型间肾组织病理小血管炎活动指数及慢性指数评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论广西人群中TLR4 2244 G/A基因多态性可能与水肿发生率、尿素氮、肌酐、IgG升高具有关联性,可能与AAV的遗传易感性无关联性。

针药结合治疗眼肌型重症肌无力:随机对照试验

目的:比较针药结合治疗与单纯西药治疗眼肌型重症肌无力(OMG)的临床疗效,并探讨其可能作用机制。方法:将60例OMG患者随机分为针药组(30例,脱落1例)和西药组(30例,脱落2例)。西药组予口服溴吡斯的明片与醋酸泼尼松片治疗;针药组在西药组治疗基础上予“通督调气”法针刺,穴取百会、风府、合谷、足三里等,每日1次,每周6 d,两组均治疗8周。观察两组患者治疗前后OMG临床绝对评分,采用单纤维肌电图(SFEMG)检测患者眼轮匝肌电生理指标[平均颤抖(jitter)值、jitter>55μs百分比和阻滞百分比],ELISA法检测患者血清抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平。结果:治疗后,两组患者OMG临床绝对评分、平均jitter值、jitter>55μs百分比、阻滞百分比及血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4水平均低于治疗前(P<0.05),且以上指标针药组均低于西药组(P<0.05)。结论:针药结合治疗可有效改善眼肌型重症肌无力患者上睑下垂、上睑疲劳、眼球运动障碍及神经肌肉接头损害,疗效优于单纯西药治疗,其机制可能与下调血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4水平,促进眼轮匝肌功能恢复有关。