抗哇巴因鸡蛋黄IgY与兔抗体IgG在酶联免疫检测中的比较

目的:探讨提高内源性哇巴因(EO)检测方法的准确性及特异性,为哇巴因的研究打下基础。方法:分别制备出鸡蛋黄抗哇巴因多克隆抗体及兔抗体。然后采用酶联免疫吸附法(ELISA)比较两种抗体检测内源性哇巴因的准确性及特异性。结果:采用IgY检测EO的平均批内变异系数为2.03%,批间变异系数为2.34%。兔抗体IgG则分别为2.83%、3.29%;两者均与氢化可的松及地塞米松无交叉结合反应,与西地兰和地高辛分别存在3.45%vs5.95%、3.20%vs5.20%的交叉反应。结论:IgY比兔抗体ELISA检测内源性哇巴因的特异性及准确性较高。

抗哇巴因鸡蛋黄抗体IgY的制备

目的制备出高特异性的抗哇巴因多克隆抗体,为进一步提高内源性哇巴因的检测的敏感性和特异性提供实验基础。方法采用不同剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物(0.5 mg/kg;1.0 mg/kg)免疫母鸡,收集鸡蛋;采用聚乙二醇法分离、纯化鸡蛋黄中抗哇巴因抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY(yolk immunoglobulin)的抗体效价。SDS-PAGE电泳分析IgY纯度。结果免疫后1周,鸡蛋黄中可检测出IgY;免疫后6周,鸡蛋黄中IgY的效价迅速升高,最高效价达到1∶10 240,持续至少4周。结果还显示,大剂量免疫母鸡获得高效价抗体持续时间较长。结论采用大剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物免疫母鸡,可以获得较高效价的抗哇巴因IgY。该方法简单,高效价抗体持续时间长,是制备抗体较为有效的方法。

抗哇巴因抗体IgY的制备及其应用

目的制备高度特异性的抗哇巴因多克隆抗体,并将其应用于组织中内源性哇巴因的免疫学检测。方法采用哇因-牛血清蛋白耦联物作为免疫原免疫母鸡。免疫后1周收集鸡蛋。鸡蛋黄采用PEG-6000方法进行纯化分离,并采12%SDS-PAGE分析其纯度。酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价。然后应用IgY的竞争性酶联免疫吸附法检测哇巴水平,并将IgY应用于大鼠肾上腺组织中内源性哇巴因的检测。结果IgY抗体效价在第二次免疫后迅速升高,最高效达到1:10240,并持续至少4周左右。竞争性酶联免疫吸附法检测哇巴因的批内差异及批间差异分别为2.03%、2.34%免疫组化结果显示内源性哇巴因主要分布于大鼠肾上腺皮质的网状带,髓质未见明显阳性颗粒。结论免疫母鸡简单快速,并且高效价抗体持续时间较长。同时本研究结果提示IgY抗体可用于常规免疫学检测。

莲子心微囊抗心律失常作用研究

目的:研究并评价莲子心微囊的抗心律失常作用。方法:采用乌头碱诱导大鼠心律失常及哇巴因诱导豚鼠心律失常,将大鼠和豚鼠各50只分为溶媒对照组,莲子心微囊低、中、高剂量组及阳性对照组,各组预防给药7d,末次给药30min后测定实验指标并进行评价。结果:与溶媒对照组比较,莲子心组心律失常出现时间延长、失常持续时间缩短、正常持续时间延长,2种心律失常模型下各项实验指标明显改善。结论:莲子心微囊具有一定的抗实验性心律失常作用。

早搏宁冲剂的抗实验性心律失常作用

目的 :观察早搏宁冲剂对实验性心律失常的影响。方法 :采用Wistar大鼠、豚鼠、家兔 ,观察早搏宁冲剂对乌头碱诱发大鼠心律失常和哇巴因诱发豚鼠心律失常的影响 ,以及早搏宁冲剂对电刺激家兔室颤阈及结扎大鼠冠状动脉诱发心律失常的影响。结果 :早搏宁冲剂可增加乌头碱及哇巴因诱发心律失常的用量 ,提高电刺激家兔室颤阈值 ,延迟结扎大鼠冠状动脉心律失常出现时间 ,减少早搏次数及室速持续时间。结论 :早搏宁冲剂具有抗实验性心律失常作用 。

Ouabain及其受体Na^+/K^+-ATPase α_1、α_4抗体对人精子运动功能的影响

目的研究Ouabain及其受体Na+/K+-ATPase α1、α4抗体对正常人精子运动功能的影响。方法将60例正常人的精液上游法进行优化,其中30例与不同浓度Ouabain共孵育,在1,2,3,4h采用CASA检测精子运动参数;另外30例分别与Na+/K+-ATPase α1和α4抗体共同孵育,1h后同样方法检测。结果①与阴性对照组比较,优化后的精子与较高剂量Ouabain(1×10-5～1×10-2mol.L-1)共孵育后,活动率显著下降(P<0.05),a+b级精子所占比例显著下降(P<0.01);但各浓度组两参数差异无显著性;②与阴性对照组比较,较低剂量Ouabain(1×10-6和1×10-7mol·L-1)作用后,精子活动率和a+b级精子所占比例下降均不明显,两浓度组之间差异无显著性;③Ouabain作用后,精子其他运动参数如直线速度、鞭打频率、直线性、前向性、摆动性均未见显著变化。④Anti-α1和Anti-α4作用后的精子活动率均显著下降(均P<0.01);但两者之间差异无显著性;⑤Anti-α1和Anti-α4作用后的a+b级精子所占比例均显著下降(均P<0.01);且Anti-α4作用后降低的幅度明显大于Anti-α1(P<0.05);⑥Na+/K+-ATPase α1和α4抗体作用后,精子其他运动参数如直线速度、鞭打频率、直线性、前向性、摆动性均未见显著变化。结论Ouabain在体外能够降低正常人精子运动功能;Na+/K+-ATPase α1、α4抗体也能够降低精子运动功能,但α4抗体的作用更明显。

苯海索抗实验性心律失常作用

在五种实验性心律失常动物模型上,观察苯海索(THP)的抗心律失常作用,结果发现THP1.5 mg/kg、3 mg/kg可对抗氯化钡、哇巴因和结扎大鼠冠状动脉引起的室性心律失常及增加兔电室颠阈值;THP 3 mg/kg可对抗乌头碱引起的室性心律失常。提示THP有抗实验性心律失常作用。

葡甲胺环腺苷酸的抗心律失常作用

MCA iv 100 mg/kg可推迟肾上腺素诱发兔心律失常的潜伏期,缩短心律失常的持续时间;减少CaCl_2引起大鼠室速和室颤的发生率.MCA不能推迟乌头碱诱发大鼠室早的潜伏期,但可减少大鼠室速的发生率;对哇巴因引起的豚鼠心律失常无对抗作用.MCA iv 200 mg/kg可减慢急性缺氧大鼠的心率,增加心脏收缩幅度.

4-碘苯甲氧基乙酸二甲氨基乙酯的抗心律失常作用

一次iv4-碘苯甲基乙酸二甲氮基乙酯30,60mg/kg,均能明显提高乌头碱所致大鼠室早、室颤和致死的阈剂量,也能提高哇巴因致豚鼠室早、室颤和致死的阀剂量,能显著减少CaCl_2引起的大鼠室颤发生率和死亡率。对BaCl_2所致心律失常及心博停止的阀剂量也有一定的提高作用。小白鼠尾静脉注射的LD_(50)为122.12mg/kg。

哇巴因诱导MCF-7自噬作用与机制探讨

目的探讨哇巴因诱导人乳腺癌细胞MCF-7发生自噬的作用以及分子机制。方法 MTT法和克隆形成实验测定哇巴因对MCF-7细胞增殖活力及克隆形成能力的影响,吖啶橙染色结合荧光显微镜及流式细胞术观测细胞内形态的变化及FL3/FL1荧光强度比值,蛋白质印迹法检测细胞内抗微管相关蛋白1轻链3(Light chain 3,LC3)-Ⅱ及p62蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。结果哇巴因处理MCF-7细胞24h后半数抑制浓度(IC50)为(37.1±9.0)nmol/L。25nmol/L哇巴因处理12、24、48和72h后细胞存活率组间F=12.787,P<0.001;与对照组比较差异均有统计学意义,P值均<0.01。哇巴因处理2周后给药组较对照组相对克隆形成率降至(6.03±1.51)%,差异有统计学意义,F=635.800,P<0.001。吖啶橙染色及蛋白质印迹结果显示,经25nmol/L哇巴因处理48h后,胞质中出现呈亮红色荧光的酸性囊泡,并伴随LC3-Ⅱ呈时间依赖性的蓄积及p62表达的下降;在12、24和48h时,相对FL3/FL1比值组间F=62.226,P<0.001;与对照组比较差异均有统计学意义,P值均<0.05。哇巴因能同时引起细胞内ROS水平呈时间依赖性升高;0.5、1、2、4、6、12和24h时ROS水平组间F=112.901,P<0.001;与对照组比较,除0.5h组差异无统计学意义外,其余各组均差异有统计学意义,P值均<0.05;给药同时使用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)后,联合给药组较给药组相对ROS水平降低至(101.2±17.5)%,与给药组比较差异有统计学意义,F=185.870,P<0.001;并且LC3-Ⅱ表达水平随之下降,而IC50值增加为(81.4±4.5)nmol/L,差异有统计学意义,F=57.610,P<0.01。结论哇巴因能够诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生自噬,其作用机制可能与促进细胞内ROS生成有关。