Analysis of anti-zona pellucida antibody and tumor necrosis factor-α,γ-interferon and interleukin-2 in sera from patients with premature ovarian failure

Objective:To investigate the role and the clinical significance of anti-zona pellucidaantibody (AzpAb) and tumor necrosis factor-α(TNF-α),γ-interferon(IFN-γ) and inter-leukin-2 (IL-2) in sera from patients with premature ovarian failure (POF).Methods: The AzpAb in the serum of POF patient was analyzed by means ofELISA. The levels of TNF-α, IL-2 and IFN-γ in the serum were determined by meansof radioimmunoassay (RIA).Results:The level of serum AzpAb in the POF patients was significantly higher thanthat of the normal controls(P＜0.001). The levels of TNF-α and IL-2 were significantlyreduced (P＜0. 001), and the level of IFN-γ was significantly elevated (P＜0.01). Thelevels of above three cytokines in AzpAb positive group were significantly higher thanthose of the negative group in POF patients.Conclusion: This study suggested that AzpAb, TNF-α, IFN-γ and IL-2 might playimportant roles in the pathogenesis of autoimmune POF.

Specific Binding of 17D_3 Anti-pZP mAb to Porcine and Human Zona Pellucida but not to Other Tissue Antigens Identified by ABC Immunohistochemistry

Objective To characterize the binding effects of 17D3 anti-pZP monoclonal antibody （mAb） on porcine and human ZP,, ovary and other important tissues Methods The 17D3 anti-pZP mAb was produced by immunizing mouse with porcine zona pellucida and hybridoma and monoclonal antibody preparation. An ABC immunohistochemistry was used to evaluate reaction of mAb 17D3pZP to porcine and human ZP antigens as well as important human tissue antigens. Results mAb 17D3pZP specifically bound to porcine and human ZP antigen, but not to other cells of ovaries and other important human tissue antigens. Conclusion 17D3 anti-pZP mAb can recognize porcine and human ZP antigen without cross-reaction with other human tissue antigens including ovary, so it may further help us to abstract and purify corresponding target antigen and settle basis for producing human ZP contraceptive vaccine.

不育的免疫性因素分析研究

应用ＢＡ－ＥＬＩＳＡ法分析了４４７对不育夫妇男女双方血清及宫颈粘液中精子抗体及女方血清中透明带抗体。结果显示，不孕组与精子抗体及透明带抗体的发生明显相关。无论是血清中还是宫颈粘液中精子抗体仅与原发性不孕相关；而与继发性不孕及反复自然流产无明显关系。透明带抗体与不孕及反复自然流产均有关，因此，透明带抗体比精子抗体在更大范围内影响人类生育。

补肾活血方对小鼠实验性卵巢早衰防治作用的研究

目的 :探讨补肾活血中药复方对实验性的免疫性卵巢早衰 (POF)的防治作用。方法 :以免疫层析分离的猪卵透明带皮下和两后脚掌多点注射免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠建立POF的动物模型。分别在免疫早期或 3次免疫后连续灌服中药复方 ,分析灌服中药后阴道脱落细胞涂片 ,外周血雌二醇 (E2 )浓度和血清抗透明带 (ZP)抗体水平变化 ,及受试动物脾淋巴细胞对不同浓度ZP刺激的反应和卵巢滤泡和黄体数改变。结果 :预防组和治疗组小鼠体内血清E2 水平均比免疫组高 (P <0 0 1,P <0 0 5) ,而抗ZP抗体则明显下降。卵巢组织形态学分析显示 ,治疗组和预防组生长滤泡和黄体数均比免疫组明显增加 (P <0 0 5,P <0 0 1)。免疫组脾淋巴细胞呈现抗原特异性的增殖反应 ,明显高于对照组 ,而治疗组脾淋巴细胞对抗原的特异性反应降低。结论 :补肾活血中药复方主要通过抑制特异性免疫损伤 ,使卵巢内残存的少数滤泡能得以复苏 ,恢复部分卵巢功能 。

卵巢早衰抗卵巢抗体和抗透明带抗体及其分类

目的 探讨卵巢早衰 (POF)患者血清中抗卵巢抗体 (AoAb)、抗透明带抗体 (AZpAb)水平及其分类情况 ,研究免疫性卵巢早衰的发病机理。方法 用酶联免疫法测定卵巢早衰、抗精子抗体 (ASAb)阳性不孕妇女和不明原因不孕症妇女血清中AoAb ,AZpAb并对其进行分类。结果 POF患者、ASAb阳性不孕妇女组及不育患者组血清中AoAb、AZpAb均比正常妇女组高 (P <0 0 1)。在抗体的分类证明 ,各组抗体以IgG为主 ,IgA ,IgM也有一定的比例。结论 POF与自身免疫异常密切相关 。

中西医结合治疗老年性阴道炎60例

中西医结合治疗老年性阴道炎６０例曲玉华，王增文自１９８８年以来，笔者采用中西医结合治疗老年性阴道炎６０例，并与西药治疗６０例作对照观察，疗效显著，现报告如下。临床资料全部病例临床诊断均符合老年性阴道炎诊断标准（郑怀美．妇产科学．第２版．北京：人民卫生...

免疫异常增高型反复自然流产的中西医结合治疗

目的：探讨以中药为主的中西医结合疗法治疗免疫异常增高型反复自然流产的临床价值及其作用机理。方法：免疫异常增高型反复自然流产透明带抗体阳性者采用知柏地黄丸治疗；磷脂抗体及ＡＢＯ血型机体阳性者采用清热利湿、养血活血中药复方治疗，磷脂抗体阳性者加用阿司匹林口服。结果：经治疗后，再次妊娠成功率为９２．３％。在治疗过程中，透明带抗体、磷脂抗体及ＡＢＯ血型抗体水平呈明显下降。妊娠后透明带抗体水平无明显再次升高现象；而磷脂抗体及ＡＢＯ血型抗体水平于妊娠后再度升高，但经继续治疗后又呈明显下降。结论：中药复方主要通过降低异常增高的自身及同种抗体水平，可有效治疗免疫异常增高型反复自然流产。

不孕妇女血清中卵透明带抗体的检测

利用与人卵透明带有交叉免疫反应的猪ZP3抗原，建立起不孕妇女血清卵透明带抗体检测的ELISA技术，并对120例不孕妇女血清进行了检测，发现15例透明带抗体阳性血清。该法灵敏、特异，稳定性和重复性好，易于在临床推广应用。

补肾健脾调和气血法中药对复发性流产抗生殖抗体及妊娠结局的影响

目的:探讨补肾健脾调和气血法中药对复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)患者抗精子抗体(AS-Ab)、抗心磷脂抗体(AC-Ab)、抗子宫内膜抗体(AEM-Ab)、抗卵巢抗体(AO-Ab)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCG-Ab)、抗透明带抗体(AZP-Ab)和抗滋养细胞抗体(AT-Ab)等7种抗生殖抗体的作用,以及改善抗生殖抗体阳性RSA患者妊娠结局的效果。方法:选取2013年5月至2018年12月湖北省妇幼保健院收治的符合研究标准的复发性流产患者505例作为研究对象,随机分为对照组(n=249)和观察组(n=256)。对照组采用口服醋酸泼尼松(AC-Ab阳性者联合阿司匹林)治疗,观察组采用补肾健脾调和气血法中药辨证治疗,比较治疗2个疗程时2组各抗生殖抗体转阴率,以及试孕1年内的妊娠率和妊娠成功率。结果:抗体转阴病例率和抗体转阴总体率,观察组分别为90.23%、93.99%,对照组分别为82.33%、82.96%,差异有统计学意义(P<0.05);AhCG-Ab和AT-Ab的抗体转阴率,2组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余抗体比较,观察组优于对照组(P<0.05)。妊娠率和妊娠成功率,观察组分别为93.36%、95.82%,对照组分别为87.95%、91.46%,观察组均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾健脾调和气血法中药可有效抑制多种抗生殖抗体,促进抗体转阴,并可显著提高RSA患者妊娠率和妊娠成功率。

不同人群血清中抗透明带抗体的检测

为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精 。

口服耐受对实验性卵巢早衰抗透明带抗体的抑制作用研究

目的:探讨应用口服耐受的方法抑制抗透明带抗体的产生,为卵巢早衰的治疗提供一种新途径。方法:将100只小鼠随机分为对照组、模型组、小剂量治疗组、中剂量治疗组和大剂量治疗组。各治疗组小鼠给予透明带多肽灌胃,剂量分别为每次1μg、10μg和100μg,共7次。灌胃4次后,经皮下注射免疫原建立小鼠自身免疫性卵巢早衰模型。免疫荧光法检测小鼠外周血和卵巢中抗透明带抗体的表达。结果:中剂量和大剂量治疗组小鼠外周血中抗透明带抗体的阳性率分别为15%和45%,明显低于模型组的80%,具有统计学意义(P<0.01)。中剂量治疗组小鼠卵巢中抗透明带抗体的阳性率为20%,明显低于模型组的70%,具有统计学意义(P<0.01)。结论:适当剂量的透明带多肽能够很好地诱导口服耐受、抑制机体抗透明带抗体的产生。

抗猪、兔卵透明带单克隆抗体的分析

以热溶解的猪卵透明带和热溶解的兔卵透明带免疫BALB/c小鼠建立了三株与兔卵透明带有较强交叉反应的抗猪透明带单克隆抗体。以“EIA—AB”ABC试剂盒进行单克隆抗体的分析,其中二株,IA_1,AC_4是IgG_1,一株,KA_3是IgM,全部为k轻链。以ELISA测定腹水中单克隆抗体的滴度,对猪卵透明带,AC_4为1∶400,000,IA_1为1∶16,000,KA_3为1∶100,对兔卵透明带,AC_4为1∶800,000,IA_1为5.120,KA_3为1∶100。在SDS—双向丙烯酰胺电泳中显示三株单克隆抗体具有相同分子量的轻链。猪卵透明带双向电泳后以^(125)Ⅰ标记的蛋白A作免疫印迹,IA_1主要结合第三组分的酸性端的抗原。二株单克隆抗体,IA_1和KA_3,可抑制体外猪和兔的精神结合(p<0.001和p<0.01),另一株,AC_4则在体外对两种动物的精卵结合无抑制。

猪卵透明带单克隆抗体体外对人精卵结合的影响

在于观察猪卵透明带单克隆抗体对人精卵结合的影响。采用体外人精卵结合试验方法。结果提示当１７Ｄ＿３单抗按１：２、１：１０、１：２０、１：３０稀释时，抑制率分别为９９．３％、９４％、７５．７％和４６．７％，其抑制人精卵结合的生物效应呈剂量相关。结论为猪卵透明带单克隆抗体对人精卵结合有抑制作用。

重组质粒pCR3.1-brZPC’的构建及其体内外表达

目的 构建重组质粒 pCR3 .1 brZPC’ ,检验其在细胞及动物体内的表达。 方法 应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法克隆基因 ,与真核表达载体pCR3 .1相连 ,转化感受态菌后酶切鉴定重组质粒。脂质体法转染Hela细胞 ,RT PCR法检测重组质粒在细胞中mRNA水平的表达 ;免疫荧光法检测重组质粒在细胞中蛋白水平的表达。接种BALB/c小鼠 ,一周后提取其各组织的总RNA ,RT PCR检测重组质粒在被免疫动物体内mRNA水平的表达情况。 结果 重组质粒 pCR3 .1 brZPC’能在细胞和被免疫动物体内高效表达。被免疫动物可以产生相应的抗体 ,且与该重组蛋白在细胞外结合。 结论 重组质粒 pCR3 .1

猪卵透明带抗体对卵巢功能的影响

用sephadex G-100柱层析分离提纯的猪卵透明带(ZP)抗原,及卵巢组织中的其他蛋白抗原,分别免疫兔和猪。观察到不论是异种还是同种兔疫时,只有在猪被免疫时,其卵巢功能受到不同程度的抑制。提示ZP免疫动物的抗生育作用,与卵巢功能受抑制有关。

不孕妇女血清中六项免疫自身抗体检测临床意义的研究

目的探讨抗精子抗体(ASAb)、抗卵巢抗体(AOAb)、抗子宫内膜抗体(AEAb)、抗透明带抗体(AZAb)、抗滋养层抗体(ATAb)、抗人绒毛促性腺激素抗体(AHCGAb)等6项指标与女性不孕的关系及临床意义。方法应用蛋白芯片技术检测131例不孕妇女(实验组)及100名有生育史妇女(对照组)血清中ASAb、AOAb、AEAb、AZAb、ATAb、AHCGAb等6项指标。结果实验组免疫自身抗体阳性46例(35.11%),对照组1例(1.00%)。实验组46例阳性者6项抗体中同时1、2、3项阳性者分别为26、15、5例,阳性率分别为19.85%、11.45%、3.82%;血清中ASAb、AHCGAb、ATAb、AOAb、AZAb、AEAb阳性率分别为21.37%、9.92%、7.63%、6.11%、5.34、3.82%。结论所检测的6项免疫自身抗体在不孕妇女中有较高阳性率,6项免疫自身抗体检测对原因不明,以及与免疫因素有关的不孕的诊断有重要临床意义。

人抗卵透明带抗体阳性血清对小鼠体外受精和早期胚发育的影响

本研究在小鼠体外受精和早期胚胎发育中添加抗卵透明带抗体阳性不孕妇女血清 (n =11) ,结果显示 :与对照组相比较 ,6例完全阻断受精和发育 (P <0 .0 1) ;2例仅阻断受精 ,不明显抑制发育 ;3例则与对照组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。提示人抗卵透明带抗体的主要效应是阻断受精 ,并可以进一步抑制胚胎早期发育 ,但效应的程度表现出个体差异。

17D_3pZP单克隆抗体对卵透明带及卵巢等组织的免疫学反应

目的: 观察单克隆抗体17D3pZP对猪卵透明带,人卵透明带及人卵巢等组织的免疫学反应。方法: ABC酶免疫组织化学技术。结果: 17D3pZP单克隆抗体能特异性识别猪卵透明带及人卵透明带抗原,而与人卵巢及其他各重要脏器组织无反应。结论: 17D3pZP单克隆抗体能识别卵透明带抗原,而与机体其他组织抗原无交叉反应。有望通过它进一步提取并纯化相应靶抗原,为制备卵透明带免疫避孕疫苗奠定基础。

不孕妇女血清抗透明带抗体与激素水平的关系

目的 探讨血清抗透明带抗体 (AzpAb)与激素水平之间的关系。 方法 用ELISA法定性检测不孕症妇女血清中AzpAb ,放射免疫测定血清卵泡刺激素 (FSH)、黄体生成素 (LH)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)和泌乳素 (PRL)。结果 AzpAb阳性组 (31例 )血清FSH、LH水平显著高于AzpAb阴性组 (46例 ) ,而E2 、P水平显著低于阴性组 ,两组血清PRL水平差异却无显著性。结论 AzpAb对卵巢的免疫损伤可能是引起不孕症妇女血清激素水平改变的重要因素之一。

精子顶体膜蛋白的研究

目的 :研究提取和纯化与人卵透明带 ( HZP)作用更为密切的人精子膜蛋白 ,为改进精子包被抗原的制备方法和筛选避孕疫苗抗原提供科学依据。方法 :1悬浮离心法制备人精子膜蛋白混合溶液 ;2卵子热溶透析法制备 HZP溶液 ;3将人精子膜蛋白混合溶液进行 SDS- PAGE电泳 ,然后全胶电洗脱分别收集蛋白溶液 30管 ;4梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验鉴定出阳性管 ;5以阳性管内的 HZP特异精子膜蛋白溶液包被抗原进行抗精子抗体 ( As Ab)检测。结果 :SDS- PAGE电泳、梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验证实 ,与 HZP结合的人精子膜蛋白有多种成分 ;全胶电洗脱后以第 1 4管内成分之特异性最强 ,与标准蛋白分子量对照 ,其分子量范围为 48～ 5 3k D。结论 :以电洗脱转移法纯化、筛选的人精子膜蛋白是特异的 ,与 HZP具极强相关性 ;以该精子膜蛋白包被抗原用于检测 As Ab,其灵敏度更高 。