足三里穴位注射黄芪注射液联合肺康复训练对老年慢性阻塞性肺疾病病人抗菌肽LL-37和免疫功能的影响

目的 研究足三里穴位注射黄芪注射液联合肺康复训练对老年COPD稳定期病人的疗效、血清抗菌肽LL-37水平、炎症因子及外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法 选择98例老年COPD稳定期病人,根据治疗方法分为黄芪组(50例)和对照组(48例)。对照组予以肺康复训练及常规西药治疗,黄芪组在对照组基础上予以足三里穴位注射黄芪注射液,疗程均为12周。比较2组治疗前后肺功能、6分钟步行试验(6MWT)结果、改良版英国医学研究委员会呼吸问卷(mMRC)呼吸困难程度分级,血清抗菌肽LL-37、TNF-α、IL-6、CRP水平及T淋巴细胞亚群变化。结果 2组治疗后肺功能(FVC、FEV1、FEV1%pred、FEV1/FVC)、6MWT结果及mMRC分级均较治疗前明显改善(P<0.05),且黄芪组较对照组改善更为明显(P<0.05)。2组治疗后血清抗菌肽LL-37、CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞及CD4^(+)/CD8^(+)水平均较治疗前升高,且黄芪组高于对照组(P<0.05);2组治疗后TNF-α、IL-6、CRP水平均低于治疗前,且黄芪组低于对照组(P<0.05)。结论 足三里穴位注射黄芪注射液联合肺康复训练可改善老年COPD稳定期病人的肺功能和运动耐力,提高血清抗菌肽LL-37水平并改善免疫功能。

抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定

为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。

人源抗菌肽LL-37在毕赤酵母中的高效表达及其活性检测

根据GenBank CAA86115中的LL-37氨基酸序列,选择毕赤酵母偏好密码子,采用SOE方法合成了人源抗菌肽LL-37基因。所合成的LL-37基因全长为141bp,并在其N端引入kex2裂解位点,以保证表达抗菌肽具有天然N端。基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-LL-37。pPICZα-A-LL-37经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌LL-37于发酵上清液,其表达量为206mg/L。表达产物LL-37耐热性强,在100℃条件下40min内抗菌活性不变,煮沸3h以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示LL-37对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌CowanⅠ(Staphylococcus aureus)、致病性大肠杆菌K99(Enteropathogenic E.coli)和鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和1.56μg/mL。

抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用

目的研究人抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的相关作用,为MRSA的预防治疗以及新药物开发应用提供新策略。方法运用微量肉汤稀释法测定LL-37对临床MRSA菌株的最小抑菌浓度;建立96孔板及6孔板生物膜体外模型;通过结晶紫定量法以及激光共聚焦荧光染色法检测LL-37对MRSA生物膜形成的影响。结果微量肉汤稀释法测得LL-37对临床MRSA菌株的MIC为12.5μmol/L。不同浓度LL-37作用后,结晶紫定量法结果表明1/20 MIC亚抑菌浓度的LL-37即可抑制生物膜形成(P<0.01),且抑制率随用药浓度增加也随之提高,在1/4 MIC条件下生物膜形成抑制率可达到63%。与生理盐水对照组相比,激光共聚焦扫描显微镜下可见,用药组生物膜排列稀疏,厚度变薄,组成菌量明显减少。结论低浓度的LL-37能够抑制MRSA生物膜的形成,并且对成熟生物膜结构也具有一定的破坏作用。

Plackett-Burman设计与响应面法优化毕赤酵母产重组抗菌肽LL-37发酵培养基

目的通过优化毕赤酵母产重组抗菌肽LL-37的培养基组成,以最大程度提高重组蛋白产率。方法采用PlackettBurman设计法对培养基中相关影响因素的效应进行评价;然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面(RSM)区域;最后通过中心组合设计RSM实验建立二次回归模型以确定最佳培养基配方。结果经优化后的培养基发酵产重组蛋白水平相较于初始培养基提高了约22%。结论 Plackett-Burman设计和RSM可以很好地对毕赤酵母产重组抗菌肽LL-37的发酵培养基进行优化。

人源抗菌肽LL-37对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠病毒复制及炎症反应的影响

目的探讨人源抗菌肽LL-37对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠病毒复制和炎症反应的影响及其可能的分子机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组(Blank)、模型组(VMC)、LL-37低剂量组(LL-37-L)和LL-37高剂量组(LL-37-H),每组12只。除Blank组外,其他组均采用腹腔注射柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒液构建VMC模型小鼠。于抗菌肽LL-37干预第7天后将小鼠处死并取材。采用苏木素伊红染色观察心肌组织病理学变化;全自动生化仪检测血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度;50%终点法测定心肌组织CVB3病毒滴度;实时定量聚合酶链反应法检测心肌组织中CVB3 RNA表达水平;酶联免疫吸附试验法检测心肌组织炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度;Western blot法检测心肌组织TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Blank组比较,VMC组小鼠心肌组织出现明显炎性损伤,且心肌病理积分显著增加[(3.18±0.33)分vs(0.00±0.00)分,P<0.05];血清中心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白浓度显著上升;心肌组织中CVB3病毒滴度,CVB3 RNA及IL-1β、IL-6和TNF-α浓度,以及心肌组织中TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65等蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与VMC组比较,LL-37-H组小鼠心肌病理积分显著降低[(1.56±0.27)分vs(3.18±0.33)分,P<0.05],并且以上各检测指标均明显降低(P<0.05),而LL-37-L组小鼠以上各指标均无显著性变化(P>0.05)。结论人源抗菌肽LL-37可抑制VMC小鼠心肌组织中CVB3病毒复制和炎症反应,改善心肌损伤,其机制可能与TLR-4/NF-κB通路的抑制有关。

抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。

IFN-γ、sIL-2R、IP-10、LL-37与肺结核类型的关系及对治疗结局的预测价值

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)、可溶性白介素2受体(sIL-2R)、干扰素-γ诱导蛋白10(IP-10)、抗菌肽LL-37与肺结核类型的关系及对治疗结局的预测价值。方法选取我院2018年1月~2019年2月收治的138例肺结核患者作为研究对象,按照肺结核类型分为初治肺结核患者51例(初治组),肺外结核患者47例(肺外组),复治肺结核患者40例(复治组),并根据治疗结局分为有效者、无效者。比较三组、不同治疗结局患者血清IFN-γ、sIL-2R、IP-10、LL-37水平,Pearson分析各血清之间相关性,Logistic回归分析肺结核患者治疗结局的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线及ROC下面积(AUC)分析血清各指标对治疗结局的预测价值。结果复治组血清IFN-γ、sIL-2R、IP-10、LL-37水平高于肺外组、初治组(P<0.05);血清IFN-γ与sIL-2R、IP-10、LL-37呈正相关,sIL-2R与IP-10、LL-37呈正相关,IP-10与LL-37呈正相关(P<0.05);不同治疗结局患者病灶范围存在显著差异(P<0.05);有效者治疗1个月后、治疗3个月后血清IFN-γ、sIL-2R、IP-10、LL-37水平低于无效者(P<0.05);病灶范围、血清IFN-γ、sIL-2R、IP-10、LL-37是肺结核患者治疗结局的重要影响因素(P<0.05);预测治疗结局的AUC:治疗3个月后IP-10>治疗3个月后IFN-γ>治疗3个月后LL-37>治疗1个月后IP-10>治疗3个月后sIL-2R>治疗1个月后sIL-2R>治疗1个月后LL-37>治疗1个月后IFN-γ(P<0.05)。结论血清IFN-γ、sIL-2R、IP-10与LL-37在不同类型肺结核类型患者中表达不同,并能相互影响,均是影响治疗结局的相关因素,具有较高的疗效预测价值。

内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系的构建

新颖的内含肽介导PHB纯化蛋白体系,是一种高效表达、自动切割、纯化方便、费用低廉的蛋白表达纯化体系,有利于蛋白规模化纯化。选用对原核细胞具有毒害作用的小肽——人源抗菌肽LL-37作为纯化对象,通过基因工程技术,构建内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系,并利用该体系纯化LL-37。结果表明,构建的内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系可高效表达LL-37融合蛋白,利用构建的纯化体系能对目的蛋白进行纯化。

新生儿败血症血清中25-羟基维生素D与抗菌肽-37的水平及25-羟基维生素D的影响因素

目的分析新生儿败血症患儿血清25-羟基维生素D与抗菌肽-37(LL-37)的相关性及新生儿25-羟基维生素D的影响因素,为临床治疗新生儿败血症及补充维生素D提供依据。方法采集149例新生儿静脉血,其中76例败血症新生儿为败血症组,73例无败血症新生儿为对照组,检测两组新生儿25-羟基维生素D及LL-37水平,分析两者的相关性及新生儿25-羟基维生素D的影响因素。结果败血症组患儿血清25-羟基维生素D、抗菌肽LL-37水平均低于对照组(P=0.00);败血症组新生儿血清25-羟基维生素D和LL-37呈正相关(r=0.323,P=0.000);对照组新生儿25-羟基维生素D和LL-37无相关性(r=0.206,P=0.080)。单因素分析显示,不同民族、胎龄、出生体重、母亲年龄、母亲学历、孕期补充维生素D情况以及出生季节的25-羟基维生素D水平差异均有统计学意义(P均<0.05);多因素回归分析表明新生儿25-羟基维生素D水平与出生季节、母亲孕期补充维生素D情况以及胎龄相关(P<0.05)。结论新生儿败血症患儿血清25-羟基维生素D和LL-37水平均降低,且两者呈正相关。影响新生儿25-羟基维生素D水平的因素为出生季节、母亲孕期补充维生素D情况以及出生胎龄。

儿童闭塞性细支气管炎支气管肺泡灌洗液基质金属蛋白酶9、抗菌肽37、中性粒细胞与气道炎症程度的关系

目的探究儿童闭塞性细支气管炎(BO)支气管肺泡灌洗液基质金属蛋白酶9(MMP-9)、抗菌肽37、中性粒细胞与气道炎症程度的关系。方法选取河南省儿童医院2018年1月至2019年6月BO病儿42例作为观察组,另选择该院同期支气管异物无并发感染病儿38例作为对照组。均采用纤支镜进行肺泡灌洗,对比不同病情程度病儿支气管肺泡灌洗液MMP-9、抗菌肽37、中性粒细胞含量、气道炎症因子[白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-13(IL-13)、半胱氨酰白三烯(LTS)]水平,分析MMP-9、抗菌肽37、中性粒细胞与儿童BO及气道炎症因子的影响关系或相关性。结果观察组支气管肺泡灌洗液MMP-9、中性粒细胞含量分别为(2701.93±587.08)μg/L、(3.38±0.43)×10^(9)/L,高于对照组的(135.48±44.10)μg/L、(2.76±0.25)×10^(9)/L,抗菌肽37含量为(114.28±24.98)μg/L,低于对照组的(186.06±44.11)μg/L(P<0.05);支气管肺泡灌洗液MMP-9、抗菌肽37、中性粒细胞与儿童BO有密切的影响或关联影响关系(P<0.05);随病情加重,支气管肺泡灌洗液MMP-9、中性粒细胞、IL-17、IL-13、LTS含量呈升高趋势,抗菌肽37呈降低趋势(P<0.05);MMP-9、中性粒细胞与IL-17、IL-13、LTS呈正相关,抗菌肽37与IL-17、IL-13、LTS呈负相关(P<0.05)。结论BO病儿存在呼吸道MMP-9、抗菌肽37、中性粒细胞表达异常,其表达异常程度升高可能会加重气道炎症程度,可为临床诊断、制定治疗方案提供新方向。

脓毒性休克患者抗菌肽LL-37与降钙素原联合检测价值

目的分析血清抗菌肽LL-37和降钙素原(PCT)水平与脓毒性休克患者病情及近期预后的相关性。方法选择90例全身炎症反应综合征(SIRS)患者作为研究对象,根据病情程度的不同分为脓毒性休克组44例和脓毒症组46例,另选择同期轻度感染患者50例设为对照组。比较3组患者外周血清抗菌肽LL-37、PCT、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平以及急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分的差异。应用Pearson相关分析评估血清抗菌肽LL-37、PCT与APACHEⅡ评分、SOFA评分的相关性。随访28 d,根据预后的不同将脓毒性休克患者分为生存组与死亡组,比较2组血清抗菌肽LL-37、PCT水平差异。应用多元Logistic回归分析法分析脓毒性休克患者预后的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清抗菌肽LL-37联合PCT水平对脓毒性休克患者预后的预测价值。结果脓毒性休克组血清抗菌肽LL-37、PCT、hs-CRP、IL-6水平以及APACHEⅡ评分、SOFA评分高于脓毒症组,且脓毒症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒性休克患者血清抗菌肽LL-37、PCT分别与SOFA评分呈正相关(r=0.803、0.826,P=0.024、0.019),也分别与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.784、0.811,P=0.029、0.022)。死亡组血清抗菌肽LL-37、PCT水平高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清抗菌肽LL-37、PCT和SOFA评分均为脓毒性休克患者预后的影响因素(OR=2.913、2.887、2.457,P=0.029、0.036、0.045)。ROC曲线显示,血清抗菌肽LL-37联合PCT预测脓毒性休克患者随访28 d死亡的曲线下面积(AUC)为0.806,灵敏度为89.6%,特异度为82.4%。结论血清抗菌肽LL-37与PCT水平联合检测能有效评估脓毒性休克患者病情并预测近期预后。

血清人抗菌肽LL-37对重症肺炎患者临床转归的预测价值

目的探讨血清人抗菌肽LL-37对重症肺炎患者临床转归的预测价值。方法选取2017年5月至2019年10月该院收治的150例重症肺炎患者作为研究对象,根据入院28 d转归情况(生存或死亡)将其分为存活组(87例)、死亡组(63例)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清LL-37表达水平,采用急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ评分)评估重症肺炎患者病情严重程度,另外收集研究对象性别、年龄、体质量指数(BMI)、吸烟史、高血压比例、糖尿病比例等一般资料并进行组间比较。采用Spearman相关分析重症肺炎患者血清LL-37表达水平与APACHEⅡ评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清LL-37对重症肺炎患者28 d死亡的预测价值;采用多因素Logistic回归分析影响重症肺炎患者28 d生存状况的因素。结果存活组与死亡组在性别、BMI、吸烟史、高血压比例方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与存活组相比,死亡组年龄更大,糖尿病比例、APACHEⅡ评分、血清LL-37表达水平均更高(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,重症肺炎患者血清LL-37表达水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.558,P<0.05);血清LL-37预测重症肺炎患者28 d死亡的曲线下面积(AUC)为0.848,最佳截断值为744.13μg/L,对应的灵敏度、特异度分别为79.40%、81.60%;多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、APACHEⅡ评分≥20分、LL-37高表达均是重症肺炎患者28 d死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论LL-37与重症肺炎患者病情严重程度及预后转归情况密切相关,可用于病情评估及转归情况预测。

抗菌肽LL-37对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的:探讨抗菌肽LL-37对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量LL-37组(0.5 mg·kg^(-1))和高剂量LL-37组(2.0 mg·kg^(-1)),每组12只。除正常对照组外,其他各组大鼠均通过高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DCM模型。模型构建成功后,低和高剂量LL-37组大鼠给予抗菌肽LL-37干预,每天1次,连续6周,而正常对照组和模型组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。监测各组大鼠体质量和空腹血糖(FBG)水平,检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平,心脏超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现,TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,ELISA法检测各组大鼠心肌组织中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制因子α(IκBα)等蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠心肌损伤严重,左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)和体质量明显降低(P<0.05),左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVEDs)、FBG、TC、TG和心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),心肌组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而IκBα蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组和低剂量LL-37组比较,高剂量LL-37组大鼠心肌损伤明显改善,LVEF、LVFS和体质量明显升高(P<0.05),LVEDd、LVEDs、FBG、TC、TG和心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05),心肌组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量LL-37组大鼠以上各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:抗菌肽LL-37可改善DCM大鼠心功能,抑制心肌组织炎症和细胞凋亡,对DCM大鼠心肌损伤具有一定保护作用,并能抑制TLR4/NF-κB信号通路。

氟康唑口服联合克霉唑栓及乳酸杆菌阴道用药治疗外阴阴道假丝酵母菌病对阴道分泌物中抗菌肽LL-37、防御素5水平的影响观察

目的:探究氟康唑口服联合克霉唑栓及乳酸杆菌阴道用药治疗对外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者阴道分泌物中抗菌肽LL-37、防御素5(HD5)的水平影响。方法:选取2019年12月-2020年9月到本院就诊的VVC患者86例。采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,各43例。给予对照组氟康唑片口服及克霉唑栓治疗,观察组在对照组的基础上给予阴道用乳杆菌活菌胶囊联合治疗。比较两组患者停药2、4周的临床疗效;比较两组治疗前及停药2、4周时的症状体征评分、阴道微生态环境(乳杆菌分级)及阴道分泌物中相关因子(抗菌肽LL-37、HD5)水平;比较两组患者治疗期间不良反应发生情况及停药后6个月内的复发情况。结果:观察组的治疗效果优于对照组(P<0.05)。停药2、4周时,两组的临床症状体征评分均明显低于治疗前,且观察组均显著低于对照组(P<0.05)。停药2、4周时,两组乳杆菌分级均较治疗前明显改善,且停药2周时,观察组的乳杆菌分级情况明显优于对照组(P<0.05);停药4周时,两组乳杆菌分级情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。停药2、4周时,两组抗菌肽LL-37及HD5水平均较治疗前明显降低,且观察组停药2周时上述指标水平均显著低于对照组(P<0.05)。两组头晕头痛、恶心呕吐等轻度不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者停药后6个月内复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论:抗真菌药物与乳酸杆菌阴道用药相结合的治疗模式具有起效快,提高机体免疫力,有效预防短期内复发的优势。

抗菌肽LL-37在几种常见口腔疾病中的作用

抗菌肽是一类广泛存在于自然界多种生物体中的小分子多肽,是生物固有免疫系统的重要组成部分。人源阳离子抗菌肽-18是迄今发现唯一来源于人的组织蛋白酶抑制素Cathelicidin家族成员,其可由人粒细胞、上皮细胞、单核细胞等多种细胞分泌,在释放过程中经丝氨酸蛋白酶3切割后产生具有活性的LL-37。LL-37具有抗感染、抗肿瘤、中和内毒素、免疫调节等多种作用,在口腔健康的维系中扮演重要角色。其在龋齿、牙周病及口腔扁平苔藓患者口腔中的水平显著高于健康者,而在口腔鳞状细胞癌患者中显著降低,与这些口腔疾病的发生发展关系密切。未来,应深入研究LL-37在这些口腔疾病中所起的作用,以期为其治疗提供新的理论依据和思路。

抗菌肽LL-37在急诊脓毒症患者早期诊断中的临床意义

目的探讨抗菌肽LL-37在急诊脓毒症患者早期诊断中的临床意义。方法选择2017年12月至2018年3月遵义医学院附属医院急诊抢救室诊断为脓毒症的40例患者作为脓毒症组;选择同期本院体检中心20例健康志愿者作为健康对照组。脓毒症组于确诊后即刻、健康对照组于体检时取外周血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗菌肽LL-37表达,同时检测血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)水平。比较两组抗菌肽LL-37、PCT、CRP水平的差异;采用Pearson相关法分析抗菌肽LL-37与PCT、CRP的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析各项指标单独或联合检测对脓毒症的早期诊断价值。结果脓毒症患者外周血抗菌肽LL-37、PCT、CRP水平均明显高于健康对照组〔LL-37(μg/L):1.34±0.69比0.10±0.06,PCT(μg/L):46.67±39.51比0.03±0.02,CRP(mg/L):129.68±49.83比3.16±2.85〕,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,脓毒症患者抗菌肽LL-37的表达与PCT、CRP水平均呈显著正相关(r1=0.835、r2=0.932,均P<0.01)。ROC曲线分析显示,LL-37、PCT、CRP早期诊断脓毒症的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.885、0.963、0.983,且三者联合诊断的AUC高达0.994,说明三者联合诊断脓毒症的价值大于单独诊断;当三者联合预测概率为0.92时,敏感度为97.5%,特异度为95.0%。结论抗菌肽LL-37在脓毒症患者早期诊断中有一定的临床应用价值,与PCT、CRP联合检测可作为早期脓毒症患者的常规监测指标。

人源抗菌肽LL-37的原核表达及活性鉴定

目的:实现大肠杆菌高效可溶表达人源抗菌肽LL-37。方法:LL-37基因克隆至原核载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。运用相关生物信息学软件分析重组蛋白Trx-LL-37的理化性质、亲/疏水性、蛋白质二级结构及其可溶表达概率。实验还考察了不同诱导温度对重组蛋白可溶表达比例的影响。结果:生物信息学分析显示,Trx-LL-37分子量21.5kD,理论等电点6.3,物理性质稳定,二级结构简单,具有可溶表达倾向。重组蛋白最佳诱导温度为17℃,与37℃相比,可溶表达比例由37.2%提高至50.2%,并且总表达量也提高了5%左右。抑菌结果显示纯化产物对多种常见细菌的生长具有抑制作用。结论:可采用融合方式通过原核系统高效可溶表达LL-37,为LL-37的功能研究打下基础。

人抗菌肽LL-37对小鼠皮肤烫伤MRSA感染活性作用研究

目的评价人抗菌肽LL-37对小鼠皮肤烫伤耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染模型的治疗作用。方法建立小鼠皮肤烫伤MRSA感染模型。随机分为三组:LL-37组、生理盐水组、庆大霉素组,观察不同组小鼠的大体状况;选取3、5、9、14 d测定小鼠烫伤感染处的皮肤菌负荷,观察创面愈合情况以及组织学变化,评价人抗菌肽LL-37的抗菌活性作用。结果给予LL-37治疗后,LL-37组第3天和第5天创面皮肤菌负荷数[(6.89±0.17)和(5.57±0.32)Lg(CFU/g tissue)]均明显低于生理盐水组[(8.27±0.31)和(7.86±0.39)Lg(CFU/g tissue)],差异有统计学意义(P<0.05)。第9天,LL-37组菌负荷大幅度降低[(3.66±0.14)Lg(CFU/g tissue)],比生理盐水组[(6.91±0.26)Lg(CFU/g tissue)]低3.3 Lg(CFU/g tissue),差异有统计学意义(P<0.05)。相比生理盐水组,LL-37组创面面积缩小显著,愈合率统计结果与庆大霉素组差异无统计学意义(P>0.05)。组织病理学结果显示LL-37组创面愈合良好。结论抗菌肽LL-37能够抑制烫伤创面MRSA的定植与增长,控制感染的发展,对小鼠皮肤烫伤MRSA感染具有良好的治疗作用。

hCAP-18/LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响

目的探讨抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对巨噬细胞RAW264.7活化功能的影响。方法将重组质粒pcD-NA4/Myc-His-hCAP-18/LL-37瞬时转染RAW264.7细胞,MTT法检测细胞的增殖活性;中性红吞噬试验检测细胞的吞噬能力;RT-PCR法分析细胞活化相关分子CD80、CD86、TLR4及细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA的转录。结果 hCAP-18/LL-37基因转染可促进经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理的RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬能力(P<0.05);可上调RAW264.7细胞CD80、CD86、TLR4、IL-1β、TNF-α基因mRNA的转录水平。结论 hCAP-18/LL-37基因转染可通过促进RAW264.7细胞增殖活性、吞噬能力及活化相关分子表达,调控巨噬细胞的活化功能。