中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析

目的了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征。方法应用抗菌毛蛋白2（fim2）和3（fim3）单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型，并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析；同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fim3基因，并对这些PCR产物进行DNA测序分析。结果研究表明，与多克隆抗体分析结果相比较，单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同，其余菌株的结果均一致。研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2＆3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型。在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2＆3型为主，随着大范围的百日咳疫苗接种，l临床分离菌株中fim3型血清型细菌所占的比例逐渐增多。分析菌株中fim2和fim3的基因型以fim2-1（92．5％）和fim3-A（95．0％）亚型为主；18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A，而其他两株疫苗株的基因型均为fim2—1和fim3-A。在2000年以后，分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株，这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种，百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异。结论本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性。对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析，为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础。

上海市虹口区中小学生和成人百日咳抗体水平监测

目的了解上海市虹口区中小学生和成年人群中百日咳抗体水平,为预防控制百日咳提供依据。方法随机抽取中小学生214人,成年人85人,孕妇24人,应用酶联免疫吸附试验,检测中小学生和成年人(包括孕妇)百日咳全抗体;调查青少年百日咳疫苗免疫史和持续2周及以上咳嗽史。对百日咳抗体水平、抗体阳性率和高抗体水平进行统计分析。结果百日咳全抗体几何平均滴度水平(GMT)29.85 U/mL,人群百日咳全抗体阳性(IgG≥50 U/mL)率37.15%,总人群百日咳高抗体水平(IgG≥100 U/mL)阳性率17.65%。各年龄组百日咳全抗体GMT、抗体阳性率和高抗体水平阳性率均有明显差异,且随年龄增长均呈明显上升趋势。社区人群百日咳抗体水平明显高于孕妇和中小学生。1年内有持续2周以上咳嗽史的中小学生百日咳全抗体GMT、抗体阳性率和高抗体水平均明显高于无2周以上咳嗽史者。结论虹口区中小学生和成年人群中可能存在被漏诊或未发现的百日咳感染病例,现行百日咳疫苗免疫程序对青少年持久的保护作用不够,有待进一步开展医院/社区百日咳病例的前瞻性主动监测,为中小学生和成年人群加强接种百日咳疫苗提供科学依据。

百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化方法的建立及免疫原性的初步评价

目的建立一种适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白(fimbriae, Fim)纯化新工艺,并对其免疫原性进行初步评价。方法百日咳黏附素(pertactin, PRN)流穿液经一步盐析和一步复合型阴离子Capto Adhere疏水层析流穿法进行纯化,以纯度和回收率为检测指标,对硫酸铵盐析质量体积比和疏水离子层析条件进行优化,进行连续3批生产验证工艺稳定性。检验精纯Fim蛋白毒性,将合格Fim蛋白与百日咳其他组分配伍成五组分无细胞百日咳疫苗(acellular component pertussis vaccine, acPV),免疫小鼠,评价免疫原性。结果成功建立了从PRN流穿液中纯化Fim蛋白的方法。该工艺制备的3批Fim蛋白纯度(>95%)高,回收率均在60%以上,具有良好的重复性,且Fim蛋白符合特异性毒性试验要求。5μg Fim蛋白免疫小鼠后在7、28、35和42 d血清中的抗Fim抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)分别为10.6、97.7、102.9、192.6 IU/mL,与生理盐水组相比具有统计学差异(P<0.05)。结论利用QbD理念建立了适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化新工艺,且蛋白具有良好的免疫原性,未来有望作为组分百日咳疫苗的候选抗原。