产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus,plantarum,L.plantarum)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac—STa—LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Westem-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac—STa—LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为121b。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。

猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac粘附抗原的核苷酸序列分析

本文对国内流行的猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac抗原的结构基因的核苷酸序列进行了测定。该基因由849对核苷酸组成,编码了283个氨基酸的蛋白亚单位及21个氨基酸的信号肽。与国外报道的K88ac序列的不同是我们发现一个碱基的点突变,导致在抗原决定簇内一个氨基酸的改变。从核苷酸序列推导出的氨基酸序列与另两种亚型进行了比较。

大肠杆菌黏附素蛋白与热稳定肠毒素融合基因植物表达载体的构建

利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K 88ac与热稳定肠毒素ST II的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pB in48中,成功地构建了植物重组表达质粒pB in48-K 88-ST,并将其转化到农杆菌EHA 105中,为K 88ac-ST II基因的进一步研究奠定了基础。