不同感染方式对狂犬病病毒在人二倍体细胞中增殖的影响

目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国药典》(2020版)检测方法检测收获液病毒滴度及原液抗原含量。结果带毒传代组的收获液病毒滴度为(6.40±0.33)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.8±1.5)IU·mL^(-1);混种传代感染组的收获液病毒滴度为(6.35±0.18)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.3±2.1)IU·mL^(-1);直接吸附感染组收获液病毒滴度为(4.71±0.39)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(12.6±2.0)IU·mL^(-1)。结论试验证明狂犬病病毒PV株采用混种传代感染的方式感染人二倍体细胞MRC-5细胞,病毒增殖效果良好,毒种代次明确,工艺操作简单,更适合于狂犬疫苗的生产。

新型冠状病毒疫苗受体结合域抗原含量检测方法建立

目的建立通用的新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)受体结合域(RBD)抗原含量检测方法。方法以新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)RBD的重组抗体为标准品,先将疫苗中的蛋白解吸附,采用酶联免疫吸附试验检测疫苗中的RBD蛋白含量,并验证方法的线性、定量下限、准确度、精密度和稀释可靠性,同时对部分上市新冠疫苗进行检测。结果3次试验标准曲线的决定系数(R2)分别为0.9966,0.9958,0.9975(n=6);定量下限为7.81 pg/mL;批内和批间准确度均值为质控标示值的91.98%~110.16%(精密度试验)和93.68%~101.01%(稀释可靠性试验),X,Y,Z公司的加样回收率分别为86.81%,82.97%,105.41%,测定值的变异系数均小于10%。X,Y,Z公司新冠疫苗中RBD蛋白的平均含量分别为302.96 pg/mL、1010.80 pg/mL、42.92μg/mL。结论该方法的方法学验证指标均符合2020年版《中国药典(四部)》通则9012指导原则相关要求,可用于多种技术路线新冠疫苗的RBD抗原含量检测。

检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用

为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较。该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段。

仔猪大肠杆菌·C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺

[目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可产生较高含量的纤毛抗原;当接种剂量为1%～2%,C型产气荚膜梭菌C59-2菌株在35℃条件下培养16～20 h,可产生大量致死性毒素。[结论]该研究为研制具有较好效果的仔猪红痢、黄痢预防疫苗提供了依据。

口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系

为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5μg时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。

乳腺囊性增生病癌变过程中部分因素变化的意义

检测乳腺囊性增生病（ＦＣＤ）经不典型增生到癌变部分因素的变化。结果提示：从因明显ＦＣＤ症状活检至癌变为２～１０年；从Ⅱ级以上不典型增生到临床癌变需２～７年；癌变率为３．１％。ＦＣＤ患者存在性激素分泌调控失常，血浆雌激素和催乳素含量增加，导致上皮细胞增生。乳腺一般性增生细胞的ＤＮＡ含量和超微结构与正常乳腺上皮细胞相似；无肿瘤相关抗原及异常基因产物表达。而发生在一般性增生基础上的不典型增生则呈现细胞基因物质ＤＮＡ含量增加，部分为超４Ｃ的多倍体细胞；同时出现细胞膜和细胞核超微结构异常；雌激素受体含量增加，对性激素的依赖性和敏感性增强；部分不典型增生细胞出现胚胎性肿瘤相关抗原和异常基因产物表达。随不典型增生程度加重至乳腺癌，上述诸因素的变化趋势具有明显规律性。提示ＦＣＤ上皮细胞从一般性增生经不典型增生至乳腺癌为细胞生物学连续逐渐变化的过程。部分不典型增生细胞中具有癌倾向的细胞生物学行为异常和表型变化与乳腺癌发生密切相关。

增殖细胞核抗原表达及细胞核DNA含量在胃癌早期诊断中的意义

应用免疫组化ＬＳＡＢ法及流式细胞分析技术（ＦＣＭ），对１２例早期胃癌，１５例胃癌前病变（８例胃粘膜中～重度不典型增生，７例轻度不典型增生）及６例正常胃粘膜增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及细胞核ＤＮＡ含量进行了测定。着重探讨了胃粘膜癌变过程中ＰＣＮＡ的表达及ＤＮＡ含量变化的意义，试图为胃癌的早期诊断提供客观依据。结果表明：ＰＣＮＡ标记指数（ＬＩ）随胃粘膜病变程度的加重呈递增趋势。中～重度不典型增生与早期胃癌之间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ＤＮＡ非整倍体检出率比较，早期胃癌明显高于胃粘膜轻度不典型增生组（Ｐ＜０．０１）。

胃癌淋巴结转移与c-erbB-2蛋白、PCNA、DNA含量间关系的研究

目的:为探索胃癌淋巴结转移与c-erbB-2、PCNA(增殖细胞核抗原)、DNA含量间的关系。方法:应用免疫组化ABC法和流式细胞术DNA分析技术,检测胃癌标本64例,其中淋巴结转移组40例,淋巴结未转移组24例,结果:c-erbB-2蛋白表达两组阳性率分别为45％、20.8％(P<0.05);PCNA表达阳性率分别为51.1±18.7％、31.6±19.6％(P<0.01);DNA异倍体率分别为55％、20.8％(P<0.05)。结论:以上结果表明淋巴结转移组胃癌的c-erbB-2表达过度,产生大量生长因子或生长因子受体,促进细胞有丝分裂,处于增殖状态的细胞增多,致PCNA阳性率高,DNA异倍体率高,细胞间粘着力降低,致淋巴结易发生转移,生物学恶性度大,预后差。

喉癌细胞PCNA表达和DNA含量与临床预后的关系

目的 探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达和DNA含量对喉癌临床生物学特征及预后的关系。方法 用免疫组化SP方法和自动图像分析仪检测正常喉粘膜、喉鳞癌的PCNA和DNA指数 (DI) ,结合临床随访资料进行分析。结果 喉鳞癌PCNA的阳性表达率为 10 0 % ,与正常喉组织有显著差异 (P <0 0 1) ,PCNA阳性表达强度和DNA指数随肿瘤分化程度的降低而相应增高 (P<0 0 5 )。两指标较高者生存时间较短 ,预后较差 (P <0 0 5 )。

乳腺癌雌激素受体、孕激素受体和癌胚抗原及其与DNA含量关系的研究

应用PAP方法对50例乳腺癌、10例乳腺纤维瘤和10例乳腺小叶增生症石蜡切片进行雌激素受体、孕激素受体和癌胚抗原检测,其中30例乳腺癌应用JX-1医用图象分析系统测定了细胞核DNA含量。结果表明:(1)三种生物学标志物在乳腺癌的表达率分别为68％、66％和64％;(2)三种生物学标志物的表达与乳腺癌分化程度密切相关;(3)三种生物学标志物与乳腺癌细胞核DNA含量具有良好的相关性。提示:癌胚抗原在乳腺癌有较高的表达率,可望作为乳腺癌早期诊断和鉴别诊断的辅助手段;三种生物学标志物和D-NA含量能够反映乳腺癌的分化程度,均可作为评估预后的指标。

DF-1细胞替代CEF细胞测定IBDV液抗原含量和血清中和抗体效价的研究

为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定了6批次IBDV BJQ902株病毒液抗原含量和用不同剂量ND、IB、IBD三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+BJQ902株)免疫SPF鸡血清和未免疫SPF鸡血清的中和抗体效价。结果表明:6批次病毒液病毒含量为1×10^(7.7)~1×10^(8.1)TCID50/0.1 mL,两种细胞对同一批次病毒样品的测定结果一致,重复测定无差异;IBDV阳性血清样品中和抗体效价为8~17 lb,两种细胞对同一血清样品中和抗体效价的检测结果无差异。说明DF-1细胞可以替代CEF细胞作为培养基质,用于IBDV液抗原含量及血清中和抗体效价的测定。

鼻咽癌细胞增殖活性与放射敏感性相关关系的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞增殖活性指标有丝分裂指数(mitotic index,MI)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti—gen,PCNA)、p53蛋白、DNA含量和癌细胞核形态参数与放射敏感性的关系。方法:收集51例放疗前鼻咽癌组织标本,HE染色作病理组织学诊断和MI计数;免疫组化法检测PCNA和p53蛋白表达情况;Feulgen染色和图像分析法检测鼻咽癌DNA含量和细胞核的形态定量参数。结果:51例鼻咽癌组织中,完全消退组MI高于残留组(P＜0．05);PCNA和p53蛋白表达阳性音分别有50例(98．0%)和46例(90．2%),高表达者分别有16例(31．4%)和22例(43．1%);PCNA和p53蛋白的阳性表达水平越高,则鼻咽癌对放射治疗越敏感,放疗后鼻咽局部癌肿完全消退率越高(P＜0．05);PCNA和p53蛋白同时高表达者比单一指标高表达者,对其放射敏感性更高(P＜0．05);鼻咽癌完全消退组DI、DNA异倍体细胞所占百分率、细胞核形态参数面积、周长和直径均比残留组高。结论:MI、PCNA、p53蛋白、DNA含量和癌细胞核形态参数是反映鼻咽癌放射敏感性和预测其近期疗效的重要指标。

重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液性质研究

目的进行重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原原液二聚体含量及性质研究,确定LcrV原液的相关质控标准。方法在不同缓冲体系(0.85%NaCl(NS)、20 mmol/L PBS),不同蛋白浓度(2.0、1.5、1.0、0.5、0.1 mg/mL)及不同保存温度(4℃、-20℃、-70℃)条件下保存LcrV抗原,采用SDS-PAGE和HPSEC方法定期检测LcrV二聚体含量及纯度。将连续三批检定合格的LcrV抗原原液进行质谱相对分子质量测定、等电点测定、N末端氨基酸序列测定、圆二色(CD)谱、HPLC肽谱及氨基酸组成分析,研究LcrV抗原的相关性质。结果随着保存时间的延长LcrV抗原二聚体含量增加,低温保存时二聚体不易大量形成。在-20℃和-70℃条件下,NS保存的LcrV抗原比PBS体系保存稳定,而在4℃条件下NS保存的LcrV抗原容易降解。LcrV抗原高浓度保存容易发生聚合。LcrV抗原在低质量浓度(0.1 mg/mL)保存时免疫学活性明显下降。质谱检测到LcrV单体和二聚体共同存在,且与理论相对分子质量一致。LcrV原液检测等电点范围为4.6～6.3。N末端测序、CD谱、HPLC肽谱图及氨基酸组成分析与理论结果一致。结论 LcrV抗原原液保存条件确定为:NS体系,蛋白质量浓度1.0～2.0 mg/mL,-20℃以下冻存。制备的LcrV抗原各项检测结果与理论结果一致,抗原性质稳定。

用火箭电泳法检测人用狂犬病疫苗半成品抗原含量初探

用火箭电泳法（ＲＩＥ）检测了５批ａＧ株地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗半成品（未加吸附剂）的抗原含量。结果表明，ＲＩＥ法快速、简便、准确。峰高与浓度的线性相关系数ｒ〉０．９９５０，待检疫苗与标准品的剂量反应曲线高度一致，试验的灵敏度为０．１５ＩＵ／ｍｌ，重复性好，５次结果的变异系统ＣＶ％≤５．７４％。因此。

鼻咽泡状核细胞癌DNA含量与PCNA计数的研究

应用流式细胞仪和免疫组化技术对１２例鼻咽泡状核细胞癌和３３例低分化鳞癌的ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行分析。结果显示：泡状核细胞癌的ＤＮＡ指数、非整倍体率和ＰＣＮＡ阳性率均高于低分化鳞癌，表明泡状核细胞癌分化程度低于后者。并初步探讨ＤＮＡ与ＰＣＮＡ所反映的泡状核细胞癌生长生物学特征与预后的联系。Ｐ＜０．０１２．３鼻咽泡状核细胞癌和低分化鳞癌的ＤＮＡ倍体测定见表２。表２泡状核细胞癌和低分化鳞癌ＤＮＡ倍体的测定与低分化鳞癌相比Ｐ＜０．０１３讨论众所周知，ＤＮＡ异倍体是恶性肿瘤的特征，而ＰＣＮＡ可作为细胞增殖状态的一个指标［３］。本文采用流式细胞仪和ＰＣＮＡ免疫组化技术同时对鼻咽泡状核细胞癌的ＤＮＡ含量和ＰＣＮＡ计数进行研究，发现泡状核细胞癌的异倍体发生率为９１．７％，呈现非整倍体或四倍体核型，明显高于低分化鳞癌，后者在ＤＮＡ二倍体／近二倍体核型和非整倍体／四倍体核型的分布大致相等，其ＤＩ值和ＰＣＮＡ阳性率远低于泡状核细胞癌。宗永生等［４］曾报道泡状核癌细胞群体１２例中７例癌细胞众数的ＤＮＡ大于二倍体含量，８例泡状核细胞癌癌细胞总数中其众数癌细胞位于二倍体和四倍体之间，也说明其ＤＮＡ含量大于二倍体，本?

慢性乙型肝炎肝组织学分级与血清HBV DNA及HBeAg定量的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎肝内炎性变化与HBVDNA定量及HBeAg定量的关系 ,为临床正确判断病期和治疗提供依据。方法 应用荧光定量PCR法和放免法 ,分别对 10 2例慢性乙肝患者血清中HBVDNA和HBeAg含量进行定量检测 ,同时采用常规 1s肝穿刺活检法行肝穿病理组织学检查。结果 10 2例乙型肝炎患者肝内炎症组织学分级与HBVDNA定量无相关性。 4 5例HBeAb阳性患者的肝内炎症组织学分级与HBVDNA定量呈明显的相关。 5 7例HBeAg阳性患者肝内炎症组织学分级与HBVDNA无明显的相关 ,但有降低的趋势 ,肝内炎症组织学分级与HBeAg定量显著相关。结论 在非免疫耐受期的慢性乙肝患者 ,血清HBVDNA复制水平与肝内炎症活动程度相关 ,肝内炎症患者与血清HBeAg含量密切相关 ,提示检测慢性乙型肝炎患者血清HBV

东菱精纯克栓酶对癌细胞裸鼠体内增殖能力的影响

目的：观察东菱精纯克栓酶（ＤＦ５２１）对裸鼠体内人胃癌及鼻咽癌细胞增殖能力的影响。方法：用免疫组织细胞化学及图像分析定量的方法，研究ＤＦ５２１处理组和对照组之间，裸鼠移植瘤癌细胞ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的差异。结果：胃癌处理组，癌细胞的ＤＮＡ含量及ＰＣＮＡ表达均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）；鼻咽癌处理组，癌细胞ＤＮＡ含量及ＰＣＮＡ表达和对照组之间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论：ＤＦ５２１对裸鼠体内人胃癌细胞的增殖能力有明显的抑制作用。

应用流式细胞术研究肿瘤细胞在不同细胞周期中癌胚抗原...

应用流式细胞术,分析了4株肿瘤细胞(BCAP-37,BCG823,KATO,LOVO)在不同细胞周期中癌胚抗原(CEA)的含量变化。结果显示。不同细胞周期CEA含量有极显著差异(P<0,001),S和G2M期CEA含量比GOGI期显著增高。说明,在能够产生CEA的恶性肿瘤,肿瘤生长越快,恶性程度越高,CEA含量也越高。因而推想在能够产生CEA的组织中,CEA含量与细胞的增殖状态有关。处于S和G2M期的细胞比例越高,组织中CEA含量也越高。

对抗原激活红细胞天然免疫反应主干道血脂含量变化的实验研究

目的研究抗原激活红细胞天然免疫反应主干道对血脂含量变化的影响。方法血液选取2014年5月至2016年5月在本院体检合格的健康人300例，分离出血浆、全血细胞以及白细胞，抗原采用酵母菌加卡介苗，分别激活免疫反应全血细胞、无血浆的免疫反应细胞以及未激活的免疫反应细胞，各组血脂含量的变化比较。结果酵母菌联合卡介苗能激活血液的免疫反应，发现激活免疫反应细胞的血脂明显高于无血浆激活的免疫反应细胞，激活后的免疫反应全血细胞TC、HDL分别为（0．29±0．07）mmol/L、（0．008±0．0004）mmol／L，与激活的免疫反应白细胞相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论天然免疫反应主干道中红细胞对调控免疫反应以及血脂含量起到重要的调控作用。

标准SDS-PAGE图法测定大豆11S抗原蛋白含量的研究

分离纯化获得高纯度的大豆11S抗原蛋白后,以100μg/ml为浓度梯度差,制备100~2 000μg/ml浓度的11S抗原蛋白标准溶液,用SDS-PAGE电泳法制得梯度清晰的11S抗原蛋白浓度标准图。将待测定样品SDS-PAGE电泳后,通过与标准图比较可方便读出样品中11S抗原蛋白的浓度C0,并结合运用公式W=2.15×10-5.C0×100%,可快速计算出样品中11S抗原蛋白的含量。该测定方法具有方便、准确、灵敏度高等特点,适合进行大规模样品11S抗原蛋白含量的测定。