人血管内皮生长因子合成肽的设计与合成

目的：预测血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）连续性表位，利用ＶＥＧＦ合成肽制备抗ＶＥＧＦ合成肽单克隆抗体。方法：根据ＶＥＧＦ１８９氨基酸序列，采用抗原指数方案及Ｇｏｌｄｋｅｙ软件，预测ＶＥＧＦ表位，确定合成肽序列，在４３０Ａ固相自动肽合成仪上合成。结果：ＶＥＧＦ氨基端１～２６残基被确定为合成肽序列并合成。结论：ＶＥＧＦ抗原表位的预测与合成，为利用ＶＥＧＦ合成肽制备抗ＶＥＧＦ合成肽单克隆抗体提供了一条有效的途径。

用合成多肽分析细粒棘球蚴AgB抗原亚单位的反应性表位

目的通过合成多肽分析细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原的主要反应性表位区域。方法用ELISA法分析来源于细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4亚单位基因序列的5个人工合成多肽KK36、RK30、B4-1、B4-2和B4-3,及上述3个亚单位重组抗原在血清抗体检测中的反应性,共检测细粒棘球蚴病(115例)、多房棘球蚴病(54例)、囊尾蚴病(22例)患者和健康人(18例)血清209份。用受试者工作特征(ROC)曲线分析合成多肽和重组抗原在血清检测中的诊断效率。结果多肽KK36和RK30诊断细粒棘球蚴病的敏感性分别为89.2%和85.0%,特异性为62.5%和59.4%,诊断效率分别为84.8%和80.4%,与AgB1(84.5%)和AgB2(81.2%)抗原诊断效率相近,拟合AgB1和AgB2重组抗原的ROC曲线。来源于AgB4抗原的3个多肽B4-1、B4-2和B4-3检测细粒棘球蚴病患者血清的诊断效率分别为49.4%、57.9%和77.4%。其中,B4-3的反应性最佳,B4-2也有一定的反应性。结论 KK36和RK30完整地包含了AgB1和AgB2抗原的反应性表位区域。B4-2和B4-3多肽均含有AgB4抗原的部分表位区域,推测AgB4抗原的表位区域位于序列的中后段。

抗人c-erbB2单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定。方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株。用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株。该mAb与已知的c erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应。用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性。结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb。

口蹄疫合成肽疫苗研究进展

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁世界畜牧业发展和国际进出口贸易的重大传染病。尽管FMD传统疫苗在免疫效力上具有一定优势,但其自身仍存在诸多弊端及隐患。随着分子生物学技术的飞速发展,及其在兽医领域不断取得的创新性应用,FMD合成肽疫苗作为新型基因工程疫苗的一种,以其具有更为广谱的特异性、更加安全稳定、经济实用等特点,现已成为FMD研究领域的主要热点及方向。论文从抗原位点的选择、空间构象的研究、疫苗载体的探索以及免疫佐剂的优化等多方面对FMD合成肽疫苗的发展过程及其研究进展进行了深入探讨,旨在为FMD合成肽疫苗的进一步发展以及其他病原微生物合成肽疫苗的深入研究提供借鉴。

合成肽ELISA试验中肽抗原序列的筛选

讨论了在研究合成肽ELISA诊断试验中,选择适当的抗原表位氨基酸序列作为多肽合成的序列模板时,需要考虑的主要因素,以提高ELISA试验过程中的合成肽抗原的包被效果。

多肽研究XX：丙型肝炎病毒（HCV）合成多肽的抗原性及线性抗体谱

依据蛋白质的亲水性、可亲性、柔韧性、抗原性、电荷分布及ＨＰＬＣ滞留系数等六种性质，使用“Ｇｏｌｄｋｅｙ”软件系统给出了ＨＣＶ－ＢＫ各蛋白抗原决定簇预测曲线，共设计、合成１５个多肽片段：Ｐ１（４７５～４９５），Ｐ３（４４９～４６８），Ｐ４（６５８～６６３），Ｐ５（６４５～６６３），Ｐ６（４８４～４８９），Ｐ７（４７５～４８９），Ｐ１５（６５５～６６２），Ｐ１６（２３０～２３７），Ｐ１７（２２５～２３７），Ｐ１８（１２２０～１２４０），Ｐ１９（１６９４～１７３５），Ｐ２４（１２３０～１２４０），Ｐ２５（１４８２～１４９３），Ｐ２６（３８４～３８９）和Ｐ２７（２３５５～２３８９）。发现ＮＳ１区％和ＮＳ４区Ｐ１９有很强的抗原性。用其检测ＰＴ－ＨＣ，阳性率分别为６０％和６３％

用合成多肽免疫制备人α-半乳糖苷酶A单克隆抗体

目的:获得效价高的、特异性强的抗人α-半乳糖苷酶A(α-GalA)单克隆抗体,用于法布莱氏病的诊断。方法:分析并合成人α-GalA的优势抗原表位,合成多肽,将其与载体匙孔虫戚血蓝蛋白偶联,免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基筛选杂交瘤细胞株;用酶联免疫、SDS-PAGE、Western印迹和染色体核型分析等方法对杂交瘤细胞及其产生的单抗进行鉴定。结果与结论:筛选到1株杂交瘤细胞株,获得了高效价、特异性强、亲和力高的抗人α-GalA的单克隆抗体,抗体的亚型为IgG1亚型。

非洲猪瘟病毒P72蛋白合成肽疫苗的构建及其免疫效力评估

【目的】构建非洲猪瘟病毒CAS19-01/2019株(GenBank登录号:MN172368.1)结构蛋白P72的合成肽疫苗,通过免疫小鼠评估合成肽疫苗的免疫效力。【方法】利用ProtParam、SOPMA等软件分析P72蛋白的理化性质与结构信息,通过ABCpred、SVMtrip、IEDB预测P72蛋白的T细胞与B细胞抗原表位,筛选出显著的表位多肽区域,合成多肽辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫小鼠,检测免疫组小鼠产生的特异性抗体、T淋巴细胞亚群、脾脏淋巴细胞增殖、细胞因子白介素4(IL-4)、IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白(IgG),从体液免疫与细胞免疫角度评估合成肽的免疫效力。【结果】综合分析得出P72蛋白是稳定性亲水蛋白,二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲分别占19.35%、5.42%、25.08%和50.15%。筛选出了P72蛋白的8个优势抗原表位,626-634、520-528、298-306、203-211位氨基酸处为T细胞抗原表位,587-606、232-251、110-129、39-58位氨基酸处为B细胞抗原表位。整合优势表位合成2个多肽P72-1与P72-2,首次免疫小鼠14 d时可检测到P72-1与P72-2的特异性抗体,首免后28 d达到最高值,其最高抗体效价分别为1∶25600与1∶12800;免疫后小鼠T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)显著上升(P<0.05);脾脏淋巴细胞增殖试验结果显示,免疫组淋巴细胞数量均极显著升高(P<0.01);细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ含量均极显著增加(P<0.01)。【结论】本研究成功研制2种合成肽疫苗,在免疫效力上P72-2高于P72-1,二者都能产生高水平的特异性抗体,刺激脾脏淋巴细胞增殖,诱导产生细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ,本研究为非洲猪瘟合成肽疫苗研制奠定技术基础。

VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定

目的 筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽 ,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性。方法 以抗 VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机 7肽、12肽库进行筛选。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体 ,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的 7肽和 12肽以及人工合成 7肽对人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)生长的抑制作用。结果 对肽库进行 3轮筛选后 ,噬菌体克隆具有良好的富集效果。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到 10 0 % ,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列 :GWYYDAL、VASAVFYSALVE。这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗 VEGF抗体。噬菌体表达的 7肽和 12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用。由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用 ,人工合成的 7肽 (GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用。结论 从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位 ,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础。

ZNF185基因抗原表位分析及合成肽免疫避孕效果研究

目的:预测ZNF185基因的抗原表位,并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应。方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数。合成携带ZNF185抗原表位的多肽,进行小鼠免疫实验,检测小鼠血清中IgG抗体水平、交配率、妊娠率及每窝产仔数,并观察生殖器官是否发生病变。结果:筛选ZNF185两段氨基酸序列合成多肽,该多肽能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,实验组小鼠交配率和妊娠率显著低于对照组,生殖器官并无发生明显的组织病理学变化。结论:ZNF185具有一定的抗生育作用。