血型CD59基因在胰腺癌中的表达及临床意义

目的运用生物信息学技术分析CD59血型基因在胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAAD)中的表达水平以及临床意义。方法通过GEPIA、UALCAN和HPA数据库分析PAAD中CD59的mRNA和蛋白表达水平。通过TIMER数据库分析CD 59在PAAD中与免疫细胞浸润的相关性。通过UALCAN数据库分析CD59参与信号通路影响PAAD的进展。通过STRING数据库分析CD59表达与上下游蛋白的相互作用。基于单因素Cox,多因素Cox回归结果分析CD59血型与PAAD预后相关。结果与癌旁组织相比,CD59在PAAD中的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),与CD59低表达PAAD患者相比,高表达CD59的患者预后差。CD59在PAAD中表达水平与CD8+T细胞,巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞呈正相关(P<0.05)。基于单因素Cox和多因素Cox回归分析高表达CD 59是PAAD预后危险因素。KEGG富集分析占主导地位的是补体和凝血级联通路,GO富集分析占主导地位的是蛋白质加工的调控信号通路。结论CD59血型基因在PAAD中呈现高表达,与PAAD的发生、发展和预后不良相关,有望作为PAAD诊断、预后判断和治疗靶点。

糖基化CD59在妊娠期糖尿病精准诊断中的研究进展

近年来,妊娠期糖尿病(GDM)患病率显著升高,引发产妇及其子代多种不良结局,而早期诊断和良好控制血糖可显著改善妊娠结局。目前,GDM诊断主要依据口服葡萄糖耐量试验(OGTT),但临床应用时存在诸多不足。新型生物学标志物糖基化CD59是一种补体调节蛋白的糖基化产物,可在体液中稳定存在,与血糖水平呈线性相关,具有测试简便、可重复性佳等优点,且已开发出可稳定使用的试剂盒,在GDM的早期诊断、标准诊断和妊娠结局预测等方面均显示出良好的价值。

外周血CD59,LGR5和CK7水平表达对宫颈癌前病变进展风险的预测价值研究

目的 探讨联合检测外周血CD59,血富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(leucine-repeat-rich G-protein coupled receptor 5,LGR5)和细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)对宫颈癌前病变进展风险的预测价值。方法 回顾性分析2019年1月~2022年1月西安市第三医院收治的342例宫颈癌前病变患者的临床资料,根据病情进展情况分为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias, CIN)Ⅰ组(n=89),CINⅡ组(n=128),CINⅢ组(n=65)和宫颈癌组(n=60)。统计四组一般资料,CD59,LGR5和CK7,Logistic回归方程分析癌前病变进展至宫颈癌影响因素,绘制决策分析(decision curve analysis,DCA)曲线分析CD59,LGR5和CK7联合临床获益度,绘制临床影响曲线(clinical impact curve,CIC)分析在各个阈概率下,CD59,LGR5和CK7联合预测价值与实际情况符合度。结果 宫颈癌组、CINⅢ组、CINⅡ组和CINⅠ组患者HPV感染率(50.00%,7.70%,1.56%,0.00%)及外周血CD59蛋白(55.35%±6.38%,46.17%±5.12%,42.24%±4.13%,38.35%±4.02%),LGR5基因(0.91±0.25,0.38±0.08,0.25±0.06,0.15±0.04),CK7基因(10.12±3.04,7.96±1.55,7.12±1.48,6.50±1.36)表达水平比较,宫颈癌组> CINⅢ组> CINⅡ组>CINⅠ组,差异具有统计学意义(χ^(2)=118.290,F=165.265,567.350,51.982,均P <0.05);Logistic回归显示,CD59(OR:3.483,95%CI:1.614~7.518),LGR5(OR:5.241,95%CI:2.689~10.214),CK7(OR:4.078,95%CI:1.461~11.742)水平是癌前病变患者进展至宫颈癌的高危因素(P <0.05);DCA曲线显示,在0.1~0.45范围内,LGR5,CK7和CD59联合应用具有更高临床获益度;CIC曲线显示,横轴从0.4后,LGR5,CK7和CD59联合预测价值与实际情况具有较高的符合率。结论 LGR5,CK7和CD59是影响癌前病变进展至宫颈癌高危因素,三者联合或可成为预测患者临床获益有效方案,有利于减少宫颈癌发生,增加患者净获益。

急性加重期特发性间质性肺炎患者血清CD59、Gremlin-1表达及与近期预后的相关性

目的研究急性加重期特发性间质性肺炎(IIP)患者血清CD59、Gremlin-1水平及其与近期预后的相关性。方法选取2020年3月—2022年2月湖南中医药大学第一附属医院呼吸内科诊治的急性加重期IIP患者90例为研究对象(急性加重期组),以同期诊治的稳定期IIP患者60例为稳定期组,以同期体检的健康者60例为健康对照组。根据急性加重期IIP患者随访3个月生存情况,分为生存亚组(n=59)和死亡亚组(n=31)。酶联免疫吸附实验检测血清CD59、Gremlin-1水平。Pearson相关分析急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1与临床指标的相关性。多因素Logistic回归分析影响急性加重期IIP患者死亡预后的因素。受试者工作特征曲线分析血清CD59、Gremlin-1对急性加重期IIP患者死亡预后的预测价值。结果急性加重期组血清CD59、Gremlin-1高于稳定期组和健康对照组(t=30.916、47.431,34.379、54.420,P均<0.001)。死亡亚组患者ESR、HRCT评分,血清CD59、Gremlin-1明显高于生存亚组(t/P=2.580/0.012、4.546/<0.001、26.388/<0.001、20.842/<0.001)。急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1水平与ESR、HRCT评分呈正相关(r=0.621、0.736、0.705、0.689,P均<0.001)。HRCT评分、CD59、Gremlin-1是高影响急性加重期IIP患者死亡预后的危险因素[OR(95%CI)=1.589(1.258~2.006),1.593(1.252~2.028),1.733(1.249~2.404)]。HRCT评分,血清CD59、Gremlin-1及联合检测评估急性加重期IIP患者预后的AUC分别为0.807、0.779、0.752、0.867,以联合检测的AUC最大(Z=5.183、4.349、5.127,P均<0.001)。结论急性加重期IIP患者血清CD59、Gremlin-1水平升高,是影响急性加重期IIP患者死亡预后的影响因素,HRCT评分、血清CD59、Gremlin-1联合检测对急性加重期IIP患者死亡预后具有较高的评估价值。

基于生物信息学分析CD59在胰腺癌中的表达及预后影响

目的 通过生物信息学方法分析CD59在胰腺癌中的表达及预后意义。方法 利用基因表达谱交互分析2(gene expression profiling interactive analysis 2,GEPIA2)和人类蛋白组图谱(human protein atlas,HPA)数据库比较CD59在胰腺癌组织与癌旁组织中的表达差异;利用卡普兰麦尔(Kaplan-Meier plotter)数据库评价CD59表达水平对患者预后的影响;利用String和Cytoscape3.9.1软件分析CD59蛋白互作网络;利用DAVID6.8对CD59及关键的互作基因进行基因富集和通路富集分析。结果 与正常组织相比,CD59在胰腺癌组织中的表达显著上调(P<0.05),CD59高表达患者的总体生存时间(HR=2.3,95%CI:1.52~3.50)和无复发生存时间(HR=4.31,95%CI:1.57~11.83)较CD59低表达患者短。蛋白互作网络分析揭示CD59与CD55、GOLGA2、LMAN1、TMED2和SERPINA1等多个分子关系密切。基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析表明CD59主要参与补体激活、先天免疫反应和冠状病毒-COVID-19等通路。结论 CD59在胰腺癌组织中高表达,受免疫相关基因的影响,且与患者预后较差相关,可作为胰腺癌早期诊断及预测预后的标志物之一。

CD59促进LAT介导的T细胞活化

目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法:构建LAT-GFP融合蛋白,以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞,建立稳定转染细胞株(Jurkat-GFP)。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒(GFP标记)沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位;MTT比色法检测细胞增殖率的变化;Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果:荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜,转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜,且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞,抗体活化后细胞增殖速率明显升高(P>0.05),而电转干扰质粒后细胞生长减慢。Western blot结果表明,CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异(P>0.05),而磷酸化蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜,且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高,进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。

CD59检测在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义

目的 探讨CD5 9检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (paroxysmalnocturnalhemoglobinuria ,PNH)及再生障碍性贫血 (AA) PNH综合征的临床诊断意义。方法 用FITC标记的CD5 9单抗 ,以流式细胞仪检测 13例PNH、37例AA和 2 0例正常人外周血红细胞和粒细胞膜表面CD5 9的表达情况。结果 正常人红细胞和粒细胞CD5 9表达阳性率均 >98% ;13例PNH患者红细胞及粒细胞CD5 9表达阳性率均 <90 % ;37例再障患者中 2 4例表达正常 ,13例红细胞或粒细胞CD5 9表达阳性率均有不同程度的减低。结论 CD5 9检测是诊断PNH较直接而又特异、敏感的方法 ,特别是对表现不典型的PNH及AA

树突状细胞负载Tα146-162对EAMG中Crry、CD59a、CD59b mRNA表达的影响

目的观察实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠肌肉中Crry、CD59a、CD59b mRNA的表达和Tα146-162-iMDC诱导免疫耐受对三者的影响。方法用GM-CSF、IL-10诱导骨髓细胞分化、增殖为不成熟的髓源性树突状细胞(iMDC),之后将Tα146-162负载其上(Tα146-162-iMDC)。健康雌性C57BL/6小鼠30只,随机分为模型组(A组,12只)、干预组(B组,12只)和正常对照组(C组,6只),A、B组小鼠用电鳗乙酰胆碱受体(T-AChR)免疫诱导EAMG,B组小鼠用Tα146-162-iMDC干预。按照Christadoss标准对小鼠进行EAMG评分,3H-TdR标记检测淋巴细胞增殖反应,RT-PCR方法检测Crry、CD59a、CD59b mRNA表达。结果A、B组小鼠平均临床评分分别是1.67±1.15vs0.33±0.65(P<0.01),发病率分别是75%vs25%(P<0.05)。B组较A组小鼠抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显降低(P<0.01)。A组较C组小鼠Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显降低(P<0.05);B组较A组Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显升高(P<0.05),B组CD59a mRNA与C组相比无显著性差异(P>0.05)。3组小鼠肌肉中均检测不到CD59b mRNA。结论Crry mRNA、CD59a mRNA表达减少可能参与EAMG发生,CD59b可能与EAMG发病无关;Tα146-162-iMDC上调小鼠肌肉中Crry、CD59a mRNA表达及抑制抗原特异性淋巴细胞增殖反应可能是其阻抑EAMG发生的机制之一。

突变人CD59分子真核表达体系的构建和功能的初步研究

构建突变人CD59分子(HMCD59)真核表达体系,探讨HMCD59糖基化前后抗补体活性的变化。采用重组PCR定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点构建CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。G418压力筛选稳定转染细胞克隆,检测筛选HMCD59蛋白高表达株。免疫印迹技术(Western blot)检测出HMCD59蛋白分子量约为20kDa。2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素(BCECF)释放实验初步证实HMCD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制提供了线索。

CD55、CD59在健康者红细胞及中性粒细胞上表达的研究

目的探讨CD55和CD59在健康者的红细胞及中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞上的表达。方法采用流式细胞技术检测健康体检者外周血红细胞及中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞膜上CD55和CD59表达的百分率及平均荧光强度。结果 CD55在中性粒细胞及单核细胞上的表达率(99.50±1.987,98.63±1.629)及平均荧光强度(11.14±2.927,13.37±4.127)均高于在淋巴细胞和红细胞上的表达(P<0.01);CD59在红细胞、中性粒细胞及单核细胞上均高表达(大于98.21±1.857)且差异无统计学意义(P>0.05),在淋巴细胞上的表达及平均荧光强度均低于其他组(P<0.01),CD59在红细胞和中性粒细胞上表达的荧光强度(8.65±1.655,8.595±2.091)高于其他两组(P<0.01)。结论采用流式细胞术检测CD55、CD59表达时应选取中性粒细胞及成熟红细胞作为靶细胞。

CD55、CD59、CD34对AA-PNH早期诊断研究应用

目的:探讨CD55、CD59、CD34抗原在再障阵发性血红蛋白尿综合征(AAPNH)的早期诊断中的价值,寻找AAPNH早期诊断敏感指标,进而达到早期发现、早期诊断、早期治疗的目的。方法:应用流式细胞仪测定AAPNH综合征患者的CD55、CD59、CD34抗原变化关系,并与PNH、AA等疾病组以及正常对照组CD55、CD59、CD34抗原相互变化关系,经过统计学处理,找出相关性。结果:结果表明AAPNH、PNHCD55、CD59、CD34抗原较AA及其他疾病组及正常对照组明显减低,并与溶血试验中溶血程度呈正相关,且早于其他溶血指标。结论:CD55、CD59、CD34抗原表达率可作为PNH、AAPNH综合征早期诊断最敏感指标,并与预后转归密切相关。

CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase-3和survivin作用

目的检测CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase-3、survivin表达水平的影响,探讨CD59位点短肽封条促肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法将CD59位点短肽封条作用于HeLa细胞,利用免疫组织化学方法检测短肽封条作用12 h和24 h后HeLa细胞caspase-3、survivin的表达水平。结果caspase-3表达随短肽封条剂量和作用时间的增加而增加;survivin表达随短肽封条的剂量和作用时间的增加而减少。结论CD59位点短肽封条能下调survivin的表达并活化caspase-3,从而可能导致HeLa细胞的凋亡。

siRNA介导的RNAi降低了CD59对补体溶破的抵抗作用

目的:构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系,观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化,探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性CD59基因的重组载体,脂质体法转染A2780细胞,G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响。结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确;重组载体转染A2780细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆,RT-PCR和Western blot表明,稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论:特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功,CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础。

体外循环手术对红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫的影响

目的探讨体外循环(extracorporeal circulation,ECC)手术对红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择ECC手术病例18例,于转机前、体温最低点、转机末和术后1 d、3 d、7 d晨采集患者静脉血,测定红细胞CD35、CD59,以及T淋巴细胞CD3、CD4和CD8。结果ECC前至ECC末,CD35+红细胞(CD35+-E)百分率、CD59几何平均荧光强度比值(CD59-GMFIR)和CD35-GMFIR均逐渐降低,前二者在术后1 d至7 d逐渐回升,而CD35-GMFIR未见明显恢复趋势。ECC末、术后1 d时CD35+-E百分率和CD35-GMFIR,以及体温最低点、ECC末和术后1 d时CD59-GMFIR均显著低于ECC前(P<0.01或P<0.05)。至术后7 d时,CD35+-E百分率、CD35-GMFIR和CD59-GMFIR仍未恢复至ECC前水平。从ECC前至术后7 d,CD3+T淋巴细胞(CD3+-T)百分率、CD3+CD4+-T百分率和CD4+-T/CD8+-T比值均呈现先降低后升高的趋势,体温最低点、ECC末、术后1 d和术后3 d的CD3+-T百分率、CD3+CD4+-T百分率均显著低于ECC前(P<0.01或P<0.05),至术后7 d恢复至接近于ECC前水平,而CD4+-T/CD8+-T比值则恢复至超过ECC前水平。结论ECC手术使红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫功能下降,后者于术后7 d恢复,前者恢复期长于后者。

CD59蛋白表达在外周神经损伤型神经病理性疼痛中的意义

目的观察CD59蛋白在大鼠3种外周神经损伤模型脊髓背角的表达情况,以探讨其在神经病理性疼痛(neu-ropathic pain,NPP)发病机制中的作用。方法选择80只健康雄性SD大鼠分为假手术组、慢性坐骨神经缩窄性损伤模型(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)组、坐骨神经分支选择性损伤模型(spared nerve injury,SNI)组和选择性脊神经结扎模型(spinal nerve ligation,SNL)组等4组,按分组制作模型,分别于术前、术后1、3、7 d用热刺激和机械刺激法测定大鼠的痛阈值变化,评估其可靠性后,于术后7 d处死大鼠,取腰4～腰6段脊髓背角,用Western-blot和流式细胞两种技术测定CD59蛋白含量。结果 CCI组、SNI组、SNL组大鼠于术后1、3、7 d痛阈值降低,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),模型制作成功。Western-blot检测显示,3组模型大鼠脊髓背角CD59蛋白表达均不同程度降低,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测显示假手术组大鼠脊髓背角细胞CD59阳性表达率为93.92%,而CCI组、SNI组和SNL组CD59阳性表达率分别为86.78%、85.68%和85.70%,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NPP大鼠脊髓背角细胞CD59蛋白表达下降,可能是此处发生补体级联反应的重要原因,CD59蛋白在NPP的形成中发挥一定作用。

模拟常压失事潜艇环境人血细胞表面CD55、CD59分布的变化

目的探讨模拟固壳未破损失事潜艇环境条件暴露对人体血液免疫功能的影响及其变化的规律。方法使用500m饱和潜水居住舱系统模拟失事潜艇固壳未破损舱室环境条件,控制舱内温度、PCO2、PO2,于进舱前、暴露第2、4、8d采晨空腹血,用流式细胞分析术测定红细胞、淋巴细胞、中性粒细胞表面CD55和CD59的分布变化。结果红细胞膜表面CD55的分布在8d有显著升高(P<0.01);淋巴细胞膜表面CD55的分布在暴露的初、中期显著下降(P<0.01),后期明显恢复,与温度、PO2呈正相关(P<0.01),与PCO2呈负相关(P<0.01),CD59分布的变化与CD55变化类似。结论氧分压和环境温度过低、二氧化碳分压过高都是诱发免疫活性细胞激活的有效因素。此环境暴露对血细胞自身保护作用有随时间累积的效应。

新风胶囊对活动期类风湿关节炎患者的疗效及对血小板参数 血小板CD59的影响

目的:观察新风胶囊对活动期类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的疗效及对血小板参数[血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)]、血小板CD59的影响。方法:检测60例活动期RA患者血小板参数、血小板CD59及各活动性指标(ESR、α1-AGP、CRP、RF),并将60例RA患者按随机数字表分为新风胶囊实验组35例和正清风痛宁对照组25例,治疗1个疗程后,观察两组的疗效和血小板参数、血小板CD59、各活动性指标的变化,另设正常对照组20例并检测上述指标。结果:①与正常对照组相比,活动期RA患者PLT、PCT、MPV显著升高,CD59显著降低(P<0.01或P<0.05);两治疗组总有效率相比无显著差异,但实验组显效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后新风胶囊组及正清风痛宁组患者ESR、α1-AGP、CRP、RF显著降低,CD59显著升高(P<0.01或P<0.05);与正清风痛宁对照组相比,新风胶囊组PLT、PCT、ESR显著降低,CD59显著升高(P<0.01或P<0.05)。②PLT、PCT与IgG、ESR、CRP、RF、关节疼痛、关节肿胀呈正相关关系,PLT还与关节压痛和晨僵时间呈正相关,与CD59呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:活动期RA患者血小板参数PLT、PCT显著升高,且与CD59、ESR、CRP、RF、IgG和关节疼痛、关节肿胀、关节压痛、晨僵时间具有相关性,提示PLT、PCT可以作为反映RA活动性的一项客观指标;新风胶囊能降低活动期RA患者PLT、PCT及炎症活动指标,其机制可能与提高血小板CD59的水平,抑制过亢免疫反应有关。

下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat凋亡相关分子的影响

目的:探讨下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat凋亡相关分子的影响。方法:运用RNAi慢病毒为载体下调急性T系白血病Jurkat细胞株CD59的表达;激光共聚焦观察转染效率及CD59分子的定位;Real-time-PCR、Western blot筛选下调效果最好的一组细胞,用其做后续的分子生物学水平的实验;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达量的变化;ELISA检测各组的细胞培养上清中IL-3、TNF-β的表达。结果:激光共聚焦观察到转染各组的转染效率在90%以上,CD59分子主要位于细胞膜;Real-time-PCR筛选得出下调A组的转染效果最好;Western blot结果显示下调A组的CD59蛋白的表达量减少最明显,将RNAi-CD59-A定义为RNAi-CD59作为实验组进行后续实验;实验组能增强Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制Bcl-2、Survivin蛋白的表达(P<0.05);ELISA结果显示下调组IL-3表达水平降低(P<0.05),TNF-β的表达水平升高(P<0.05)。结论:下调D59基因表达可使急性T系白血病细胞株Jurkat的促凋亡分子表达增高,促增殖分子表达降低。

CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究

目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。