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High quality repair of osteochondral defects in rats using the extracellular matrix of antler stem cells 被引量:1
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作者 Yu-Su Wang Wen-Hui Chu +4 位作者 Jing-Jie Zhai Wen-Ying Wang Zhong-Mei He Quan-Min Zhao Chun-Yi Li 《World Journal of Stem Cells》 SCIE 2024年第2期176-190,共15页
BACKGROUND Cartilage defects are some of the most common causes of arthritis.Cartilage lesions caused by inflammation,trauma or degenerative disease normally result in osteochondral defects.Previous studies have shown... BACKGROUND Cartilage defects are some of the most common causes of arthritis.Cartilage lesions caused by inflammation,trauma or degenerative disease normally result in osteochondral defects.Previous studies have shown that decellularized extracellular matrix(ECM)derived from autologous,allogenic,or xenogeneic mesenchymal stromal cells(MSCs)can effectively restore osteochondral integrity.AIM To determine whether the decellularized ECM of antler reserve mesenchymal cells(RMCs),a xenogeneic material from antler stem cells,is superior to the currently available treatments for osteochondral defects.METHODS We isolated the RMCs from a 60-d-old sika deer antler and cultured them in vitro to 70%confluence;50 mg/mL L-ascorbic acid was then added to the medium to stimulate ECM deposition.Decellularized sheets of adipocyte-derived MSCs(aMSCs)and antlerogenic periosteal cells(another type of antler stem cells)were used as the controls.Three weeks after ascorbic acid stimulation,the ECM sheets were harvested and applied to the osteochondral defects in rat knee joints.RESULTS The defects were successfully repaired by applying the ECM-sheets.The highest quality of repair was achieved in the RMC-ECM group both in vitro(including cell attachment and proliferation),and in vivo(including the simultaneous regeneration of well-vascularized subchondral bone and avascular articular hyaline cartilage integrated with surrounding native tissues).Notably,the antler-stem-cell-derived ECM(xenogeneic)performed better than the aMSC-ECM(allogenic),while the ECM of the active antler stem cells was superior to that of the quiescent antler stem cells.CONCLUSION Decellularized xenogeneic ECM derived from the antler stem cell,particularly the active form(RMC-ECM),can achieve high quality repair/reconstruction of osteochondral defects,suggesting that selection of decellularized ECM for such repair should be focused more on bioactivity rather than kinship. 展开更多
关键词 Osteochondral defect repair Mesenchymal stem cells Extracellular matrix DEcellULARIZATION antler stem cells Reserve mesenchymal cells Xenogeneic
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Deer antler stem cell niche: An interesting perspective 被引量:1
2
作者 Claudia Cavallini Elena Olivi +5 位作者 Riccardo Tassinari Chiara Zannini Gregorio Ragazzini Martina Marcuzzi Valentina Taglioli Carlo Ventura 《World Journal of Stem Cells》 SCIE 2024年第5期479-485,共7页
In recent years,there has been considerable exploration into methods aimed at enhancing the regenerative capacity of transplanted and/or tissue-resident cells.Biomaterials,in particular,have garnered significant inter... In recent years,there has been considerable exploration into methods aimed at enhancing the regenerative capacity of transplanted and/or tissue-resident cells.Biomaterials,in particular,have garnered significant interest for their potential to serve as natural scaffolds for cells.In this editorial,we provide commentary on the study by Wang et al,in a recently published issue of World J Stem Cells,which investigates the use of a decellularized xenogeneic extracellular matrix(ECM)derived from antler stem cells for repairing osteochondral defects in rat knee joints.Our focus lies specifically on the crucial role of biological scaffolds as a strategy for augmenting stem cell potential and regenerative capabilities,thanks to the establishment of a favorable microenvironment(niche).Stem cell differen-tiation heavily depends on exposure to intrinsic properties of the ECM,including its chemical and protein composition,as well as the mechanical forces it can generate.Collectively,these physicochemical cues contribute to a bio-instructive signaling environment that offers tissue-specific guidance for achieving effective repair and regeneration.The interest in mechanobiology,often conceptualized as a form of“structural memory”,is steadily gaining more validation and momen-tum,especially in light of findings such as these. 展开更多
关键词 Extracellular matrix antler stem cells stem cell niche Regenerative medicine Decellularized scaffolds cell memory
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小鼠骨髓和鹿茸来源间充质干细胞基本生物学特征比较 被引量:1
3
作者 张荠允 方翟 +3 位作者 贾小东 刘嘉伟 侯正创 韩春梅 《塔里木大学学报》 2023年第3期12-17,共6页
为研究塔里木马鹿茸间充质干细胞(MSCs)的生物学特征,本试验对来源于小鼠骨髓和塔里木马鹿茸的2种MSCs进行了体外培养,检测比较了其生长曲线;同时利用光学显微镜和透射电镜对细胞形态特征、结构、细胞器组成和数量进行观察对比。研究发... 为研究塔里木马鹿茸间充质干细胞(MSCs)的生物学特征,本试验对来源于小鼠骨髓和塔里木马鹿茸的2种MSCs进行了体外培养,检测比较了其生长曲线;同时利用光学显微镜和透射电镜对细胞形态特征、结构、细胞器组成和数量进行观察对比。研究发现鹿茸MSCs体外培养呈“S”形生长趋势,增殖速度极显著高于小鼠BMSCs(P<0.01)。鹿茸MSCs形态呈梭形,排列规律,形态均一;小鼠BMSCs形态不规则,呈三角形,多边形;鹿茸MSCs胞体、胞核面积分别为963.053μm^(2)和134.093μm^(2),极显著高于小鼠BMSCs的551.026μm^(2)和79.938μm^(2)(P<0.01);鹿茸MSCs的核质比为0.167,显著低于小鼠BMSCs的0.206(P<0.05);超微结果显示鹿茸MSCs胞体面积较大,细胞器种类简单,线粒体、内质网等细胞器形态具备早期幼稚细胞发育特征。塔里木马鹿茸MSCs增殖能力高于小鼠BMSCs,在开发利用方面具备更广泛的优势。 展开更多
关键词 塔里木马鹿茸 间充质干细胞(MSCs) 生物学特性 超微结构
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甾体类激素对梅花鹿鹿茸间充质干细胞骨保护素表达的影响
4
作者 邢宝瑞 赵海平 +7 位作者 李光玉 孙红梅 马泽芳 谭展清 胡肖 李晨莹 吴建华 刘振 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期443-449,共7页
骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)表达量的上调可通过抑制骨质流失的作用来改善骨骼的动态平衡,在前期OPG的表达检测过程中,OPG在鹿茸间充质干细胞(Antler mesenchymal stem cells,RMCs)成骨过程中呈上升趋势,但在RMCs成骨后较对照诱导组... 骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)表达量的上调可通过抑制骨质流失的作用来改善骨骼的动态平衡,在前期OPG的表达检测过程中,OPG在鹿茸间充质干细胞(Antler mesenchymal stem cells,RMCs)成骨过程中呈上升趋势,但在RMCs成骨后较对照诱导组并没有显著差异。由于梅花鹿外周血甾体类激素水平[雌二醇(Estradiol,E_(2))、甲状旁腺素1-34(Parathyroid hormone 1-34,PTH 1-34)]与鹿茸骨化密切相关,尚不清楚RMCs成骨的分子机制,据此推测,RMCs表达的OPG可能受甾体类激素的调控。本研究旨在探索甾体类激素(E_(2)和PTH 1-34)对OPG表达水平的影响。本研究采用CCK-8细胞增殖实验、qRT-PCR、Western Blot、成骨诱导、茜素红染色等方法探索了甾体类激素对RMCs增殖、OPG表达和成骨的影响。结果表明,RMCs在成骨分化过程中,PTH 1-34对RMCs增殖的影响无显著差异,可显著促进OPG蛋白的表达水平抑制破骨,通过上调成骨转录因子SP7和BGN的mRNA表达来促进成骨;E_(2)显著抑制RMCs的增殖,可通过下调OPG蛋白和SP7基因的表达来抑制RMCs成骨。综上,PTH 1-34可上调OPG蛋白的表达,对RMCs成骨具有促进作用;E_(2)可下调OPG蛋白的表达,对RMCs成骨具有抑制作用。 展开更多
关键词 甾体类激素 鹿茸 间充质干细胞 骨保护素 成骨诱导
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鹿茸干细胞来源外泌体调控NF-κB信号通路预防小鼠酒精性肝损伤 被引量:3
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作者 王东旭 任晶 +4 位作者 李吉萍 王玉俗 胡鹏飞 张国坤 李春义 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第24期3824-3830,共7页
背景:过度的酒精摄入会导致诸多的肝脏疾病,然而目前尚无有效的防治药物。前期研究发现鹿茸干细胞能够显著改善肝纤维化,推测其治疗作用可能是通过旁分泌效应产生的。目的:研究鹿茸干细胞的主要旁分泌物质——外泌体对小鼠急性肝损伤的... 背景:过度的酒精摄入会导致诸多的肝脏疾病,然而目前尚无有效的防治药物。前期研究发现鹿茸干细胞能够显著改善肝纤维化,推测其治疗作用可能是通过旁分泌效应产生的。目的:研究鹿茸干细胞的主要旁分泌物质——外泌体对小鼠急性肝损伤的预防作用及其机制。方法:40只C57BL6小鼠随机分为对照组、模型组、骨髓间充质干细胞外泌体预防组、鹿茸干细胞外泌体预防组,每组10只。2个外泌体预防组连续7 d给予相应外泌体进行干预,模型组给予PBS干预,然后给予体积分数为50%的酒精(15 mL/kg)灌胃1次建立急性酒精性肝损伤模型。灌胃后24 h,计算肝指数、检测肝损伤及氧化还原指标、评价肝组织病理病变、检测炎症因子和NF-κB信号通路相关基因的表达水平。结果与结论:(1)鹿茸干细胞来源外泌体显著减轻了肝损伤的程度,包括改善体质量、降低血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平、改善肝组织病理病变、促进肝实质细胞增殖分裂以及提高抗氧化水平(谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平升高,丙二醛水平降低),且效果强于骨髓间充质干细胞来源外泌体;(2)进一步研究发现,鹿茸干细胞来源外泌体显著降低了肝组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的mRNA表达水平,以及NF-κB信号通路相关基因(p65、p-p65、IKB和p-IKB)的蛋白表达水平;(3)这说明鹿茸干细胞来源外泌体能够起到保护肝脏的作用,减轻酒精所造成的肝损伤,其作用的发挥可能是通过靶向抑制NF-κB信号通路实现的。 展开更多
关键词 鹿茸干细胞 外泌体 酒精性肝损伤 炎症 NF-ΚB信号通路
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鹿茸皮肤再生视阈下鹿茸源性物质在伤口愈合领域的潜力分析 被引量:1
6
作者 罗静龙 肖丽 +6 位作者 杨玲 陈春燕 那艳 谭冬玲 黎夏瑶 方彰胜 张伟 《现代畜牧科技》 2023年第11期104-107,共4页
皮肤创伤愈合是一个复杂的过程,在最佳条件下,愈合过程仍然会导致纤维化或疤痕。鹿茸是哺乳动物中唯一可完全再生的附属器官,再生过程中鹿茸实现了巨型创伤到无痕愈合的再生性完美修复。在动物伤口模型中,通过直接注射鹿茸干细胞、局部... 皮肤创伤愈合是一个复杂的过程,在最佳条件下,愈合过程仍然会导致纤维化或疤痕。鹿茸是哺乳动物中唯一可完全再生的附属器官,再生过程中鹿茸实现了巨型创伤到无痕愈合的再生性完美修复。在动物伤口模型中,通过直接注射鹿茸干细胞、局部应用鹿茸干细胞分泌因子或者鹿茸提取物均可以实现伤口的快速愈合。鹿茸皮肤再生视阈下通过对鹿茸源性物质在伤口愈合领域的潜力分析与全面了解,可为该领域基础研究和临床治疗提供新理论和新手段,同时为探索中药鹿茸的现代临床药用途径提供实验依据。 展开更多
关键词 鹿茸 干细胞 鹿茸源性物质 皮肤再生 伤口愈合
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Biological effect of velvet antler polypeptides on neural stem cells from embryonic rat brain 被引量:14
7
作者 LULai-jin CHENLei +3 位作者 MENGXiao-ting YANGFan ZHANGZhi-xin CHENDong 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期38-42,共5页
Background Velvet antler polypeptides (VAPs), which are derived from the antler velvets, have been reported to maintain survival and promote growth and differentiation of neural cells and, especially the development ... Background Velvet antler polypeptides (VAPs), which are derived from the antler velvets, have been reported to maintain survival and promote growth and differentiation of neural cells and, especially the development of neural tissues This study was designed to explore the influence of VAPs on neural stem cells in vitro derived from embryonic rat brain Methods Neural stem cells derived from E12 14 rat brain were isolated, cultured, and expanded for 7 days until neural stem cell aggregations and neurospheres were generated The neurospheres were cultured under the condition of different concentration of VAPs followed by immunocytochemistry to detect the differentiation of neural stem cells Results VAPs could remarkablely promote differentiation of neural stem cells and most neural stem cells were induced to differentiate towards the direction of neurons under certain concentration of VAPs Conclusion Neural stem cells can be successfully induced into neurons by VAPs in vitro , which could provide a basis for regeneration of the nervous system 展开更多
关键词 neural stem cell · velvet antler polypeptides · differentiation · neuron
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Pilose antler aqueous extract promotes the proliferation and osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells by stimulating the BMP-2/Smad1, 5/Runx2 signaling pathway 被引量:27
8
作者 REN Cong GONG Wei +1 位作者 LI Feng XIE Ming 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2019年第10期756-767,共12页
Peptides from Pilose antler aqueous extract(PAAE) have been shown to stimulate the proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs). However, the underlying molecular mechanisms are not w... Peptides from Pilose antler aqueous extract(PAAE) have been shown to stimulate the proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs). However, the underlying molecular mechanisms are not well understood. Here, PAAE was isolated and purified to explore the molecular mechanisms underlying PAAE’s effects on BMSCs as well as its osteoprotective effects in ovariectomized rats. Our results showed that PAAE promoted proliferation and differentiation of BMSCs to become osteoblasts by enhancing ALP activity and increasing extracellular matrix mineralization. The trabecular microarchitecture of ovariectomized rats was also found to be protected by PAAE. Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(Quantitative RT-PCR) results suggest that PAAE also increased the expression of osteogenic markers including, alkaline phosphatase(ALP), runt-related transcription factor 2(Runx2), osteocalcin(OCN), bone morphogenetic protein-2(BMP-2), and collagen I(COL-I). Immunoblotting results indicated that PAAE upregulated the levels of BMP-2 and Runx2 and was associated with Smad1/5 phosphorylation. PAAE A at the concentration of 200μg·mL^-1 showed the strongest effect on proliferation and osteogenic differentiation of BMSCs after 48 h. Using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry(MALDI-TOF MS), we identified the molecular weight of PAAE A and found that it is less than 3000 Da and showed several significant peaks. In conclusion, PAAE activates the BMP-2/Smad1, 5/Runx2 pathway to induce osteoblastic differentiation and mineralization in BMSCs and can inhibit OVX-induced bone loss. These mechanisms are likely responsible for its therapeutic effect on postmenopausal osteoporosis. 展开更多
关键词 Pilose antler POSTMENOPAUSAL osteoporosis Bone MARROW mesenchymal stem cells BMP-2/Smad1 5/Runx2 signaling pathway
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鹿茸再生干细胞成骨诱导(微粒体)培养体系的建立 被引量:16
9
作者 孙红梅 杨福合 +3 位作者 邢秀梅 刘琳玲 赵海平 李春义 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期680-683,共4页
针对鹿茸再生活体研究周期长、耗资大、对动物损伤大等问题,利用在培养液中加入TGF-β1、地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油等对鹿茸再生干细胞进行体外诱导,成功建立了一种鹿茸再生干细胞体外诱导成骨的培养体系,模拟了鹿茸软骨内骨化... 针对鹿茸再生活体研究周期长、耗资大、对动物损伤大等问题,利用在培养液中加入TGF-β1、地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油等对鹿茸再生干细胞进行体外诱导,成功建立了一种鹿茸再生干细胞体外诱导成骨的培养体系,模拟了鹿茸软骨内骨化的生长过程。 展开更多
关键词 鹿茸再生干细胞 成骨 微粒体培养
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鹿茸干细胞体外培养技术的研究 被引量:7
10
作者 孙红梅 邢秀梅 +2 位作者 丛波 李春义 杨福合 《经济动物学报》 CAS 2007年第1期7-9,14,共4页
利用消化酶消化法,用DMEM培养基对鹿茸干细胞进行了体外培养,分别从原代培养、传代、冻存、以及复苏等几个环节进行了试验。摸索鹿茸干细胞合适的体外培养条件,为鹿茸的各项相关研究打基础。结果表明,用透明质酸酶和胶原酶对组织样进行... 利用消化酶消化法,用DMEM培养基对鹿茸干细胞进行了体外培养,分别从原代培养、传代、冻存、以及复苏等几个环节进行了试验。摸索鹿茸干细胞合适的体外培养条件,为鹿茸的各项相关研究打基础。结果表明,用透明质酸酶和胶原酶对组织样进行消化,然后用10%DMEM培养基进行培养细胞生长效果较好。适宜培养条件是37℃、5%CO2最大饱和湿度。 展开更多
关键词 鹿茸 干细胞 体外培养
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半乳糖凝集素1蛋白及其生物学功能 被引量:9
11
作者 秦欣欣 孙红梅 +3 位作者 赵海平 褚文辉 王大涛 李春义 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期141-145,共5页
半乳糖凝集素1(Galectin-1)是一种分子质量约为14ku的β-糖结合蛋白,是动物凝集素家族的成员之一。作为多种癌症的诊断指标,治疗癌症的新突破口,对Galectin-1的研究备受关注。此外,Galectin-1分布广泛,与多种正常生物功能相关,如细胞生... 半乳糖凝集素1(Galectin-1)是一种分子质量约为14ku的β-糖结合蛋白,是动物凝集素家族的成员之一。作为多种癌症的诊断指标,治疗癌症的新突破口,对Galectin-1的研究备受关注。此外,Galectin-1分布广泛,与多种正常生物功能相关,如细胞生长、神经修复、血管再生、软骨形成等。现阶段,关于Galectin-1在鹿茸再生中的研究很少,但鹿茸再生中许多过程与Galectin-1的功能高度相关。与肿瘤同样高速生长且高表达Galectin-1的鹿茸组织并不发生癌变,这可能对癌症的研究有所启发。为了寻找治疗癌症的新方法,解释鹿茸再生机制,了解Galectin-1蛋白在肿瘤和鹿茸中的功能研究进展至关重要,文章就其进行了综述。 展开更多
关键词 Glectin-1 鹿茸再生 鹿茸干细胞
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IGF1对生长30d鹿茸的体外培养鹿茸生长中心干细胞的影响 被引量:4
12
作者 冯海华 赵丽红 +4 位作者 闭兴明 李光凤 岳占碰 李春义 邓旭明 《中国农学通报》 CSCD 2008年第2期1-3,共3页
【研究目的】利用细胞培养技术,探讨胰岛素样生长因子(IGF1)对生长30d的鹿茸体外培养不同代数梅花鹿鹿茸生长中心干细胞(鹿茸干细胞)的影响;【方法】原代分离、培养生长30d的鹿茸的梅花鹿鹿茸干细胞,将第2代、5代、8代鹿茸干细胞经含有... 【研究目的】利用细胞培养技术,探讨胰岛素样生长因子(IGF1)对生长30d的鹿茸体外培养不同代数梅花鹿鹿茸生长中心干细胞(鹿茸干细胞)的影响;【方法】原代分离、培养生长30d的鹿茸的梅花鹿鹿茸干细胞,将第2代、5代、8代鹿茸干细胞经含有不同浓度的IGF1(0,1,3,和10nM)作用后,在培养24h后用3H-胸腺嘧啶核苷测定法检测每分钟衰变数(DPM)值;【结果】取材于生长30d鹿茸的干细胞,全部IGF1处理组(1,3,10nM)都显著高于对照组(0nM)(p<0.01)。3个不同浓度IGFⅠ处理组的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞最低(分别为2987和3743DPM/mg蛋白),而培养5代的细胞最高(分别为10320和12180DPM/mg蛋白),第8代的细胞又开始下降(分别为8754和11568DPM/mg蛋白);【结论】IGF1能够促进鹿茸干细胞分裂增殖,生长30d鹿茸的干细胞在离体培养,不同培养时期的鹿茸干细胞对IGFⅠ刺激的敏感度不同。 展开更多
关键词 IGF1 鹿茸 干细胞 梅花鹿
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鹿茸多肽对兔骨髓间质干细胞体外软骨表型诱导分化的影响 被引量:16
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作者 修忠标 林建华 +1 位作者 吴朝阳 王日雄 《中国骨伤》 CAS 2007年第1期31-33,共3页
目的:通过对体外培养的兔骨髓间质干细胞(MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响。方法:将第3代兔MSCs随机分为A组(空白对照组)、B组(诱导组)、C组(鹿茸多肽组),并取兔的关节软骨作为D组(关... 目的:通过对体外培养的兔骨髓间质干细胞(MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响。方法:将第3代兔MSCs随机分为A组(空白对照组)、B组(诱导组)、C组(鹿茸多肽组),并取兔的关节软骨作为D组(关节软骨组)。A、B、C 3组分别采用普通培养液、诱导培养液、含10 ug/m l鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养,分别于1、2、3周后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的观察。结果:A组培养2周后,细胞团块逐渐崩解,无法进行HE染色。B、C组细胞团块除有轻度收缩外,呈白色半透明状,HE染色发现细胞为圆形或卵圆形,表层细胞密度大。B、C组糖胺多糖(GAG)含量及Ⅱ型胶原mRNA表达随培养时间延长而增多,并以C组为著;各时间点B、C组与A组相比明显增多,且差异有显著性统计学意义(P<0.01),C组与B组相比较多,差异有显著性统计学意义(P<0.01),C组与D组相比较少,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。结论:MSCs在特定培养条件下能向软骨细胞表型分化,且鹿茸多肽对其定向软骨分化有明显促进作用。虽然在体外可以构建出软骨组织,但其与关节软骨质量相比仍有很大差距。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 间质干细胞 软骨 组织工程 细胞分化
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TGF-β1诱导马鹿茸MSCs软骨分化及c-myc基因的表达 被引量:6
14
作者 韩春梅 王姗姗 +3 位作者 高庆华 郑永富 马梦婷 张勤 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期109-114,共6页
鹿茸间充质干细胞(MSCs)是维持茸再生与骨化的重要组织,旨在研究鹿茸MSCs的软骨分化及原癌基因c-myc对该过程的调控作用。利用成年塔里木马鹿生长60 d的鹿茸第2代间充质干细胞(MSCs,P2),通过TGF-β1(10 ng/m L浓度)刺激,诱导塔里木马鹿... 鹿茸间充质干细胞(MSCs)是维持茸再生与骨化的重要组织,旨在研究鹿茸MSCs的软骨分化及原癌基因c-myc对该过程的调控作用。利用成年塔里木马鹿生长60 d的鹿茸第2代间充质干细胞(MSCs,P2),通过TGF-β1(10 ng/m L浓度)刺激,诱导塔里木马鹿茸间充质干细胞向软骨分化,采用免疫组化和阿利新蓝染色鉴定诱导结果,并通过q PCR方法检测软骨分化过程中c-myc基因的表达变化。结果显示,MSCs在诱导后的第9天开始出现细胞形态变化,由梭形向多角形转变,原来菊花状的分布逐渐向铺路石状变化,至14 d可观察到软骨陷窝,21 d软骨细胞基质明显,并开始出现细胞凋亡。非诱导组28 d细胞出现凋亡,细胞内发现空泡。35 d两组细胞凋亡明显,细胞折光性变差,间隙变大。阿利新蓝染色鉴定,诱导至第14天细胞基质中开始出现大量阳性染色。免疫组化实验检测,诱导至21 d的细胞基质中出现棕色Col II阳性反应物,随培养时间增加颜色加深,并集中分布在细胞及其周围基质中。在软骨分化进程中,第7、14、21和28天,诱导组c-myc基因表达与非诱导组相比显著下调(P<0.05),但诱导至35 d,诱导组c-myc表达与非诱导组相比无显著差异(P>0.05)。在TGF-β1刺激下,塔里木马鹿茸MSCs可以分化成软骨,原癌基因c-myc下调表达诱导鹿茸MSCs进入凋亡状态并分化为软骨细胞。 展开更多
关键词 马鹿茸 间充质干细胞 软骨分化 转化生长因子β1 C-MYC基因
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鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究 被引量:64
15
作者 陈东 孟晓婷 +2 位作者 刘佳梅 陈雷 路来金 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期240-243,共4页
目的 探讨鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外分化的影响。 方法 从E12~ 14d的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后 ,加入不同浓度的鹿茸多肽 ,观察其对胚胎神经干细胞分化的影响 ,并通过免疫组织化学染色检测神经干细胞分... 目的 探讨鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外分化的影响。 方法 从E12~ 14d的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后 ,加入不同浓度的鹿茸多肽 ,观察其对胚胎神经干细胞分化的影响 ,并通过免疫组织化学染色检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的状况。 结果  5 0 μg L组分化细胞总数与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;5 0 μg L、10 0 μg L、2 0 0 μg L组神经元特异烯醇化酶 (NSE)阳性率与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ,并呈一定的剂量依赖性。 结论 鹿茸多肽在体外可明显促进神经干细胞向神经元分化 ,为鹿茸多肽应用于神经系统损伤性疾病的治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 神经干细胞 鹿茸多肽 分化 神经元 胎大鼠
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鹿茸多肽介导心肌干细胞分化对终末心肌分化基因ANP和MLC-2v表达的影响 被引量:7
16
作者 黄晓巍 徐岩 +5 位作者 韩冬 林贺 律广富 李晓华 曲晓波 张冰 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期249-253,共5页
目的:探讨鹿茸多肽介导心肌干细胞(CSC)分化对终末心肌分化基因心房钠尿肽(ANP)和心肌肌凝蛋白轻链2(MLC-2v)表达的影响,阐明其修复受损心肌的作用机制。方法:选取出生2d的雄性Wistar大鼠,提取CSC,免疫荧光鉴定CSC表面标志物c-Kit,流式... 目的:探讨鹿茸多肽介导心肌干细胞(CSC)分化对终末心肌分化基因心房钠尿肽(ANP)和心肌肌凝蛋白轻链2(MLC-2v)表达的影响,阐明其修复受损心肌的作用机制。方法:选取出生2d的雄性Wistar大鼠,提取CSC,免疫荧光鉴定CSC表面标志物c-Kit,流式细胞术鉴定CSC纯度。以培养皿为实验单位,分为空白对照组(加等量缓冲液)、5-氮胞苷组(终浓度3μmol·L-1)、鹿茸多肽组(终浓度800mg·L-1)和联合组(3μmol·L-1 5-氮胞苷+800mg·L-1鹿茸多肽),于37℃、5%CO2培养箱中培养48h。ELISA法检测各组细胞上清液中ANP和MLC-2v表达水平,RT-PCR法检测各组细胞中ANP和MLC-2v mRNA表达水平。结果:获得纯度>95%的CSC。ELISA法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组细胞上清中ANP和MLC-2v表达水平明显升高(P<0.05);联合组ANP和MLC-2v表达水平高于5-氮胞苷组和鹿茸多肽组,但差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组ANP和MLC-2vmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:鹿茸多肽可以通过增强心肌分化基因ANP和MLC-2v表达介导CSC分化为心肌细胞,且在一定程度上减轻5-氮胞苷所致的细胞毒性。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 心肌干细胞 心房钠尿肽 心肌肌凝蛋白轻链2
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鹿茸多肽对软骨表型化骨髓间充质干细胞凋亡的影响 被引量:11
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作者 林建华 修忠标 +1 位作者 吴朝阳 王日雄 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期427-430,共4页
目的通过观察鹿茸多肽对白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)诱导软骨表型化骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。方法新西兰大白兔2只,抽取其骨髓;经密度梯度离心得到单核细... 目的通过观察鹿茸多肽对白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)诱导软骨表型化骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。方法新西兰大白兔2只,抽取其骨髓;经密度梯度离心得到单核细胞,经体外分离、培养获得兔MSCs。用转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)将其诱导分化软骨表型。将软骨表型化MSCs随机分成A组(空白对照组)5%胎牛血清的α-MEM培养液;B组(IL-1β组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入100ngIL-1β;C组(鹿茸多肽组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100ngIL-1β;D组(TGF-β1组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10ng/mlTGF-β1作用3d后再加入100ngIL-1β。分别于培养24、48和72h后取样,采用透射电镜观察细胞形态,AnnexinV法检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3mRNA表达水平,ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果透射电镜观察B组24h后细胞核内染色质开始呈块状凝集,分布于核膜下,核膜不规则;48h后细胞核内染色质凝集加剧;72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体。各时间点C、D组细胞结构改变相对滞后,且数量较少;A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组MSCs凋亡率、Caspase-3mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01);C、D组与B组比较则逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-3参与MSCs凋亡,鹿茸多肽通过减少Caspase-3mRNA表达,并抑制其蛋白酶活性,阻止或逆转软骨表型化MSCs凋亡。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 骨髓间充质干细胞 软骨表型 凋亡
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梅花鹿致敏与休眠鹿茸干细胞差异蛋白表达的2D-DIGE分析 被引量:1
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作者 董振 王权威 +2 位作者 刘振 孙红梅 李春义 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期92-104,共13页
旨在对梅花鹿(Cervus nippon)致敏鹿茸干细胞与休眠鹿茸干细胞表达蛋白进行差异筛选、鉴定及生物信息分析,为深入探讨鹿茸独特的再生分子调节机制奠定基础。本研究采用双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference in... 旨在对梅花鹿(Cervus nippon)致敏鹿茸干细胞与休眠鹿茸干细胞表达蛋白进行差异筛选、鉴定及生物信息分析,为深入探讨鹿茸独特的再生分子调节机制奠定基础。本研究采用双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2D-DIGE)分离蛋白样品;利用DeCyder 7.2分析软件对2D-DIGE图像进行统计学分析寻找差异表达蛋白;利用MALDI-TOF-MS(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry)鉴定差异蛋白,通过Mascot软件搜索NCBInr数据库寻找匹配的蛋白;采用PANTHER(Protein Analysis Through Evolutionary Relationships)软件对差异蛋白进行聚类分析,REACTOME数据库分析差异蛋白所参与的信号通路。结果得到了致敏鹿茸干细胞与休眠鹿茸干细胞2D-DIGE图谱,致敏鹿茸干细胞与休眠鹿茸干细胞蛋白丰度相比较,比值≥1.1倍以及比值≤-1.1倍(P<0.05)的差异蛋白点有159个,其中110个上调表达,49个下调表达,EDA(Extended data analysis)分析得到了多个Marker蛋白,质谱鉴定了84个差异蛋白质点,48个为阳性结果,共来自27种蛋白质。并对已鉴定蛋白进行了GO分析以及信号通路富集分析。致敏鹿茸干细胞与休眠鹿茸干细胞蛋白差异明显,质谱鉴定获得了来自多种可能与鹿茸再生相关的差异蛋白。由此可知,鹿茸再生是鹿茸干细胞从休眠到致敏的转化过程,需要多种蛋白分子以及信号通路的综合调控。 展开更多
关键词 鹿茸干细胞 再生 蛋白质组学 2D-DIGE
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抑制PI3K/AKT信号通路对鹿茸干细胞的影响 被引量:1
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作者 刘振 孙红梅 李春义 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2189-2197,共9页
旨在探究PI3K/AKT信号通路在鹿茸干细胞[包括生茸区骨膜(antlerogenic periosteum,AP)与角柄骨膜(pedicle periosteum,PP)细胞]中所发挥的作用,以期为揭示哺乳动物器官发生和完全再生机制提供借鉴。本研究通过MTT分析、细胞周期检测、... 旨在探究PI3K/AKT信号通路在鹿茸干细胞[包括生茸区骨膜(antlerogenic periosteum,AP)与角柄骨膜(pedicle periosteum,PP)细胞]中所发挥的作用,以期为揭示哺乳动物器官发生和完全再生机制提供借鉴。本研究通过MTT分析、细胞周期检测、细胞骨架染色等方法研究了抑制PI3K/AKT信号通路后对鹿茸干细胞增殖、细胞黏附、细胞周期、细胞骨架和促血管形成作用的影响。结果发现:1)相对于PP细胞,PI3K/AKT信号通路在调控AP细胞增殖和维持细胞骨架方面具有更为重要的作用;2)AP细胞条件培养液具有明显的促血管形成作用,PP细胞条件培养液不具有明显促进血管形成的作用。试验结果初步表明:相对于鹿茸再生,PI3K/AKT信号通路在鹿茸发生过程中的调控作用更为重要。 展开更多
关键词 鹿茸干细胞 PI3K/AKT信号通路 促血管形成 细胞增殖 细胞骨架
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鹿茸:干细胞与其微环境相互的产物 被引量:2
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作者 杨言慧 焦晶雪 +1 位作者 李军德 李春义 《中国现代中药》 CAS 2017年第1期31-36,共6页
鹿茸的周期性再生是一个基于干细胞的过程,鹿茸干细胞(ASC)存在于生茸区骨膜(AP)与角柄骨膜(PP)中。本篇综述首先提出了一个假说,即紧密包裹的皮肤是ASC微环境的主要组成成分,之后通过一系列实验研究对这一假说进行了验证。通过插膜实... 鹿茸的周期性再生是一个基于干细胞的过程,鹿茸干细胞(ASC)存在于生茸区骨膜(AP)与角柄骨膜(PP)中。本篇综述首先提出了一个假说,即紧密包裹的皮肤是ASC微环境的主要组成成分,之后通过一系列实验研究对这一假说进行了验证。通过插膜实验证明ASC和其紧密包裹皮肤之间的相互作用是鹿茸发生与再生不可或缺的,这一相互作用是通过交换游离小分子物质而实现的。AP组织的皮内移植实验表明,表皮和真皮毛乳头细胞参与了这一相互作用的过程。进一步的AP组织翻转实验表明,尽管自然情况下AP的纤维层紧贴皮肤,但诱发鹿茸发生和再生的信号来源于AP组织细胞层的细胞。通过实验改变鹿茸干细胞的微环境对鹿茸的发生产生了显著的影响。我们相信最终对这些相互作用分子的鉴别和分离不仅能够使我们进一步揭示鹿茸发生和再生的机制,更对再生医学有着重要意义。 展开更多
关键词 鹿茸 角柄 鹿 干细胞 骨膜 组织相互作用
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