人脂联素基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒pShuttle-CMV经SalⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,连接、转化、筛选,进行PCR鉴定后送双向测序。将鉴定正确的重组质粒pShuttle-CMV-apM1用PmeⅠ酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转BJ5183菌,进行细菌内同源重组,筛选、鉴定、扩增,PacⅠ酶切后用LipofectamineTM2000转染低代数的HEK293包装细胞,进行包装出毒。结果:重组穿梭质粒pShuttle-CMV-apM1经PCR和测序鉴定正确,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,转染293细胞进行包装,产生的病毒经鉴定正确,并且无具有复制能力的腺病毒存在,生物安全性高。结论:成功的制备了apM1基因重组腺病毒,可进一步用于脂联素干预动脉粥样硬化的研究。

脂联素基因SNP-11377和SNP-4522单倍型与代谢综合征相关

目的探讨昆明地区汉族脂联素基因单核苷酸多态性(SNP)与代谢综合征的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测脂联素基因SNP-11391、SNP-11377、SNP-4522、SNP+45和SNP+331的基因型,分析以上5个多态性位点与代谢综合征的相关性。结果 (1)脂联素基因SNP-11391和SNP+331不是昆明地区汉族的多态性位点;(2)在代谢综合征组中,SNP-11377G-SNP-4522T单倍型频率低于对照组(P<0.05),而SNP-11377C-SNP-4522T和SNP-11377G-SNP-4522C单倍型频率高于对照组(P<0.05和P<0.01)。结论在昆明地区汉族群体中,SNP-11377G-SNP-4522T单倍型可能降低患代谢综合征风险,而SNP-11377C-SNP-4522T和SNP-11377G-SNP-4522C单倍型可能增高患代谢综合征风险。

人脂联素、球状脂联蛋白基因克隆及真核表达载体的构建与表达

目的构建高效表达球状脂联蛋白的真核表达载体,为研究脂联素、球状脂联蛋白在2型糖尿病及动脉粥样硬化中的作用奠定基础。方法克隆人脂联素基因,构建球状脂联蛋白基因的真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),Western blot检测上清中球状脂联蛋白的表达。结果测序结果表明克隆的人脂联素基因序列正确;构建的球状脂联蛋白基因真核表达载体能有效转染HUVEC,并在上清中检测到该基因的表达。结论完成人脂联素基因克隆,成功构建了人球状脂联蛋白基因真核表达载体,并在HUVEC中获得分泌表达,为研究球状脂联蛋白对2型糖尿病的干预作用提供了可能。

人脂联素基因的克隆及序列分析

目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:从脂肪组织总RNA中扩增得到735bpapM1基因,其cDNA序列与GenBank报导的人脂联素基因apM1同源性为99.7%(159位和558位碱基发生了无义突变),获得了质粒pGEM-T-apM1,测序鉴定正确。结论:成功的克隆了apM1基因全长cDNA。

中国人群2型糖尿病与脂联素基因单核苷酸多态性关系的Meta分析

目的综合评价中国人群脂联素基因（apM1）单核苷酸多态性（SNP）与2型糖尿病的关系。方法应用Meta分析软件包RevMan4．3．1对各研究结果进行数据合并，计算SNP基因型频数分布合并后OR值及其95％CI；利用Egger分析和失安全系数（Nfs0.05）评估发表偏倚；对各研究结果进行不同分析模式和样本含量的敏感性分析，评价Meta分析结果的稳定性。结果检索筛选到相关文献9篇，apM1基因的SNP45在各研究间存在显著的异质性（P〈0．10）。亚组分析表明apM1基因SNP45在以南方人群为对象的研究间异质性较大（P〈0．01），是异质性的主要来源。apM1等位基因或基因型SNP45G和SNP45GG、SNP276G和SNP276GG在中国2型糖尿病人群的分布频率显著高于正常糖耐量组，其合并OR值（95％CI）分别为1．50[1．12，2．02]、2．15[1．53，3．02]、1．23[1．03，1．46]和1．26[1．00，1．59]（均P〈0．05）。apM1基因型SNP45TG和SNP276GT在两组人群中的分布没有统计学意义（P〉0．05）。发表偏倚分析和敏感性分析结果证实上述Meta分析结果是稳定和可靠的。结论中国人群2型糖尿病与apM1基因SNP关系密切，SNP45G和SNP276G可能是2型糖尿病的危险因素。