水牛成纤维细胞核移植的研究

本研究对影响水牛耳部成纤维细胞核移植效果的因素进行了探讨。体外成熟 2 2h的水牛卵母细胞经显微操作去核后 ,将一个经传代培养的水牛耳部成纤维细胞注入到胞质内。经核移植的水牛卵母细胞用 5μM离子霉素激活处理 5min ,然后在含有 2mM 6 -甲二氨基嘌呤 ( 6 -DMAP)的培养液培养 3h。当成纤维细胞用DNA合成抑制剂Aphidicolin( 0 .4μg/ml)培养 1d或 2d再进行核移植时 ,其囊胚发育率 ( 2 .0 %和 0 )明显低于 ( p <0 .0 5)对照组 ( 4.9% ) ,虽然其分裂率 ( 6 0 .9%和 6 0 .5% )与对照组 ( 6 2 .9% )无明显差异 ( p >0 .0 5)。当成纤维细胞的培养代数由G5增加到G6和G7时 ,囊胚发育率亦随之下降 ( 5.3% ,2 .0 %和 1 .8% ,p <0 .0 5) ,但分裂率无显著差异 ( 6 8.0 % ,6 0 .9%和 6 0 .7% ,p >0 .0 5)。结果表明 ,在现有核移植实验条件下 ,水牛成纤维细胞的培养代数应控制在 5代之内 。

蚜肠霉素处理及细胞传代数对小型猪体细胞核移植胚胎发育的影响

目的 为优化小型猪体细胞核移植技术（SCNT）技术,探讨供体细胞不同类型、不同传代数以及蚜肠霉素（Aphidicolin,APC）处理各供体细胞对重构胚体外发育的影响.方法 小型猪输卵管上皮细胞（OEC）,耳成纤维细胞（EFC）和卵丘细胞（CC）分别经血清饥饿或血饥饿后再使用0.1μg/mlAPC处理.核移植重构胚体外培养7d,以检测其发育能力.结果 OEC经APC处理后,重构胚的卵裂率和囊胚形成均显著高于仅血清饥饿处理组（61.82％ vs 56.25％,24.55％ vs 17.86％; P＜0.05）.以EFC为供体细胞,APC组重构胚卵裂率显著高于血清饥饿组（63.36％ vs 57.01％; P＜0.05）.注入CC,APC处理能显著提高重构胚的囊胚形成率（29.63％; P＜0.05）.三种细胞经APC处理,CC作为核供体,重构胚的卵裂率和囊胚形成率最高.三种细胞中,无论哪一种作为核供体,其传代数对重构胚的发育没有影响.结论 以CC为供体细胞,血清饥饿后再使用APC处理,更适合小型猪的体细胞核移植.

水牛体细胞核移植的研究

系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素 ,并初步建立了水牛体细胞核移植的一整套程序。体外成熟培养2 2～ 2 4 h的水牛卵母细胞去核后 ,将经血清饥饿 (0 .5 % FBS)培养 2～ 9d、0 .1mg/L Aphidicolin(APD)培养 +0 .5 %FBS培养 2～ 9d或一般培养法 (10 % FBS)培养的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞 ,直接注射到去核的卵母细胞质中 ,或注射到卵周隙中再经电融合 (10 0 V/mm ,15μs,电脉冲 3次 )构建重构胚。重构胚经化学激活后 (5μmol/L离子霉素 5 min,2 m mol/L 6 - DMAP3h)培养 7～ 8d,评定其胚胎发育能力。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经 0 .1mg/LAPD+0 .5 % FBS培养处理后的重组胚卵裂率 ,均极显著高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞 (P<0 .0 1) ,但囊胚发育率无显著差异 (P>0 .0 5 )。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经 0 .1mg/L APD+0 .5 % FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异 (6 3.0 6 %比 5 8.70 % ,P>0 .0 5 )。以水牛颗粒细胞为核供体时 ,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法 (P<0 .0 5 ) ,囊胚发育率无显著差异 (P>0 .0 5 )。培养 3代和 6代的水牛颗粒细胞以及培养 6代和 10代的耳皮成纤维细胞 ,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;以这

应用流式细胞仪研究阿非迪霉素对Jurkat细胞凋亡的影响

本研究应用流式细胞仪对添加了不同浓度阿非迪霉素的Jurkat细胞进行测定,通过Cellquest Pro软件分析细胞的凋亡率。结果表明,阿非迪霉素引起Jurkat细胞的凋亡呈剂量依赖效应和时间依赖效应。随着阿非迪霉素浓度的增加,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均不断增加,并在浓度≥1μg/mL时,凋亡率呈明显增加的趋势;随着培养时间的延长,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率同样不断增加,并在培养时间≥16h,凋亡率呈明显增加的趋势。