蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡影响的研究

目的 ：探究蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLS-RA）凋亡的影响。方法 ：原代培养FLS-RA,MTT法测定蜂毒注射液对细胞增殖及细胞毒性作用,hoechst染色法观察凋亡小体,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果：组织块培养法培养2周后细胞向心性排列,呈梭形及三角形。经过3-5次传代,FLS-RA细胞逐渐纯化,以FLS为主（〉95%）,体外生长稳定。倒置相差显微镜观察细胞形态：细胞排列整齐,向心性排列,呈梭形或三角形,偶见圆形细胞,细胞核成卵圆形,居细胞中央,胞质均匀透亮。干预24 h：各组生存率低于空白对照组（P〈0.05）,浓度越高,生存率越低;蜂毒注射液处理48 h：各组生存率低于空白对照组（P〈0.05）,浓度越高,生存率越低;同浓度蜂毒注射液处理24 h生存率与48 h比较：48 h组小于24h组（P〈0.05）。利用ORIGIN 5.0软件计算蜂毒注射液的半数抑制浓度（IC50）为（16.79±0.13）mg/L。实验组与阳性对照组中凋亡小体形态相似,细胞核呈致密浓染,颜色发白,而阴性对照组未见明显凋亡小体,细胞核未见固缩的染色质。B1区为细胞碎片,B2区为晚期凋亡和死亡的细胞,B3区为正常细胞,B4区为早期凋亡的细胞。由于B2区包含死亡的细胞,多选择B4区比较早期凋亡率。低浓度组蜂毒注射液作用FLS-RA细胞24 h,早期凋亡率大于空白对照组（P〈0.05）;高浓度组蜂毒注射液早期凋亡率明显高于空白对照组（P〈0.01）,且大于低浓度组（P〈0.05）。结论：蜂毒注射液可诱导成纤维样滑膜细胞凋亡,这可能是蜂毒治疗类风湿关节炎的机理之一。

蜂毒注射液对前列腺癌细胞凋亡的影响研究

目的研究蜂毒注射液(FD)对前列腺癌细胞凋亡的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组和蜂毒注射液不同浓度组,用MTT方法检测前列腺癌细胞活性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,同时用流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度。结果与对照组比较,作用24小时、48小时、72小时后,FD8μg/ml,12μg/ml,16μg/ml,20μg/ml,24μg/ml组活性降低,8μg/ml作用24小时后细胞凋亡增多(P<0.05),4μg/ml,8μg/ml作用24小时,细胞内Ca2+浓度增高。结论蜂毒注射液可以诱导前列腺细胞凋亡,其作用可能与细胞内Ca2+超载相关。

福林酚分光光度法测定蜂毒中总蛋白质

建立福林酚分光光度法测定蜂毒中总蛋白含量的方法。参照《中国药典》2020年版通则0731蛋白质含量测定方法第二法,以水作为溶剂,在样品溶液中加入福林酚溶液4.00 mL,于25℃下反应40 min,在750 nm波长处测定吸光度,标准曲线法定量。总蛋白质的质量浓度(x)在44.4~222.0μg/mL范围内与吸光度(y)线性关系良好,线性方程为y=3.0788x+0.0257,相关系数为0.9990,定量限为4.6μg/mL。总蛋白质测定结果的相对标准偏差为1.6%(n=6),样品加标回收率为96.56%~104.53%。该方法可用于蜂毒样品中总蛋白含量的测定。

蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞Bax、Bcl-2的影响

目的观察蜂毒注射液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(类风湿关节炎-FLS)B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA和蛋白的影响,探讨蜂毒注射液治疗类风湿关节炎的作用机制。方法滑膜组织取自行关节置换或关节镜手术的4名活动期类风湿关节炎患者,分离出FLS并原代培养,逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)观察Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Bax、Bcl-2蛋白水平的变化。结果与对照组比较,蜂毒注射液4、8、16 mg/L组能促进Bax mRNA表达(P<0.05),蜂毒注射液8、16 mg/L组抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.05、0.01);蜂毒注射液4、8、16 mg/L组提高Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P<0.05、0.01),且有一定的剂量相关性。结论蜂毒注射液可能通过抑制Bcl-2蛋白、促进Bax蛋白的表达,达到促进类风湿关节炎-FLS凋亡的作用。