重组apo(a) Kringle Ⅳ-10对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响

通过研究重组apo(a)KringleⅣ 10 (KⅣ 10 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]致动脉粥样硬化机理研究提供依据 .将含apo(a)野生型KⅣ 10 ((wild typeKⅣ 10 Trp72 ,wt KⅣ 10 Trp72 )和突变型KⅣ 10 (mutate typeKⅣ 10 Trp72 ,mut KⅣ 10 Arg72 )基因片段重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析柱进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力 .再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothe lialcells ,HUVEC)结合的影响 .结果显示 :在E .coliDH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S 转移酶(glutathioneS transferase ,GST) KⅣ 10 Trp72 (GST wt KⅣ 10 Trp72 )融合蛋白和突变型谷胱甘肽S 转移酶 (GST mut KⅣ 10 Arg72 )融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异 .其中GST wt KⅣ 10 Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 10 Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用 .

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10的纯化及生物活性

目的 :通过研究重组apo(a)KringleⅣ 1 0 (KⅣ 1 0 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据。 方法 :将含apo (a)野生型KⅣ 1 0 (wt KⅣ 1 0 /Trp72 )和突变型KⅣ 1 0 (mut KⅣ 1 0 /Arg72 )基因片段的重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析检测其赖氨酸结合能力。再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响。结果 :实验结果显示 :在E .coliDH5α菌株中表达的GST wt KⅣ 1 0 /Trp72 能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 1 0 /Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用。结论 :apo (a)KⅣ 1 0对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关 ;而KⅣ 1 0的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72