盐酸胍诱导的apo-CP43去折叠过程

膜蛋白生物合成与色素组装中蛋白的稳定性可以通过去折叠条件与过程分析得到.利用色氨酸荧光光谱和ANS荧光光谱研究了apo-CP43在盐酸胍条件下的稳定性.色氨酸荧光光谱观测到apo-CP43在盐酸胍作用下去折叠进程的主要特征:荧光强度先是逐渐降低,之后再逐渐升高,而最大荧光发射峰位置则一直持续红移.盐酸胍处理后apo-CP43的F360 nm/F335 nm比值逐渐增大,表明荧光最大发射峰逐步红移.当盐酸胍浓度约为5.5 mol/L时,去折叠比例趋于相对稳定状态,说明此时apo-CP43已经基本完成去折叠.荧光相图法结果显示盐酸胍诱导apo-CP43变性的过程符合三态模型.ANS荧光测定数据显示盐酸胍处理之后最大ANS荧光发射峰位置红移,并且荧光强度逐渐降低.以上数据表明在盐酸胍条件下apo-CP43是一个相对比较稳定的蛋白.

Mn^(2+)对apo-CP43结构影响的光谱学研究

CP43是PSⅡ中的内周天线色素结合蛋白,对PSⅡ的组装、结构稳定、能量传递、电荷分离、光合放氧等功能均起到重要的作用。作者应用内源荧光光谱、同步荧光光谱、傅立叶变换红外光谱(Fourier transform infrared,FTIR)和圆二色谱(circular dichroism,CD)方法检测了Mn2+对纯化的apo-CP43结构的影响。荧光发射和同步荧光光谱表明Mn2+诱导apo-CP43中色氨酸和酪氨酸残基周围疏水性增加,极性降低。Mn2+主要通过静态过程淬灭apo-CP43的荧光,并与apo-CP43形成一个复合体。FTIR和CD光谱显示Mn2+诱导apo-CP43中无规卷曲的含量下降、α-螺旋的含量增加,表明无规卷曲结构向α-螺旋转变,Mn2+与apo-CP43结合形成了一个更为紧密的结构。

菠菜43kD叶绿素a结合蛋白编码基因克隆及原核表达条件优化

将菠菜43kD叶绿素结合蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体pET-28a上,构建重组表达质粒pET-28a-psbC转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导实现了外源基因的可溶性表达.探讨了含组氨酸标签融合蛋白的最佳表达条件(包括表达单克隆、时间、温度对表达的影响).利用Ni2+-Sepharose 4Fast Flow亲合层析纯化出His-apo CP43蛋白.体外重组实验证实His-apo CP43能特异结合叶绿素a,经过温和电泳分离纯化所得体外重组色素蛋白复合物具有与提取自类囊体膜的天然CP43相似(但不完全相同)的荧光特性.