载脂蛋白E参与阿尔茨海默病的作用机制研究进展

阿尔茨海默病(AD)是发生于老年期的常见中枢神经系统退行性病变,其中载脂蛋白E(ApoE)基因是与AD相关性最强的遗传因素,然而其与AD发生发展的作用机制尚未完全清楚。本文对ApoE与AD相关的概况,APOE基因多态性对AD的影响,ApoE与其他致病因素的相互作用,ApoE在AD诊治中的相关应用作一综述,有助于完善AD的发病机制网络,为该病的防治提供更多思路。

神经元中ApoE与阿尔茨海默病

不同亚型的载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)导致阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病风险不同,ApoE2降低AD风险,ApoE4增加AD风险,是AD最大的风险基因,以往的研究主要聚焦于胶质细胞分泌的ApoE对AD的影响。近年的研究发现神经元中表达的ApoE在AD进程中也发挥重要的作用,不仅影响淀粉样斑块的产生和聚集,也影响Tau蛋白的磷酸化和神经变性等病理过程。这些神经元中ApoE的功能研究为AD的治疗提供了新的思路。目前,主要在神经元中补偿表达ApoE2的AD基因治疗已经进行到二期临床试验阶段。本文对神经元中表达的ApoE对AD的影响进行了整理和归纳,为进一步理解AD的致病机理、预防和治疗提供理论参考依据。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

三酰甘油与APOE基因多态性在短暂性脑缺血发作患者发生急性脑梗死中的交互作用研究

目的探讨三酰甘油(TG)与载脂蛋白E(APOE)基因多态性在短暂性脑缺血发作(TIA)患者发生急性脑梗死中的交互作用。方法对2019年1月—2021年6月349例TIA进行6个月随访,根据是否发生急性脑梗死分为发生组、未发生组,比较2组一般资料、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TG、APOE基因多态性,并比较不同TG水平患者APOE基因多态性,使用多因素Logistic回归分析TIA发生急性脑梗死的影响因素,使用交互作用系数γ分析TG与APOE基因多态性的交互作用。结果随访6个月,共45例(12.89%)TIA患者发生急性脑梗死。发生组TG高于未发生组(P<0.01)。发生组及TG升高患者E3/3基因型、ε3等位基因频率分别低于未发生组及TG正常患者,E3/4基因型、ε4等位基因频率分别高于未发生组及TG正常患者(P<0.05)。校正TIA持续时间、TIA发作频率后,TG、APOE基因型E3/3、E3/4及等位基因ε4仍是TIA发生急性脑梗死的独立影响因素(P<0.01)。TG升高与APOE基因型E3/4在TIA发生急性脑梗死中呈正向交互作用,且交互作用符合次相乘模型。结论TG升高与APOE基因型E3/4在TIA发生急性脑梗死中呈正向交互作用,且交互作用符合次相乘模型,TG升高可增强APOE基因型E3/4对TIA发生急性脑梗死的易感性。

载脂蛋白E联合临床相关指标预测阿尔兹海默病模型的建立与验证

目的 以载脂蛋白E(ApoE)为基础,结合阿尔茨海默病发病危险因素及临床常见指标,构建阿尔兹海默病发病风险的临床预测模型。方法 从南京市中医院大数据平台中,检索时间为2019年1月至2021年1月两年时间内,阿尔兹海默病患者61例,模糊匹配健康体检者111例。利用LASSO回归筛选危险因素,构建logistic回归预测模型,10折交叉进行区分度验证,bootstrap法进行校准度验证,临床决策曲线评判预测模型的临床指导性,最后以列线图可视化呈现临床预测模型。结果 筛选出12个变量,最终纳入4个危险因素:年龄、游离三碘甲状腺素(FT3)、性别、ApoE。全样本ROC曲线下面积为0.879,10折交叉9次验证后ROC曲线下平均面积为0.864;采用Bootstrap法抽样及Hosmer-Lemeshow校准度检验,结果χ^(2)=6.496,P=0.592>0.05。临床决策曲线阈值概率区间为1%~88.6%。结论 利用年龄、游离三碘甲状腺素、性别、 ApoE构建的临床预测模型对患者进行个体化评估,可以预警阿尔兹海默病,开展早期预防干预,减缓该病的发生发展。

ApoE、SLCO1B1基因多态性与他汀类药物降脂疗效的关系研究

目的分析载脂蛋白E(ApoE)与溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1B1(SLCO1B1)基因多态性与他汀类药物降脂疗效的关系,为实现他汀类药物的精准用药提供参考依据。方法选择初诊需服用他汀类药物降脂治疗的300例心血管疾病患者,均于入组时检测血脂指标及ApoE、SLCO1B1基因多态性,并采用随机数字表法分为常规组和个体化组,每组150例。常规组患者按常规剂量给予他汀类药物治疗,个体化组患者给予个体化他汀类药物治疗(根据ApoE、SLCO1B1基因型调整他汀类药物种类和剂量)。比较两组ApoE、SLCO1B1基因型分布情况,治疗前后血脂指标[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、肝功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、肌酸激酶(CK)水平,治疗后血脂达标率及达标时间,不良反应发生情况。结果300例患者中ApoE基因型中保护类基因型63例,占21.00%;大众类基因型173例,占57.67%;风险类基因型64例,占21.33%。SLCO1B1基因型中低风险基因型190例,占63.33%;中等风险基因型83例,占27.67%;高风险基因型27例,占9.00%。两组患者ApoE基因型、SLCO1B1基因型分布比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组TG、TC、LDL-C水平均低于本组治疗前,HDL-C水平高于本组治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);个体化组TG、TC、LDL-C水平分别为(1.86±0.18)、(5.30±0.43)、(3.45±0.36)mmol/L,均低于常规组的(2.38±0.29)、(5.52±0.49)、(3.61±0.38)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);两组HDL-C水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。个体化组治疗后血脂达标率为97.33%,高于常规组的70.67%,差异有统计学意义(P<0.05);个体化组血脂达标患者达标时间为(22.40±2.81)d,短于常规组的(26.72±3.86)d,差异有统计学意义(P<0.05)。个体化组不良反应发生率为3.33%,常规组为4.00%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前后AST、ALT、CK水平组间及组内比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论广西地区人群的ApoE、SLCO1B1基因型分布与国内分布基本一致。根据ApoE、SLCO1B1基因多态性指导他汀类药物的降脂治疗可提高降脂疗效,且ApoE、SLCO1B1基因多态性可作为心血管疾病患者他汀类药物降脂疗效预测的辅助指标。

ApoE基因多态性与高水平Hcy的协同作用对妊娠高血压的影响

目的为探究载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与同型半胱氨酸(Hcy)的协同作用对妊娠高血压发病的影响。方法选取2021年1月至2021年12月新疆维吾尔自治区人民医院收治的200例妊娠期高血压孕妇作为研究组,同期非妊娠高血压孕妇200例作为对照组,检测两组孕妇ApoE基因多态性以及Hcy水平。结果研究组蛋白尿、水肿、胎儿生长受限、羊水过少的发生率均显著高于对照组(χ^(2)值介于10.751~34.783之间,P<0.01),且血中Hcy水平显著高于对照组(t=3.210,P<0.05)。研究组ε2ε3、ε3ε3基因型频率以及ε2、ε3等位基因频率均显著低于对照组,ε3ε4、ε4ε4基因型频率以及ε4等位基因频率均显著高于对照组(χ^(2)值介于4.624~32.172之间,P<0.05),ε2ε2、ε2ε4基因型频率略高于对照组但无显著性差异(χ^(2)值分别为1.309、0.069,P>0.05)。研究组E3、E4 AopE表型孕妇的Hcy水平均显著高于对照组(t值分别为4.009、2.609,P<0.05),且研究组E4表型孕妇的Hcy水平显著高于E2、E3(F值为4.118,P<0.05)。E4表型中研究组孕妇的高Hcy比例显著高于对照组(χ^(2)=4.650,P<0.05),而E2、E3表型中两组孕妇的高Hcy比例均无显著性差异(χ^(2)值分别为3.678、3.432,P>0.05)。结论ApoE基因多态性和高水平Hcy在妊娠期高血压疾病发病中存在协同作用,ApoE基因ε4等位基因的存在与高Hcy水平之间的相互作用会增加妊娠期高血压疾病发生的风险。

ApoE基因多态性与急性大血管闭塞性脑卒中血管内治疗后患者预后的相关性

目的探讨急性大血管闭塞性脑卒中患者载脂蛋白E(ApoE)基因单核苷酸多态性及其与血管内治疗后预后的关系。方法选择行血管内治疗的100例急性大血管闭塞性脑卒中患者,根据术后90 d时患者改良Rankin评分量表(mRS)得分情况,分为预后良好组(mRS≤3分,n=66)与预后不良组(mRS>3分,n=34)。比较两组受试者的基线资料、免疫指标,检测ApoE基因多态性,记录术后出血情况。结果预后不良组高龄患者比例高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组外周血甘油三酯(TG)、N末端B型钠尿肽原(BNP)、D-二聚体(D-D)均高于预后良好组(P<0.05)。两组ApoE基因表型均以ε3/ε3占比为最高,且预后良好组ε3/ε3占比高于预后不良组(77.27%vs 55.88%,P<0.05);两组其他基因表型未见明显差异(P>0.05)。预后良好组和预后不良组ApoE基因频率均以ε3型占比最高,分别为87.12%和76.47%;但两组间ε2、ε3、ε4型比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性大血管闭塞性脑卒中血管内治疗后预后不良以高龄患者多见,ApoE基因表型以ε3/ε3居多,可能是血管内治疗后预后良好的保护因素;ApoE基因频率以ε3型居多,但与血管内治疗后预后无明显相关性。

载脂蛋白E基因多态性与颅脑损伤后认知功能障碍的相关性研究

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与颅脑损伤后认知功能障碍的关系。方法前瞻性选取2018年1月—2023年2月重庆医科大学附属巴南医院神经外科收治的57例颅脑损伤后认知功能患者为认知功能障碍组,同期收治的不伴有认知功能障碍的颅脑损伤患者51例为对照组。取患者抗凝静脉全血2~4 mL进行核酸提取,使用APOE基因检测试剂盒,采用多重荧光PCR法对提取的DNA进行APOE基因ε2、ε3和ε4位点的检测,比较两组基因型分布差异。用Logistic回归分析对两组患者一般资料及携带ε2、ε3和ε4基因进行筛选,得出颅脑损伤后认知功能障碍的基因危险因素。结果两组患者基因型分布差异有统计学意义(P<0.05),两组ε3基因携带者和ε4基因携带者占比有明显差异(P<0.05)。单因素Logistic回归分析提示,仅携带ε4为颅脑损伤后认知功能障的危险因素[P=0.005,OR=0.317(95%CI:0.142~0.711)]。把单因素Logistic回归中P值最低的5个变量(GCS、性别、损伤程度及ε3、ε4携带者)所有因素纳入多因素Logistic回归分析,发现携带ε4基因是颅脑损伤后认知功能障的危险因素[P=0.039,OR=0.379(95%CI:0.150~0.954)]。结论ApoEε4基因与颅脑损伤后认知功能障碍有关。

脑淀粉样血管病相关炎症的临床特点分析

目的分析脑淀粉样血管病相关炎症(CAA-I)的临床特点。方法回顾性分析8例CAA-I患者的临床资料,综合相关文献分析其临床特点。结果8例患者中,6例表现为不同程度的认知功能障碍,5例合并头痛,3例合并无力、失语、视力下降等局灶性神经功能缺损症状,2例伴发癫痫。8例患者头颅T_(2)W和Flair相表现为多发的白质高信号,SWI均表现为皮质-皮质下多发微出血。4例基因检测表现型为APOE4。7例患者经激素治疗后症状和影像学改变均明显改善,1例逐渐进展,1例治疗13个月后复发。结论CAA-I为临床罕见的可治性疾病,对免疫抑制治疗敏感,可动态观察影像学改变评估治疗效果。

血清中载脂蛋白E、sST2及游离脂肪酸水平对急性缺血性脑卒中患者病情转归的预测价值

目的:探究血清中载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)、可溶性的生长刺激表达基因2蛋白(Soluble growth stimulation expressed gene 2,sST2)及游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)水平对急性缺血性脑卒中患者病情转归的预测价值。方法:选取本院2020年1月至2022年12月神经内科收治的163例急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)患者作为研究对象,根据发病后90 d的转归情况分成转归良好组和转归不良组。收集患者的基线资料;检测对比两组患者血清FFA、ApoE及sST2水平;分析影响AIS患者病情转归的因素;分析ApoE、sST2及FFA表达单独及联合检测对AIS患者转归的预测价值。结果:转归不良组的高血压和高血脂情况显著增多;血清ApoE、sST2及FFA的表达均明显低于转归不良组(P<0.05)。多因素Logistic分析显示,高血压、高血脂、ApoE、sST2及FFA表达均为病情转归的影响因素(P<0.05)。经ROC曲线分析可得,ApoE、sST2及FFA预测AIS患者转归的AUC值分别为0.768、0.740、0.801;联合检测的AUC值为0.874。结论:高血压、高血脂、ApoE、sST2及FFA表达均为病情转归的影响因素,且ApoE、sST2及FFA三项指标联合预测AIS患者的病情转归更有效。

基于引物快速固化技术的实时荧光聚合酶链式反应检测方法

目的开发一种快速、低成本的引物干燥与固定新技术,以实现载脂蛋白E基因亚型的实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法研究不同粘附着色剂性能、实现引物快速干燥固化,建立一种固化引物模式的实时荧光PCR方法对6种载脂蛋白E基因亚型进行检测,并对新方法的常温储存性能、检测特异性、灵敏度和准确度及与基因测序法的结果一致性实施试验评价。结果固化引物技术仅需高温干燥,固化后的引物可常温储运,稳定性高,不影响PCR扩增。建立的固化引物模式的实时荧光PCR方法检测载脂蛋白E基因准确性高、特异度好,灵敏度为0.63 ng/μL,与传统的液体PCR试剂灵敏度一致。临床样本验证结果表明,本方法与基因测序的符合率为100%。结论本文建立的固化引物实时荧光PCR法可提高多突变位点基因检测操作的便捷性与检测通量选择的灵活性。

血浆Hcy、ApoE基因多态性对血管性痴呆患者认知功能及治疗效果的影响

目的探讨血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因多态性对血管性痴呆患者认知功能的影响。方法回顾性分析于医院接受治疗的100例血管性痴呆患者病例资料作为研究对象,使用简易智力状态检查量表(mini-mental state examination,MMSE)评估患者认知功能,将MMSE评分为21~26分患者纳入轻度组,将10~20分患者纳入中度组,将0~9分患者纳入重度组。参照《中国痴呆与认知障碍诊治指南》给予患者常规治疗,治疗前主要检查项目包括血浆Hcy、ApoE基因多态性,治疗3个月后记录患者临床疗效;分析ApoE基因多态性、Hcy与血管性痴呆患者认知功能障碍及临床疗效的关系。结果100例血管性痴呆患者MMSE评分为16.50(9.00,20.00)分,其中轻度24例,中度49例,重度27例;重度组ApoE基因表型为ε2/4、ε4/4患者占比高于轻度组、中度组,入院时血浆Hcy水平高于轻度组、中度组,差异有统计学意义(P<0.05);行多元Logistic回归分析结果显示,血浆Hcy、ApoE基因是导致血管性痴呆患者认知功能障碍加重的危险因素(P<0.05);100例血管性痴呆患者,治疗3个月后,显效47例,好转30例,无效23例,总有效率为77.00%;行二元Logistic回归分析显示,血浆Hcy、ApoE基因均是影响血管性痴呆患者治疗效果的危险因素(P<0.05)。结论ApoE基因多态性、Hcy与血管性痴呆患者认知功能障碍病情严重程度及临床关系密切,未来临床可通过检测患者ApoE基因多态性、Hcy水平,评估患者认知障碍严重程度及治疗无效风险,针对病情严重治疗无效风险较高者,采取针对性干预,以改善患者临床疗效。

缺血性脑卒中患者颈动脉斑块稳定性及狭窄的危险因素分析

目的 探讨缺血性脑卒中患者颈动脉斑块稳定性及狭窄的危险因素。方法 收集2020年5月至2021年5月于湘南学院附属医院住院接受诊治的159例缺血性脑卒中患者的临床资料,根据颈动脉斑块稳定性将患者分为斑块稳定组(n=67)和斑块不稳定组(n=92)。另根据颈动脉狭窄程度将患者分为轻度狭窄组(n=108)和中重度狭窄组(n=51)。比较斑块稳定组与斑块不稳定组、轻度狭窄组与中重度狭窄组患者的临床特征,分析缺血性脑卒中患者颈动脉斑块不稳定及颈动脉中重度狭窄的危险因素。结果 斑块稳定组患者的年龄、高血压比例、糖尿病比例、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、糖化血红蛋白(HbA1c)水平及D-二聚体/纤维蛋白原比值(DFR)均低于斑块不稳定组患者,载脂蛋白E(ApoE)水平高于斑块不稳定组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。轻度狭窄组患者的年龄、高血压比例、糖尿病比例、LDL-C水平、HbA1c水平及DFR均低于中重度狭窄组患者,ApoE水平高于中重度狭窄组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,年龄、高血压、糖尿病、LDL-C水平、HbA1c水平、ApoE水平及DFR均是缺血性脑卒中患者颈动脉斑块不稳定和颈动脉中重度狭窄的影响因素(P<0.05)。结论 年龄、高血压、糖尿病、LDL-C水平、HbA1c水平、ApoE水平及DFR均与缺血性脑卒中患者颈动脉斑块不稳定和颈动脉狭窄密切相关,值得深入研究。

动脉粥样硬化小鼠模型研究进展

动脉粥样硬化(As)是一种发生于大中动脉的慢性进行性疾病,其导致的心脑血管并发症是造成人类死亡的主要原因。目前小鼠模型不仅广泛用于As的机制研究,还运用于临床前药物的转化研究。常用的小鼠模型包括ApoE^(-/-)小鼠、LDLr^(-/-)小鼠等转基因小鼠。此外,一些基于手术或操作的新兴动物模型(如部分颈动脉结扎、AAV8-PCSK9-D377Y注射小鼠)也逐渐应用于As病理生理机制的探究。但由于As发病机制复杂,目前尚无一种模型可完全复制人As的形态及病理生理过程。

嗅三针对帕金森病痴呆小鼠海马CA1区载脂蛋白E和病理底物表达的影响

目的:观察嗅三针干预对帕金森病痴呆(Parkinson’s disease dementia,PDD)小鼠海马CA1区载脂蛋白E(apolipoprotein E,Apo E)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)以及相关核心病理底物表达的影响,探讨嗅三针改善PDD认知功能的部分作用机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组(Control)、假手术组(Sham)、模型组(Model)和电针组(AE),每组10只;采用单侧内侧前脑束(medial forebrain tract,MFB)注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)建立PD模型并筛选PDD小鼠。建模筛选成功后,电针组选取嗅三针进行电针治疗,各组小鼠干预14天后采用Morris水迷宫实验和穿梭箱实验评估各组小鼠学习记忆能力;HE染色观察海马CA1区细胞病理改变;免疫印迹法检测海马CA1区α-syn、Aβ、Apo E蛋白的表达;免疫荧光双标观察海马CA1区Apo E与GFAP的共定位率。结果:与模型组比较,电针组小鼠水迷宫逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数增加(P<0.05),穿梭箱主动回避次数增加(P<0.05),电击刺激平均时间减少(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区神经细胞排列稀疏、变性坏死,细胞核体积变小、浓染、结构不清,呈核固缩表现;而电针组小鼠海马CA1区神经元病变有明显改善,大部分细胞排列规则,细胞核圆而大,染色浅,形态清晰。电针组小鼠海马CA1区α-syn、Aβ、Apo E蛋白以及Apo E与GFAP共定位率均较模型组减少(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:嗅三针可提高PDD小鼠认知能力并改善神经元形态结构与功能,机制可能与其抑制星形胶质细胞Apo E表达从而减少海马CA1区α-syn、Aβ沉积有关。

APOE多态性在炎症因子诱导的神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用

目的:探讨载脂蛋白E(APOE)基因多态性在神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用,为阿尔茨海默病(AD)发病机制的研究提供理论依据。方法:体外分离培养APOE基因敲除小鼠(APOE^(-/-))原代皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴定细胞纯度。构建人APOE3和APOE4重组过表达质粒,分别转染至原代APOE^(-/-)星形胶质细胞中,以APOE^(-/-)原代细胞为对照,采用Western blotting法检测细胞中APOE和神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中APOE水平。采用白细胞介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子(TNF)和补体C1q联合刺激转染APOE3和转染APOE4的原代星形胶质细胞制备炎症模型,分为APOE3+PBS组、APOE4+PBS组、APOE3+IL-1α+TNF+CC1q组和APOE4+IL-1α+TNF+C1q组,采用细胞免疫荧光染色法观察各组细胞形态表现,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(Gpc4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(Gpc6)、血小板反应蛋白1(Thbs1)、血小板反应蛋白2(Thbs2)、酸性分泌蛋白类似蛋白1(Sparcl1)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、C3和S100钙结合蛋白B(S100B)mRNA表达水平,微球吞噬实验检测各组细胞吞噬能力,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与APOE^(-/-)组比较,转染APOE3和APOE4组细胞中APOE和GFAP蛋白表达水平及细胞培养上清中APOE水平明显升高(P<0.01)。荧光显微镜下观察,分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组星形胶质细胞突起变短,胞体变大;与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组星形胶质细胞突起更短。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Gpc4、Gpc6、Thbs1、Thbs2和Sparcl1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Gpc4、Gpc6、Thbs1、Thbs2和Sparcl1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中GDNF mRNA表达水平明显降低(P<0.01),C3和S100B mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中GDNFmRNA表达水平明显降低(P<0.05),C3和S100B mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞吞噬微珠数量明显减少;与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞吞噬微珠数量明显减少。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:APOE4基因型比APOE3诱导炎症因子能力更强,可诱导神经毒性反应性星形胶质细胞表型,增加神经毒性,影响星形胶质细胞凋亡,从而加剧神经元损伤。

阿尔茨海默病载脂蛋白E基因型与血脂和认知功能的关系

目的探讨阿尔茨海默病(AD)载脂蛋白E(ApoE)基因型与血脂、认知功能的关系。方法前瞻性选择2022年3月至2023年5月延安市人民医院收治的107例AD患者作为研究组,根据患者认知功能严重程度分为重度组[25例,简明精神状态评估量表(MMSE)评分≤9分]与轻中度组(82例,MMSE评分10~26分);另选择医院同时间段52名健康体检者作为对照组。研究组男61例,女46例;年龄(63.17±8.35)岁。对照组男33名,女19名;年龄(63.86±8.02)岁。对比对照组、轻中度组、重度组ApoE基因型及等位基因频率分布情况、不同ApoE等位基因AD患者血脂水平[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],分析血脂水平与AD患者ApoE等位基因的相关性;对比轻中度组与重度组临床资料,分析AD患者合并重度认知功能障碍的影响因素。统计学方法采用χ^(2)检验、t检验、F检验。结果对照组、轻中度组、重度组基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ^(2)=0.83、2.46、0.50,均P>0.05),具有群体代表性。重度组ApoEε3/4基因型高于轻中度组,重度组ApoEε2/4、ε3/4基因型均高于对照组(均P<0.05)。重度组ApoEε4等位基因高于轻中度组、对照组,重度组ApoEε3等位基因低于轻中度组、对照组,轻中度组ApoEε3等位基因低于对照组(均P<0.05);重度组与轻中度组ApoEε2等位基因比较,差异无统计学意义(P>0.05),重度组、轻中度组ApoEε2等位基因均高于对照组(均P<0.05)。Spearman分析结果显示,TG、HDL-C、CHO、LDL-C与ApoE等位基因均无相关性(均P>0.05)。重度组白细胞介素-6(IL-6)、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)高于轻中度组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,携带ApoEε4等位基因(OR=3.924,95%CI 1.725~8.925)、Lp-PLA2(OR=2.807,95%CI 1.234~6.385)均为AD患者合并重度认知功能障碍的影响因素(均P<0.05)。结论ApoE等位基因与AD患者血脂水平无相关性,携带ApoEε4等位基因的AD患者合并重度认知功能障碍的风险更高。

载脂蛋白E基因多态性与急性冠状动脉综合征关系的研究进展

急性冠状动脉综合征(ACS)是由不稳定的冠状动脉粥样硬化斑块(AP)破裂或糜烂导致血栓形成而引发的一系列缺血性疾病,其病理基础为AP形成,这一过程受到脂质代谢紊乱的驱动。血脂水平是ACS预后的关键因素,载脂蛋白E(ApoE)作为脂质代谢的关键调控因子,其多态性与血脂异常密切相关。而ApoE4基因型患者ACS后强化他汀治疗效果不佳是ACS的独立危险因素。未来明确ApoE基因多态性与ACS的关系,有助于为ACS患者制订个体化降脂方案提供更为精准、安全的策略。

丙泊酚通过调控自噬改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的 探讨丙泊酚通过调控自噬改善载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的作用及机制。方法 采用C57BL6为对照组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水);Apo E^(-/-)小鼠随机分成模型组(n=5,每天腹腔注射等量生理盐水)、丙泊酚组[n=5,腹腔注射丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)]、丙泊酚+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组[n=5,丙泊酚75 mg/(kg·d)^(-1)+3-MA 30 mg/(kg·d)^(-1)]。对照组给予普通饲料,另3组给予高脂饲料,连续饲喂12周,造模第10周起给药,腹腔注射,1次/d。检测胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TAG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的水平。使用苏木精-伊红染色、油红O染色以及蛋白质印迹法评估动脉的组织学结构和重组自噬效应蛋白Beclin-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结果 与对照组比较,模型组主动脉粥样斑块面积、红染脂质、血清TC、TAG、LDL-C、HDL-C均明显增加,主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显升高(P<0.05);与模型组比较,丙泊酚组主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC和LDL-C均显著下降(P<0.05)。主动脉中Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增加(P<0.05)。与丙泊酚组比较,丙泊酚+3-MA组的主动脉AS斑块面积、红染脂质、血清TC、LDL-C均明显增加,主动脉内Beclin-1蛋白水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达均显著下降(P<0.05)。结论 丙泊酚表现出对Apo E^(-/-)小鼠AS的改善作用,其机制涉及激活自噬和调节脂质代谢。