梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制研究

目的:探究梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制。方法:将3月龄C57BL/6J野生型小鼠为对照组(control组),构建阿尔茨海默病模型后,将同月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组(model组)、梓醇-川芎嗪方低剂量组(CT-L组)、梓醇-川芎嗪方中剂量组(CT-M组)、梓醇-川芎嗪方高剂量(CT-H组)、安理申组,对照组及模型组均给予生理盐水灌胃,各用药组以相应药物灌胃,每日灌胃1次,连续8周。对各组小鼠进行行为学观察,检测各组小鼠海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及血清中β淀粉样蛋白42(Aβ42)。结果:行为学观察:与model组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组长时程学习和参考记忆能力、自主探究能力、情景识别记忆能力、短期工作记忆能力、条件恐惧记忆能力,缓解焦虑、抑郁状态等7项行为学指标均明显好转(P<0.01);与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组7项行为学指标均明显好转(P<0.05或P<0.01);与CT-M组比较,CT-H组7项行为学指标均明显好转(P<0.05);与Arceipt组比较,CT-H组7项行为学指标均明显好转(P<0.05)。生化检测方面:与model组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高,AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高,AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与CT-M组比较,CT-H组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高(P<0.05),AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低(P<0.05);与Arceipt组比较,CT-H组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高(P<0.05),AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低(P<0.05)。结论:梓醇-川芎嗪方可以改善阿尔茨海默病模型小鼠的长时程学习和参考记忆能力、自主探究能力、情景识别记忆能力、短期工作记忆能力、条件恐惧记忆能力,缓解焦虑、抑郁状态,且其效应呈剂量依赖性,高剂量梓醇-川芎嗪方优于安理申。其作用机制可能与提高海马组织SOD、GSH-Px水平,降低AChE活性及iNOS、IL-6、TNF-α、MDA、Aβ42水平有关。

APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的行为学及病理学特征研究

目的:探讨不同月龄APPswe/PS1dE 9双转基因小鼠行为学及病理学的变化特征,为合理运用该模型研究阿尔茨海默病提供可靠依据。方法:采用旷场实验、新物体辨别实验、Y迷宫以及Morris水迷宫等行为学实验方法观察不同月龄的APP/PS1转基因小鼠的运动、新物体辨别以及学习记忆能力的变化;通过免疫组织化学方法检测不同月龄转基因小鼠脑内Aβ含量及星形胶质细胞数量等病理特征的变化。结果:APPswe/PS1dE 9双转基因小鼠的运动能力随月龄增加逐渐下降,9月龄时对新物体的识别、工作记忆及空间学习记忆能力均出现明显损害。同时,该转基因小鼠的海马在6月龄时开始出现Aβ沉积和星形胶质细胞数量增加,9月龄时各种病理变化更为明显。结论:APPswe/PS1dE 9双转基因小鼠在6月龄时开始出现脑内病理改变,9月龄时各种认知行为发生明显异常。提示该转基因小鼠脑内病理改变可能早于行为异常,因此可根据实验目的选取相应月龄的动物。

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制。方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92mg/(kg·d)]、姜黄素大[400mg/(kg·d)]、中[200mg/(kg·d)]、小[100mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只。每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃。灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化。结果行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型。Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P<0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P<0.05)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P<0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P<0.01)。结论姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力。

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化

目的:研究阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化。方法:C57BL/6J雌鼠与C3H/HeJ雄鼠交配得到F1代,再将F1代与3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠交配得到F2代。F2代小鼠提取鼠尾DNA,PCR扩增目的基因并鉴定。选8月龄F2代同窝小鼠根据是否含APP和PS1基因分为转基因组和野生对照组,用夹尾法分别测定两组异氟醚、七氟醚和地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的最低肺泡有效浓度(MAC值)。结果:繁育F2代小鼠12只,其中转基因组7只,野生对照组5只。转基因组小鼠3种挥发性吸入麻醉剂MAC值分别为异氟醚1.129±0.160,七氟醚1.900±0.153,地氟醚5.614±0.363,均较野生对照组低,但是无统计学差异(P>0.05)。结论:APP/PS1双转基因对8月龄小鼠异氟醚、七氟醚、地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的MAC值无明显影响。

APPswe/PS1dE9双转基因鼠表型综述

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是常见的神经系统退行性疾病,其病因除了与衰老有关以外,还与淀粉样蛋白前体(β-Amyloid precursor protein,APP)基因、早老素(presenilin,PS)1和2基因、载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因和微管相关蛋白tau(microtubule-associated protein tau,MAPT)基因等的遗传缺陷密切相关。将上述突变基因转入动物体内建立AD转基因动物模型为AD发病机制和治疗的研究提供了新的平台。APPswe/PS1dE9双转基因鼠同时携带具有瑞典型突变位点(Swedish KM594/595NL)的人鼠嵌合型APP基因(Mo/Hu APP695)和具有第9个外显子(dE9)突变的人PS1基因,这两种突变基因共同作用,加速淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的产生和沉积,在老年期出现认知功能障碍等行为学异常,较好地模拟了AD的病理特征和渐进性的病程,是常用的AD转基因动物模型。本文系统综述了APPswe/PS1dE9双转基因鼠在Aβ产生和沉积、行为学异常和神经元变性及缺失等方面的表型特点,为其更好地应用于实验室研究提供必要的信息。

异氟醚对阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠学习记忆能力的影响

目的研究异氟醚对阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠学习记忆能力的影响。方法将转基因小鼠分为转基因异氟醚组(Tg-iso组)及转基因空白对照组(Tg-con组),野生型分为野生异氟醚组(Wt-iso组)及野生空白对照组(Wt-con组)。Tg-iso组及Wt-iso组于7个月龄行异氟醚麻醉,吸入1.1%异氟醚2 h,连续5d。同时Tg-con及Wt-con组吸入30%氧气与70%氮气的混合气体。麻醉后48h各组行水迷宫实验,麻醉后5个月各组行Y迷宫实验。结果 7个月龄时:与Wt-con组比较,Wt-iso组的潜伏期缩短(P=0.013);与Tg-con组比较,Tg-iso组的潜伏期缩短(P=0.043);各组间空间探索实验目标象限时间和路程百分比的差异无统计学意义(P=0.392和P=0.300)。12个月龄时:与Tg-con组比较,Wt-con组和Tg-iso组辨别错误次数明显减少(P=0.044和P=0.020)。结论短时间重复吸入低浓度的异氟醚不增加阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠及野生对照型小鼠近期及远期学习记忆能力障碍的风险,反而在一定程度上有减轻的作用。

MicroPET观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑葡萄糖代谢的影响

目的利用18氟-脱氧葡萄糖microPET(18F-FDG microPET)影像学技术观察正常对照组小鼠,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的脑葡萄糖代谢情况。方法随机挑选6月龄正常对照组C57BL/6J小鼠3只,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠各3只,通过2%异氟烷吸入麻醉后,从尾静脉弹丸式注射放射性示踪剂18F-FDG每例约14.8～16.5 MBq,摄取45 min后进行10 min microPET图像采集。计算并比较各组小鼠每克脑组织(除小脑)18F-FDG的摄取率。结果姜黄素治疗组小鼠每克脑组织18F-FDG的摄取率高于正常对照组和模型组。结论姜黄素能明显提高APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑18 F-FDG的摄取及每克脑组织的摄取率,并可能通过影响脑葡萄糖代谢而发挥神经保护作用。

脑苷肌肽对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白42和钙结合蛋白-D28K表达的影响

目的观察脑苷肌肽(cattle encephalon glycoside and ignotin injection,CEGI)对APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠脑内β-淀粉样蛋白42(amyloidβ-peptide,Aβ42)和钙结合蛋白-D28K(calbindin-D28K,CB)表达的影响,探讨CEGI对阿茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的防治作用。方法 APPswe/PS1d E9双转基因AD模型小鼠共48只,随机分为脑苷肌肽低剂量组[Tg+CEGI-L组,腹腔注射CEGI 6.6 ml/(kg·d)]、高剂量组[Tg+CEGI-H组,腹腔注射CEGI 13.2 ml/(kg·d)]、阳性药盐酸多奈哌齐组[Tg+Donepezil组,Donepezil灌胃2 mg/(kg·d)],模型组(Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液),每组12只;同月龄同背景非转基因野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常对照组(n Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液)。小鼠自5月龄开始腹腔注射给药1个月,然后进行Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,硫黄素S荧光染色和免疫组织化学染色检测皮质区Aβ42表达,免疫组织化学染色检测海马CA1区及CA3区CB表达的变化。结果行为学实验,与Tg组比较,Tg+CEGI-L组小鼠空间学习和记忆能力有明显改善(P<0.05);小鼠大脑皮质Aβ42的表达数目在Tg组显著高于Tg+CEGI-L组和Tg+CEGI-H组(43.00±10.03 vs 24.63±10.61/24.89±6.81,P<0.05);小鼠海马CA1区神经元保护性蛋白CB在Tg+CEGI-L组显著高于Tg组(0.056±0.023 vs 0.031±0.001,P<0.05)。结论 CEGI能抑制Aβ42在大脑中的聚集沉积、CB过表达来降低神经元损伤,进而改善APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠的学习记忆能力。

姜黄素对9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠行为学的影响

目的应用Morris水迷宫,测试AD模型APPswe/PS1dE9双转基因小鼠定位航行及空间搜索等学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg/kg.d)、姜黄素高(400 mg/kg.d)、中(200 mg/kg.d)、低剂量组(100 mg/kg.d),每组6只;并以同月龄遗传背景相同的C57/BL6J小鼠作为对照组。每天灌胃给药1次,连续灌胃6个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间学习记忆能力障碍有改善作用,尤以姜黄素大剂量和中剂量组效果比较明显。结论姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的认知功能。

针刺督脉腧穴对APPswe/PS1dE9转基因阿尔茨海默病小鼠的治疗机制研究

目的:借助同位素标记相对与绝对定量(i TRAQ)技术筛选针刺督脉治疗阿尔茨海默病(AD)蛋白靶点,以期为研究针刺治疗阿尔茨海默病的机制提供新思路。方法:将8只7月龄APPswe/PS1dE9转基因雄性幼鼠随机分为模型组和针刺组,每组4只。适应性饲养1周后,针刺督脉治疗组小鼠每只每天在清醒状态下针灸督脉百会、风府、神庭与水沟穴1次,行捻转手法,留针20 min,持续28 d后,采用Morris水迷宫和旷场实验检测各组小鼠学习、记忆和运动能力。行为学实验结束后,采用i TRAQ技术检测各组小鼠海马蛋白质组差异表达,并采用Western blot法对各组小鼠海马组织中FAM98A、SLC3A1及SLC17A7蛋白表达进行验证。结果:与模型组比较,针刺督脉治疗后小鼠第3、4天潜伏期缩短,穿越平台次数增多,中心运动距离和中心区域运动距离增加;且与模型组相比,针刺督脉治疗后小鼠的海马组织中FAM98A、SLC3A1及SLC17A7蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。结论:针刺督脉治疗能够改善AD小鼠的学习认知能力,其治疗机制与FAM98A、SLC3A1及SLC17A7蛋白表达改变相关。

APPswe/PS1dE9双转基因小鼠中轴突异常与阿尔茨海默病的联系

目的探究阿尔茨海默病(AD)模型小鼠(APPswe/PS1dE9双转基因小鼠)中出现的神经元轴突异常及其可能的发生机制。方法RT-qPCR分别测定野生型及APPswe/PS1dE9双转基因小鼠体内神经突起导向因子(netrin)和结肠癌缺失基因(DCC)的表达量;用免疫细胞染色分别测量其海马区神经元轴突长度。结果与野生型相比,APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马区神经元轴突出现明显的缩短,且其脑内netrin-1(P<0.001)、DCC1和DCC2的表达量均有上升(P<0.01)。结论轴突的变化与AD的发生存在一定联系,这样的联系可能通过netrin-1与DCC的相互作用产生。

橙皮素早期干预对APPswe/PS1dE9小鼠学习记忆能力及TLR2、NF-κB表达水平的影响

目的研究橙皮素早期干预对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响与TLR2、NF-κB蛋白的表达。方法12只3月龄C57/B6小鼠为空白对照组,48只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和橙皮素低、中、高剂量组,每组12只。低、中、高剂量组分别灌胃给予橙皮素20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg,空白对照组及模型组灌胃等体积羧甲基纤维素钠(CMC),日1次,连续6个月。采用Morris水迷宫检测各组小鼠记忆能力,HE染色法观察小鼠海马CA1区神经元损伤情况,Western blot法检测小鼠脑组织TLR2和NF-κB蛋白含量。结果与空白对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05),跨越隐匿平台的次数明显减少(P<0.05),海马CA1区神经元损伤明显,TLR2和NF-κB蛋白含量升高(P<0.05);与模型组相比,橙皮素低、中、高剂量组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),跨越隐匿平台的次数增加(P<0.05),海马CA1区神经元损伤较轻,TLR2和NF-κB蛋白含量降低(P<0.05)。结论橙皮素早期干预可明显改善APP/PS1dE9小鼠的学习记忆能力和海马神经元的损伤情况,其机制可能与下调TLR2和NF-κB蛋白表达水平有关。

Cdk5/p25在APPswe/PS1dE9双转基因AD模型小鼠海马内表达与认知功能障碍的关系

目的观察APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠认知功能的变化,探讨其与海马细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5及其激动因子细胞周期蛋白(Cdk5/p25)表达的关系。方法通过Morris水迷宫观察3、6、9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠和同种野生型小鼠学习记忆能力的变化;采用western blotting法及免疫组织化学染色法检测其海马内Cdk5/p25的表达水平。结果通过Morris水迷宫训练发现,3月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆能力与同月龄野生型小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05);而6、9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠较同月龄野生型小鼠定位航行实验潜伏期逐渐延长,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,6、9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马内Cdk5/p25的表达水平较同月龄野生型小鼠增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,6、9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马内Cdk5阳性细胞的表达与同月龄野生型小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.05);且随着年龄的增长,APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马内Cdk5阳性细胞表达逐渐增多,差异有统计学意义(P <0.05)。结论APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆能力的下降与Cdk5/p25活性异常表达有关。

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的行为学研究

目的:研究APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的感觉运动活性/移动探索活性、情感和物体识别能力。方法:采用旷场实验和新颖物体辨别实验分别对6月龄(雌、雄)和12月龄(雄)的APPswe/PS1dE9转基因小鼠进行行为学研究,以同窝同龄同性别野生型小鼠为对照。结果:在旷场实验中,与野生型小鼠相比,双转基因小鼠在12月龄时出现探索活性降低且可能更具有焦虑倾向(P<0.05);而在物体识别任务中,各研究组间差异无统计学意义。结论:APPswe/PS1dE9双转基因小鼠能较好地模拟AD患者的部分精神行为症状,为AD的发病机制和治疗研究提供了有价值的工具。

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ42及其降解酶NEP表达的影响

目的:观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ42及其降解酶NEP表达的影响。方法:将3月龄的APP-swe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组、姜黄素高、中、低剂量组。灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学、Western blot等方法进行检测。结果:行为学检测,治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验存在不同程度的差异(P<0.01或P<0.05)。Aβ42及其降解酶NEP表达,模型组小鼠大脑海马CA1区较正常对照组Aβ42阳性细胞明显增加(P<0.01)。结论:姜黄素能通过增加Aβ42降解酶NEP表达、降低Aβ42蛋白,进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力。

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠学习记忆能力的比较

目的:比较不同年龄段阿尔茨海默病(AD)APPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠的学习记忆能力。方法:C57BL/6J雌鼠与C3H/HeJ雄鼠交配产下F1代,再将F1代与3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠交配产下F2代。提取F2代小鼠鼠尾DNA,PCR扩增目的基因并鉴定。依据是否含APP和PS1基因分为转基因型组和野生型对照组,小鼠分别于6、8月龄行Morris水迷宫实验,11月龄行Y迷宫实验检测学习记忆能力。结果:繁育F2代小鼠33只,其中转基因型组18只,野生型对照组15只。6月龄转基因型与野生型小鼠定位航行实验潜伏期的差异无统计学意义,空间探索实验目标象限时间和路程百分比的差异无统计学意义(P>0.05)。与8月龄野生型小鼠比较,转基因型小鼠定位航行实验第1天潜伏期延长(P<0.05)。与11月龄野生型小鼠比较,转基因型小鼠达到学会标准的训练次数增加(P<0.05)。结论:ADAPPswe/PS1dE9双转基因型与野生型小鼠比较,于11月龄时出现学习记忆能力障碍。

金思维提取物对APPswe/PS1dE9转基因小鼠海马淀粉样前体蛋白表达水平的影响

目的观察金思维提取物(GAPT)对APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP表达水平的影响。方法将3月龄的APPswe/PS1d E9转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组及GAPT大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常组,每组12只,灌胃给药6个月后,以蛋白印迹法(Western blot)检测海马内淀粉样前体蛋白(APP)表达变化。结果模型组小鼠海马中APP表达水平显著高于正常组(P<0.01);各治疗组与模型组相比,APP蛋白表达水平均显著降低,其中GAPT小剂量组(P<0.01)、GAPT中剂量组(P<0.01)、GAPT大剂量组(P<0.01)、多奈哌齐组(P<0.01);各GAPT组与多奈哌齐组比较结果 APP表达水平均高于多奈哌齐组,其中GAPT小剂量组(P<0.01)、GAPT中剂量组(P<0.01)有显著性差异,而GAPT大剂量组(P>0.05)无明显差异。结论GAPT可能具有抑制APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP蛋白过度表达的作用。

心肌细胞内质网应激介导APPswe/PS1dE9转基因成年小鼠发生心肌肥厚的研究

目的:探讨内质网应激在APPswe/PS1dE9转基因成年小鼠发生心肌肥厚中的作用。方法:选择APPswe/PS1dE9转基因成年小鼠及野生型(WT)成年小鼠各10只,分别为转基因实验组及对照组、野生型实验组及对照组,每组各5只,实验组背部皮下注射低剂量异丙肾上腺素(ISO)(2 mg/kg),每日1次,连续4周;对照组注射同等体积的生理盐水,4周后麻醉各组小鼠,描记体表心电图,计算心率,测量体重后处死,取出心脏,测量心脏质量及左室质量,计算左心室重量指数(LVW/BW)及全心重量比(HW/BW)。用于HE染色法测定心肌细胞病理形态学变化,应用Western Blot方法及免疫组织化学方法检测内质网应激相关蛋白即GRP78、JNK、P-JNK及CaMKⅡ的表达。结果:APPswe/PS1dE9转基因小鼠在低剂量的ISO诱导后较WT小鼠心脏明显肥大,APPswe/PS1dE9转基因实验组较转基因对照组及WT小鼠实验组及对照组HW/BW及LVW/BW显著增加(P<0.05);HE染色可见APPswe/PS1dE9转基因实验组较转基因对照组及WT实验组、对照组心肌细胞直径明显变大,细胞密度变小,毛细血管密度减少,细胞间质增多,细胞间距变大。Western blot结果显示APPswe/PS1dE9转基因实验组GRP78、p-JNK及CaMKⅡ的表达较转基因对照组及WT两组明显增加(P<0.05,P<0.01),而转基因对照组与WT两组无明显差异。免疫组化结果显示APPswe/PS1dE9转基因实验组GRP78及CaMKⅡ蛋白在心肌细胞胞浆中表达阳性率80%,明显高于野生型实验组(40%)(P<0.05),两组对照组表达均为阴性;转基因实验组p-JNK表达为90%,JNK表达为30%,其它三组均为阴性。结论:APPswe/PS1dE9转基因成年小鼠在较低剂量的ISO诱导后较WT实验组更容易出现心肌肥厚,内质网应激参与了APPswe/PS1dE9转基因成年小鼠心肌肥厚的发生。

姜黄素对APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠学习记忆能力及大脑中Aβ_(42)表达的影响

目的观察姜黄素对APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠学习记忆能力和大脑β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)42表达的影响,探讨姜黄素在阿尔采末病(Alzheimer’sdisease,AD)防治中的作用。方法将20只6月龄APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠随机分为对照组和姜黄素饲喂组,每组10只。姜黄素饲喂组每天饲喂姜黄素(500 mg·L-1),6个月后采用Morris水迷宫实验方法及恐惧实验方法检测小鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测小鼠大脑Aβ42表达的变化。结果与对照组相比,姜黄素饲喂组小鼠空间学习和记忆能力有明显改善(P<0.01),大脑中Aβ42表达明显减少。结论姜黄素能降低APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠大脑中Aβ42的表达,进而改善小鼠的学习记忆能力。

海马内注射PrP^C抗体对APPswe/PSEN1^(dE9)转基因小鼠学习和记忆的影响

目的观察海马内注射PrP^C抗体后,对APPswe/PSEN1^(dE9)转基因小鼠认知缺陷的影响。方法选8月龄雄APPswe/PSEN1^(dE9)转基因小鼠双侧海马内注射PrP^C抗体EP1802Y 2μL或PBS 2μL,C57Bl/6J野生型小鼠为正常对照。2月后,通过旷场实验、新物体识别实验、Morris水迷宫实验、条件性恐惧测试及免疫组化,观察APPswe/PSEN1^(dE9)转基因小鼠行为学及海马内Aβ1-42表达的变化。结果旷场实验中,假手术组与实验组相比,中央活动时间和活动总路程均无明显差异(P>0.05);新物体识别实验中,假手术组分辨指数与实验组分辨指数相比,无显著性差异(P>0.05);在Morris水迷宫实验的空间探索测试中,与正常组相比,假手术组和实验组穿越平台次数显著性减少(P<0.05)。并且假手术组与实验组游泳路程相比,具有显著性差异(P<0.05);在条件恐惧实验中,各组之间无显著性差异;免疫组化的结果显示,实验组小鼠海马内Aβ1-42表达下调。结论 PrP^C抗体可以部分改善APPswe/PSEN1^(dE9)转基因小鼠的认知能力,提示海马内封闭PrP^C蛋白与Aβ寡聚体结合的位点后,或许可以降低Aβ寡聚体毒性。