aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞凋亡的促进作用

目的观察aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法使用不同浓度的aptamer-siRNA溶液转染K562细胞,噻唑蓝(MTT)法检测aptamer-siRNA对K562细胞增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测aptamer-siRNA对K562细胞凋亡的影响,Western blot和RT-PCR法检测aptamer-siRNA对K562细胞bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果与对照组相比,转染aptamer-siRNA后K562细胞增殖受到明显抑制,K562细胞的早期凋亡率明显增加,细胞中bcl-2蛋白和mRNA的表达水平明显降低,Bax和caspase-3蛋白和mRNA的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。aptamersiRNA核酸复合物浓度(50~250μmol/L)对bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA的影响具有明显的量效关系。结论aptamer-siRNA核酸复合物能够通过促使bcl-2基因减少和Bax、caspase-3基因增长,进而促进K562细胞凋亡。

Aptamer-siRNA核酸复合物对人CML K562细胞增殖与凋亡诱导作用研究

目的:探讨aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞K562细胞系的凋亡诱导作用。方法:以SELEX技术筛选人融合蛋白BCR-ABL核酸适体,合成aptmer-siRNA核酸复合物,在荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、JEM-4000EX透射电镜下观察K562细胞形态结构改变,MTT法检测aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况。结果:在荧光显微镜和电子显微镜下,经200μmol/L核酸复合物作用的K562细胞形态和结构发生明显改变;Aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞生长具有明显的抑制作用,与对照组相比,差异具有显著的统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果显示,aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞的IC50值为150μmol/L,统计学分析证明,差异有显著的统计学意义(P<0.05)。经琼脂糖凝胶电泳显示,在aptamer-siRNA核酸复合物作用K562细胞中可见明显DNA凋亡梯带。结论:aptamer-siRNA核酸复合物可显著诱导人K562细胞的凋亡,为治疗人慢性髓系白血病提供参考。

Aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)小鼠模型凋亡信号转导的影响

SELEX技术筛选人慢性粒细胞白血病(CML)核酸适配子,合成aptamer-si RNA核酸复合物,观察aptamer-si RNA核酸复合物干预NOD/SCID小鼠慢性粒细胞白血病(CML)bcr-abl融合基因及P210、P53、TNF-α、bcl-xl相关因子表达水平。将K562细胞接种于全身照射后的裸鼠,待皮下成瘤后取出瘤块,制备成瘤细胞混悬液,再尾静脉接种于NOD/SCID小鼠,实验成功建立了全身播散型白血病模型,对实验小鼠行随机分组,以RT-PCR法检测aptamer-si RNA核酸复合物治疗小鼠体内bcr-abl融合基因表达水平,ELASA法检测小鼠P210、P53、TNF-α、bcl-xl表达水平。实验结果表明:Aptamer-si RNA核酸复合物可显著降低模型小鼠体内融合基因bcr-abl及融合蛋白P210表达水平,能提升P53表达,抑制TNF-α、bcl-xl过度表达,其抑制效果与aptamer-si RNA核酸复合物浓度有一定的相关性。aptamer-si RNA核酸复合物通过干预CMLbcr-abl融合基因及其表达的融合蛋白P210,影响细胞信号传导通路途径,有效阻断了CML传变的进展,揭示了aptamer-si RNA核酸复合物干预CML疾病的微观机理。

基于核酸适配体-质粒DNA复合物信号放大的荧光免疫传感技术

提出了一种简便、高灵敏的荧光免疫传感新技术,通过抗体/抗原/核酸适配体-质粒DNA复合物的特异性识别与双链质粒DNA与荧光染料SYBR GreenⅠ的嵌合作用,实现对血小板衍生增长因子BB(PDGF-BB)的检测。生物识别反应在微孔板中进行,PDGF-BB抗原与微孔板底部预包被的PDGF-BB抗体免疫反应后,加入核酸适配体-质粒DNA复合物与抗原形成夹心复合物。加入DNA双链嵌合染料SYBR GreenⅠ与夹心复合物的双链DNA部分结合可产生强荧光,其荧光强度可用于定量测定PDGF-BB浓度。实验考察了离子浓度、核酸适配体的延伸引物片段与质粒PUC19的反应比例、染料SYBR GreenⅠ浓度等分析条件对荧光信号的影响。在优化反应条件下,PDGF-BB检测的线性范围为0.2～200μg/L,检出限为0.1μg/L,并且实现了对人血清中PDGF-BB的定量检测。

蛋白质-核酸复合物氢键与范德华力作用位点分析

为了深入了解蛋白质-核酸相互作用模式,对复合物结构中氢键/范德华力作用力位点上的氨基酸和核苷酸的偏好性(即相对使用频率)进行了统计分析.结果表明:氢键/范德华力作用位点上对氨基酸的偏好性差异均极其显著,与蛋白质-核酸特异作用密切相关的残基侧链与核苷酸碱基间相互作用力位点对氨基酸类型的选择特异性更高;单链RNA分子与蛋白质发生相互作用时对氨基酸残基的偏好性和双链RNA分子差异不显著;氨基酸的极性大小及方向在决定其是否与核酸分子形成范德华力作用具有重要贡献,氨基酸侧链形成的空间位阻会阻碍其与核酸分子形成氢键作用;蛋白质-DNA复合物结构氢键/范德华力作用位点上残基间空间协同作用时对氨基酸类型的选择与蛋白质-RNA复合物结构间存在显著差异.

免疫复合物法从病料中提取小鹅瘟病毒核酸的研究

本文报道应用免疫复合物法从病料中提取小鹅瘟病毒核酸。将病死雏鹅肠及内容物研磨成乳状 ,冻融 ,氯仿抽提 ,按 10∶1加入小鹅瘟特异高免卵黄抗体 ,并于 3 7℃反应 2h后 ,离心沉淀病毒抗体复合物 ,再经蛋白酶K消化 ,酚、酚∶氯仿∶异戊醇、氯仿∶异戊醇抽提 ,乙醇沉淀。TE溶解核酸后电泳鉴定。提取核酸为一条带 。

蛋白质-核酸复合物中氢键和范德华力作用位点偏好性分析

对蛋白质-核酸复合物结构中氢键/范德华力作用位点氨基酸与核苷酸的偏好性(即相对使用频率)进行了统计分析。发现:(1)在蛋白质-DNA复合物结构中,范德华力作用对与氢键数量相当;而在蛋白质-RNA复合物结构中,范德华力作用对数量要远多于氢键;(2)复合物结构中氢键和范德华力作用位点上对氨基酸的偏好性差异显著;(3)氨基酸的极性大小及方向在决定它是否与DNA/RNA分子形成氢键/范德华力相互作用时起到重要的作用。

携带者的艾滋病病毒核糖核酸通常由中和的免疫复合物组成

美国德克萨斯大学的Baron博士等近日发现,在艾滋病病毒(HIV)携带者体内,HIV核糖核酸(RNA)的载量尽管较高,但传染性较低,其原因可能与多数HIV RNA实际上都是由中和的免疫复合物组成有关。他们以16名慢性和2名急性HIV感染者为研究对象,对其血浆样本进行了分析。结果发现,携带者体内的HIV RNA通常都与免疫球蛋白G(IgG)相偶合。与之相反的是。

磁性纳米复合物对人肝癌细胞增殖能力的影响

目的探讨磁性纳米复合物对人肝细胞癌(肝癌)细胞(Hep G2细胞株)增殖能力的影响。方法以聚乙烯亚胺包被的磁性纳米复合物(PEI-SPIO)作为基因载体复合富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体(LGR)5-小干扰RNA(siRNA),待细胞融合达60%时转染Hep G2细胞建立PEI组,等量的单纯LGR5-siRNA转染Hep G2建立SI组,另设未转染对照(Ctrl)组。采用MRI T2扫描检测纳米复合物进入细胞的效率,细胞计数试剂盒(CCK)-8实验检测细胞增殖抑制率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞LGR5的信使核糖核酸(mRNA)表达水平,蛋白印迹法检测LGR5、cyclin D1蛋白表达。结果 PEI组Hep G2细胞的MRI T2信号明显减低。与Ctrl组相比,PEI组Hep G2细胞的细胞增殖抑制率明显升高,LGR5 mRNA的相对表达量和LGR5、cyclin D1蛋白相对表达量均明显降低(均为P<0.05),而SI组细胞的相应指标差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论磁性纳米复合物PEI-SPIO复合LGR5-siRNA可有效转染Hep G2细胞,其机制可能是通过下调cyclin D1表达水平抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖能力。

MALDI方法研究蛋白质的非共价复合物

飞行时间质谱仪（ＴＯＦＭＳ）在理论上无质量范围的限制，可实现大分子蛋白质与核酸的非共价复合物的直接检测．特别是在近中性溶液条件下通过对芥子酸和６－氮杂－２－硫代胸腺嘧啶基质的使用及双层样品制备方法的改善，获得了稳定复合物的高灵敏度质谱检测．肌红蛋白－血红素复合物能够在芥子酸基质的不同ｐＨ条件下（ｐＨ２．０或ｐＨ５．０）同时观察到．而运用双层样品制备方法，获得了核糖核酸酶复合物（ＲＮａｓｅＳ）在第一次激光照射下的突出质谱峰。

DNA和菲啶鎓复合物嵌入水滑石的研究

平面状生物荧光探针分子溴化乙锭 (溴化 3 ,8 二氨基 5 乙基 6 苯基菲啶 ,3 ,8 diamino 5 ethyl 6 phenylphenanthridiniumboromide ,简称EthidiumBromide或EB)与双螺旋状的脱氧核糖核酸分子DNA相互作用生成DNA ET (Ethidium又称菲啶 ,简写ET)复合物 .将镁铝水滑石 (HT)煅烧后的产物与DNA ET复合物作用 ,得到一种新复合化合物HT DNA ET .经X射线衍射分析 ,在HT DNA ET中 ,DNA ET复合物已嵌入到HT无机层板间 .根据增大的层间距及DNA和ET的分子结构 ,可判断HT DNA ET复合化合物具有夹心型结构 ,两层DNA ET复合物平行组装在HT层板间 .圆二色谱和红外光谱也证实层间DNA ET复合物的存在 .复合化合物HT DNA ET在λex=488nm激光激发下 ,发出λem ,max=610nm的荧光 .与在同样条件下DNA ET复合物发出的荧光相比 ,复合化合物HT DNA ET的λem ,max向低波长方向移动了 2

基于DHA-L-cys复合物电化学探针对错配碱基DNA的识别与检测

脱氧核糖核酸（DNA）是生物的基本遗传物质，生物样品中特定DNA序列的测定可用于对遗传性和传染性疾病进行检测和鉴别。电化学方法具有简便快速、不破坏测试样品、信号灵敏等特点。文献报道通过静电作用，共价键合等方法固定捕获DNA，构建基因生物传感器。研究表明双氢青蒿素（DHA）与L-半胱氨酸（L-cys）能形成电活性复合物，其还原信号非常灵敏。

MNP-hTR复合物对K562细胞增殖影响的实验研究

探讨MNP-端粒酶反义寡核苷酸复合物,对K562细胞凋亡和增殖的影响。应用荧光显微镜检测法和集落形成法,分别观察了凋亡细胞的形态学变化和细胞增殖能力。MNP-端粒酶反义核酸复合物可诱导K562细胞凋亡和抑制细胞增殖,两实验组数值经统计学处理,具有非常显著性差异(p分别<0.001)。由此认为,MNP-端粒酶反义核酸复合物对K562白血病细胞具有促进凋亡的作用,此效果与剂量呈依赖性关系(r=0.992)。

肝细胞靶向性Asor-PLL-DNA复合物的构建

目的:构建肝细胞靶向性Asor-PLL-DNA复合物。方法:将携带外源基因的质粒与脱唾液酸糖蛋白结合在一起,形成一种可溶性的蛋白-核酸复合物。结果:该复合物能通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞作用,以非病毒感染的方式,将外源基因导入肝细胞并得以表达。结论:和传统的重组病毒介导的基因转移方式相比,该复合物具有更高的靶向性、安全性,该系统的建立为以肝细胞为靶组织的外源基因介导的肝脏相关疾病的基因治疗提供实验基础。

人源雄激素受体DNA结合结构域的原核表达与其响应元件的复合物结晶

为获得高分辨率的雄激素受体与其响应元件的复合物晶体结构,为前列腺癌的治疗提供药物靶点设计的理论基础.本研究构建了AR-DBD的原核表达载体,在0.5 mmol/L IPTG,16℃条件下诱导24 h表达该蛋白.通过与AR响应元件寡核酸的结合优化蛋白纯化条件,使AR-DBD蛋白易于纯化.最终,蛋白核酸复合物晶体呈现出边缘清晰,短棒状的立体结构,本研究制备的蛋白核酸复合物晶体可直接用于X射线衍射分析.

牙周炎患者自身组织核酸内NLRP3 mRNA表达水平测定

目的:通过对牙周炎患者自身组织核酸内炎性小体复合物NLRP3,NLRC4及其相关基因IL-18,IL-1β,Caspase-1等mRNA表达水平的检测,明确炎性小体NLRP3在牙周炎中具有调控作用。方法:采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎性牙周组织以及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织,提取总RNA逆转录cDNA,-20℃冻存备用。Real-time PCR检测NLRP3、NLRC4、IL-18、IL-1β、Caspase-1mRNA的表达。结果:与健康组牙周组织相比较,牙周炎患者自身组织核酸内NLRP3、IL-18、IL-1β、Caspase-1mRNA的表达水平明显增高;而NLRC4mRNA的表达在两组间差异不显著。结论:NLRP3及其相关基因IL-18、IL-1β、Caspase-1mRNA在牙周炎患者自身组织核酸内的高表达,提示NLRP3在牙周炎的发病机制中具有影响作用。

基于核酸分子杂交的免疫芯片抗体固定新方法

基于核酸分子杂交原理构建了一种新型抗体固定方法。先将抗体与寡核苷酸单链交联,再将两者的复合物与固相载体表面上的互补寡核苷酸链结合,从而将抗体固定到载体的表面。在磁珠表面对该固定方法进行实验,证明了方法的可行性。以本方法构建了针对转基因Bt Cry1Ac蛋白的免疫芯片,用Cy3标记二抗对其探针固定效果进行分析,并且在芯片上对Bt Cry1Ac蛋白进行梯度浓度检测试验。结果表明,以本方法构建的抗体芯片,探针分布具有良好的特异性;探针层分布均匀,非特异吸附小;检测灵敏度达到0.01～0.05!g/L;此外,通过杂交核酸双链的解离成功实现了芯片的再生,有助于解决传统抗体固定方法中芯片不可再生的问题。

脱氧核糖核酸-聚胺基酰胺树状间隔臂-(二氧化锆-脲醛树脂)亲和色谱固定相的合成及其应用

报道了一种高效液相亲和色谱固定相的合成方法。以３－５μｍ的非多孔二氧化锆与脲醛树脂（ＵＴＲ）复合物微球用作高效液相亲和色谱固定相的基体，并用扫描电子显微镜检验该基体的结构和粒径。用此基体末端的酸胺基团为核心，分别与丙烯酸甲酯、乙二胺重复进行三次马氏加成反应和胺化反应，就形成末端为胺基的聚胺基酰胺（ＰＡＭＡＭ）星型树状间隔臂。用１３Ｃ固体核磁共振检测了树状间隔臂的拓扑结构。此间隔臂用丁二酸进行丁二酰化，并在１－乙基－３－（３－二甲基氨丙基）碳化二胺（ＥＤＡＣ）的存在下用Ｎ－羟基丁二酰亚胺（ＮＨＳ）活化，最后与配位体脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）键合，并用紫外分光光度法测定了配位体容量。从而制备了一种［ＤＮＡ（ＰＡＭＡＭ）－（ＺｒＯ２－ＵＦＲ）］高效液相亲和色谱固定相。通过优化色谱柱操作参数，其已用于蛋白质的分析和核糖核酸（ＲＮＡ）碎片的分离。

核酸适配体在病毒性疾病治疗中的研究进展

核酸适配体是一类通过指数级富集的配体进化技术(SELEX)获得的能以较高的亲和力与各类靶标特异性结合的小分子单链DNA或RNA。与抗体相比,核酸适配体具有合成简单、免疫原性低、体外容易修饰、价格低廉等优势,已在生物医学方面发挥了重要作用。病毒性疾病严重威胁人类健康,然而目前尚未有非常有效且毒副作用小的抗病毒药物。近年来核酸适配体在病毒性疾病治疗中的应用引起人们关注,已有越来越多的研究围绕核酸适配体作为抗病毒药物的应用而展开。核酸适配体可与病毒蛋白或核酸以高特异性及高亲和力结合,一些特异的核酸适配体可通过阻止病毒感染细胞的任一阶段如吸附、复制等达到抑制抗病毒作用,显示了较强大的抗病毒应用潜能。我们简要综述核酸适配体在病毒性疾病治疗方面的研究进展。