期刊文献+
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
胸膜肺炎放线杆菌apxⅡCA基因的克隆、表达及ApxⅡ-ELISA检测方法的初步建立 被引量:8
1
作者 徐晓娟 何启盖 +1 位作者 徐高原 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期335-337,共3页
根据国外已发表的胸膜肺炎放线杆菌 (APP) Apx 的基因序列设计了 1对引物 ,从我国 APP武汉株扩增出约3.5 kb的 apx CA基因。测序结果表明 ,该基因的大小与国外已报道的 1型和 9型 APP的 apx CA基因大小一致 ,同源性达 99%。将该基因连... 根据国外已发表的胸膜肺炎放线杆菌 (APP) Apx 的基因序列设计了 1对引物 ,从我国 APP武汉株扩增出约3.5 kb的 apx CA基因。测序结果表明 ,该基因的大小与国外已报道的 1型和 9型 APP的 apx CA基因大小一致 ,同源性达 99%。将该基因连接到原核表达载体 p ET- 17b,构建了原核表达质粒 p ET- apx CA,并在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中表达出了大小约 10 5 0 0 0的 Apx 蛋白。提取包涵体蛋白作为抗原包被 EL ISA酶标板 ,对已知阳性、阴性血清和临床送检血清样品进行了 EL ISA检测 ,从而为最终建立 Apx - EL 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxCA基因 克隆 表达 ELISA
下载PDF
猪胸膜肺炎放线杆菌APXⅡA基因原核表达载体的构建及其表达 被引量:2
2
作者 逯忠新 赵卫平 +5 位作者 赵萍 周建胜 杨学山 高鹏程 储岳峰 王冬梅 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第8期36-38,共3页
经PCR从含有APXⅡA基因片段的重组质粒 pT APXⅡA中扩增出了APXⅡA基因。同时对目的基因和表达质粒 pGEX 4T 1进行了双酶切 ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析 ,证明连接向位和阅读框架正确。成功构建了APXⅡA基因的原核表达载... 经PCR从含有APXⅡA基因片段的重组质粒 pT APXⅡA中扩增出了APXⅡA基因。同时对目的基因和表达质粒 pGEX 4T 1进行了双酶切 ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析 ,证明连接向位和阅读框架正确。成功构建了APXⅡA基因的原核表达载体 pGEX APXⅡA。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下 ,用SDS PAGE分析表达目的蛋白。结果表明 ,蛋白质的分子质量为 10 2 .5ku。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 apxA基因 原核表达 载体
下载PDF
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxII基因无药物抗性标记突变株HBC^-/ GFP^+的构建及其生物学特性研究 被引量:2
3
作者 贝为成 何启盖 +5 位作者 方六荣 肖少波 刘丽娜 洪文洲 刘正飞 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期719-724,共6页
通过使用枯草芽胞杆菌一个蔗糖敏感sacB基因发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统 ,这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体。首先 ,构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxII基因GFP插入失活型的重组质粒pOSAKCG ,其... 通过使用枯草芽胞杆菌一个蔗糖敏感sacB基因发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统 ,这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体。首先 ,构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxII基因GFP插入失活型的重组质粒pOSAKCG ,其中一个表达盒含有氨苄青霉素基因和以外膜蛋白omlA作为启动子表达sacB基因。重组质粒pOSAKCG通过电穿孔转化 ,它的突变apxIICA基因与野生型亲本菌株胸膜肺炎放线杆菌HB0 3染色体上野生型apxIICA基因发生同源交换 ,两步法筛选获得了apxII基因突变株HBC- GFP+ ,PCR和Southernblot对突变株进行初步鉴定 ,进一步对突变株的一些生物学特性 ,包括它的溶血活性、免疫原性、生长特性及其对小鼠的安全性进行了研究。结果表明 ,无药物抗性标记突变株的构建是成功的。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎放线杆菌 毒素 apxⅱ基因 负向选择 突变株 疫苗
下载PDF
胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ C突变株转移载体pSKPG的构建 被引量:2
4
作者 徐晓娟 何启盖 +1 位作者 陈焕春 徐高原 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期551-554,共4页
通过 PCR方法克隆了胸膜肺炎放线杆菌 ( Actinobacillus pleuropneum oniae)武汉株完整的 apx C基因和部分apx A基因约 3.4 kb。将该 DNA片段克隆到载体 p Bluescript SK( + )中得到质粒 p SKPP,并进一步将 gfp基因插入到 apx C基因的 X... 通过 PCR方法克隆了胸膜肺炎放线杆菌 ( Actinobacillus pleuropneum oniae)武汉株完整的 apx C基因和部分apx A基因约 3.4 kb。将该 DNA片段克隆到载体 p Bluescript SK( + )中得到质粒 p SKPP,并进一步将 gfp基因插入到 apx C基因的 Xba1 位点处 ,构建了 apx C基因插入失活的转移载体 p SKPG,从而为构建胸膜肺炎放线杆菌apx 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 传染性胸膜肺炎 apxC基因 转移载体 毒力基因 基因改造
下载PDF
重叠片断PCR方法构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ C突变载体pBSCA(-)
5
作者 焦淼 黄克和 +1 位作者 王贵平 李春玲 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第5期133-136,共4页
通过PCR克隆得到了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型完整的apxⅡC基因和部分apxⅡA基因约2 000 bp,通过重叠片段PCR方法使apxⅡC基因缺失,并将该DNA片段克隆到PBS-T载体中构建了apxⅡC基因失活的转移载体pBSCA(-),为构建猪传染性胸膜肺... 通过PCR克隆得到了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型完整的apxⅡC基因和部分apxⅡA基因约2 000 bp,通过重叠片段PCR方法使apxⅡC基因缺失,并将该DNA片段克隆到PBS-T载体中构建了apxⅡC基因失活的转移载体pBSCA(-),为构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型apxⅡC缺失菌株打下基础。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 基因 缺失 apxC基因 载体
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部