Aqp5-C末端截断小鼠的构建及其潜在应用

目的 Aqp5蛋白的C末端结构对其功能的发挥起着重要作用。本研究旨在通过构建Aqp5-C末端6个氨基酸缺失的突变小鼠,验证Aqp5-C末端6个氨基酸缺失对该蛋白亚细胞定位的影响,并初步比较研究此突变小鼠的肺脏组织结构和转录组的改变,探讨该突变小鼠用于Aqp5功能研究的潜在应用价值。方法 采用基于gRNA的CRISPER Cas 9技术构建Aqp5末端6个氨基酸缺失的突变小鼠(Aqp5-p.I260*)并进行序列鉴定,采用组织切片、荧光染色和显微镜观察等手段明确突变蛋白在肺泡上皮细胞的亚细胞定位和突变小鼠肺组织结构,采用转录组测序研究突变小鼠肺脏基因差异表达。结果 本研究成功构建了Aqp5蛋白C末端截断小鼠,发现p.I260*改变了亚细胞定位,Aqp5-p.I260*鼠肺泡数目少于野生鼠;Aqp5-p.I260*小鼠肺组织的转录组上调基因主要富集于发育和造血细胞谱系等通路,其Aqp5功能缺陷后诱发炎症相关通路基因(Hspa1a、IL-1β、Col3a1等)的表达水平改变。结论 本研究在体验证了小鼠Aqp5蛋白C末端6个氨基酸缺失突变对该蛋白细胞膜定位的关键作用,表明了以该小鼠作为Aqp5功能缺陷模型探讨Aqp5蛋白在肺发育和骨髓造血、炎症和免疫调节等生物学功能的潜在应用价值。

鼻敏康合剂对变应性鼻炎大鼠IgE、AQP5表达的影响

目的探究鼻敏康合剂对变应性鼻炎大鼠血清IgE、OVA-sIgE、AQP5表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、氯雷他定组(0.9 mg/kg)以及鼻敏康合剂低、中、高剂量组(2.53、5.06、10.12 g/kg),每组10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用卵清蛋白(OVA)致敏法建立变应性鼻炎大鼠模型。造模结束后,各组大鼠灌胃给予相应药物,连续2周。采用叠加量化法记录各组大鼠症状积分,ELISA法检测血清IgE、OVA-sIgE、AQP5水平,免疫组化及RT-qPCR法检测鼻黏膜AQP5蛋白及mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠症状积分,血清IgE、OVA-sIgE、AQP5水平,鼻黏膜AQP5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,氯雷他定组与鼻敏康合剂各剂量组症状积分,血清IgE、OVA-sIgE、AQP5水平,鼻黏膜AQP5蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),且鼻敏康合剂各剂量组与氯雷他定组比较,各指标无显著差异(P>0.05)。结论鼻敏康合剂可通过抑制IgE、OVA-sIgE、AQP5表达,改善鼻腔局部水液代谢,减轻鼻腔黏膜炎症,对变应性鼻炎起到治疗作用。

AQP5对胃癌干细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响

目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)生物学行为的影响及机制。方法将胃癌细胞AGS通过无血清悬浮成球培养技术富集胃癌干细胞(AGS-GCSC)。通过流式细胞术检测AGS和无血清培养富集的AGS-GCSC中胃癌干性标志物CD133的阳性率来鉴定所富集的AGS-GCSC是否符合后续实验要求。Western blot和qRT-PCR检测AGS和富集的AGS-GCSC中AQP5及胃癌干性标志物八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和CD133的表达。运用慢病毒技术将富集的AGS-GCSC分为两组:sh-NC组(阴性对照组)和sh-AQP5组(AQP5低表达组)。通过CCK-8、平板克隆、Transwell、干细胞成球实验检测sh-NC组和sh-AQP5组增殖、迁移、侵袭和成球能力。通过Western blot技术检测sh-NC组和sh-AQP5组中胃癌干性标志物OCT4、CD133的表达。Western blot检测sh-NC组和sh-AQP5组CAMKK2/AMPK通路相关蛋白(磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK)以及自噬相关蛋白(ATG7、P62、LC3Ⅱ)的表达情况。结果流式细胞术结果显示,与胃癌细胞AGS相比,AGS-GCSC中CD133的阳性率明显增加(P<0.05),符合后续实验需求。Western blot和qRT-PCR结果显示,与胃癌细胞AGS相比,无血清培养富集的AGS-GCSC中高表达AQP5和胃癌干性标志物OCT4、CD133(P<0.05)。CCK-8、平板克隆、Transwell及成球实验表明,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC增殖、迁移、侵袭和成球能力下降(P<0.05)。另外,Western blot实验结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC中干性标志物OCT4、CD133表达下调(P<0.05)。Western blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK的蛋白水平下调,自噬相关蛋白ATG7、LC3Ⅱ表达降低,P62表达增加(P<0.05)。结论AQP5可能通过调控CAMKK2/AMPK通路抑制自噬影响GCSC的生物学功能。

基于NFKB/STAT3信号通路探究防风多糖对过敏性鼻炎大鼠行为学、AQP5及鼻粘膜组织的影响

目的基于NF-κB/STAT3信号通路探究防风多糖对过敏性鼻炎大鼠行为学、AQP5及鼻粘膜组织的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组,模型(M)组,糠酸莫米松(F)组,防风多糖(W)组,每组10只,采用卵清蛋白致敏法建立过敏性鼻炎模型,N组不建立该模型,建模成功后,对F组给予1喷/侧的糠酸莫米松喷鼻治疗,对W组灌胃600㎎/㎏的防风多糖,N组、M组同期给与灌胃同体积生理盐水,观察大鼠一般情况并对其行为学进行评分,HE染色法检测鼻黏膜组织病理形态,免疫组化法检测鼻黏膜组织中AQP5表达,免疫印迹法检测鼻黏膜组织中NF-κB/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果实验开始前各组大鼠均活动饮食正常且精神状态良好,未见流涕、喷嚏、挠鼻等症状,造模完成后,可见大鼠精神状态明显变差,进食及活动明显减少,且可见被毛凌乱无光泽,出现常见抓鼻动作,喷嚏频发,大量鼻分泌物流出鼻前孔,给药后,大鼠纳食摄水都逐渐恢复正常,精神状态良好,喷嚏、流涕、挠鼻等症状都较治疗前有明显缓解,均无脏器损伤,但各组大鼠体重无明显变化(P>0.05);与N组相比,M组行为学评分显著升高(P<0.05),与M组比较,F、W两组行为学评分显著降低(P<0.05),且W组比F组降低显著(P<0.05);N组大鼠鼻黏膜组织结构完整、平滑且排列整齐,腺体大小正常,未见明显上皮坏死脱落、炎性细胞浸润及明显血管扩张或充血现象,M组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,可见鼻粘膜上皮细胞破坏变性,出现纤毛坏死甚至脱落现象,可见明显腺体增生、肿胀、出血及炎性细胞浸润,与M组相比,F组、W组病理状态明显改善,炎性细胞明显减少;与N组比较,M组鼻黏膜组织中AQP5蛋白表达显著降低(P<0.05),与M组比较,F组、W组鼻黏膜组织中AQP5蛋白表达显著升高(P<0.05),且W组比F组升高显著(P<0.05);与N组比较,M组鼻黏膜组织中NF-κB、P-NF-κB、STAT3、P-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05),与M组比较,F组、W组鼻黏膜组织中NF-κB、P-NF-κB、STAT3、P-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),且W组比F组变化显著(P<0.05),而B组与W组相比无明显差异(P>0.05),O组比B组降低明显(P<0.05)。结论防风多糖可有效改善过敏性鼻炎大鼠行为学及鼻黏膜病理形态,并可显著促进AQP5表达,其机制可能与抑制NF-κB/STAT3信号通路有关。

益气养阴祛瘀方对干燥综合征NOD小鼠颌下腺AQP5、M3R表达的影响

目的研究益气养阴祛瘀方(黄芪、生地黄、玄参、丹参、益母草等)对干燥综合征NOD小鼠颌下腺水通道蛋白5(AQP5)以及毒蕈碱样胆碱能受体3(M3R)表达的影响。方法将30只NOD小鼠随机分为5组:模型组、西药组(硫酸羟氯喹60 mg·kg^(-1))及益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组(11.147、22.295、44.590 g·kg^(-1)),每组6只。每日灌胃给药1次,连续给药8周。给药后第0、4、8周连续测量小鼠每日饮水量;给药结束后,分离小鼠双侧颌下腺并称定其质量,计算小鼠颌下腺指数;采用HE染色法进行颌下腺组织病理学观察,计算灶性指数评分;RT-qPCR法检测小鼠颌下腺组织AQP5、M3R mRNA表达水平;Western Blot法检测小鼠颌下腺组织AQP5、M3R蛋白表达水平;免疫组化法检测颌下腺组织AQP5蛋白表达水平;ELISA法检测血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)含量。结果给药前,与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的日饮水量无明显变化(P>0.05);给药第4、8周,与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的日饮水量均显著减少(P<0.01)。模型组小鼠颌下腺淋巴细胞浸润明显并形成较多浸润灶;与模型组比较,益气养阴祛瘀方低、中、高剂量组及西药组NOD小鼠的颌下腺淋巴细胞浸润情况得到明显改善,浸润灶数量明显减少,灶性指数评分显著降低(P<0.01),颌下腺组织AQP5、M3R蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),血清IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);益气养阴祛瘀方高剂量组和西药组NOD小鼠的颌下腺指数明显升高(P<0.05);益气养阴祛瘀方中、高剂量组和西药组NOD小鼠颌下腺组织AQP5、M3R mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01),血清IFN-γ含量显著降低(P<0.01)。结论益气养阴祛瘀方对NOD小鼠唾液腺损伤具有改善作用,可能通过上调AQP5、M3R表达,抑制颌下腺淋巴细胞浸润,改善唾液分泌功能,从而减缓干燥综合征进程。

慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内镜术后复发风险与核因子-κB信号通路及组织内AQP5水平的关系

目的 探讨慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者术后复发风险与核因子-κB(NF-κB)信号通路及组织内水通道蛋白5(AQP5)水平的关系。方法 回顾性分析2021年7月至2022年7月于青岛市第八人民医院收治的80例CRSwNP行鼻内镜术后患者的临床资料,入治疗结束后行6个月随访,依据患者术后是否复发分为未复发组(n=50)与复发组(n=30)。比较两组一般资料信息(性别、年龄、体重指数、病程、病变部位、吸烟史、饮酒史、哮喘史、前期鼻窦炎手术史和是否伴有胃食管反流、病灶清除不彻底、长期应用鼻减充血剂、术后坚持综合治疗情况)以及实验室指标(NF-κB、AQP5)表达水平的差异,通过受试者工作特征(ROC)明确NF-κB、AQP5表达水平对于预测CRSwNP患者术后复发的价值,通过多因素Logistic回归分析明确CRSwNP患者术后复发的危险因素。结果 复发组与非复发组性别构成比、年龄、体重指数、病程、病变部位、吸烟史、饮酒史、前期鼻窦炎手术史、胃食管反流比较,差异均无统计学意义(P>0.05),复发组哮喘史、病灶清除不彻底、长期应用鼻减充血剂、术后坚持综合治疗占比以及NF-κB、AQP5表达水平均显著高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析证实NF-κB、AQP5均可用于CRSwNP患者术后复发的预测,曲线下面积分别为0.952、0.787,预测价值较好(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析证实,哮喘史、病灶清除不彻底、长期应用鼻减充血剂、术后坚持综合治疗、NF-κB≥0.185、AQP5≥0.375是CRSwNP患者术后复发的危险因素(P<0.05)。结论 CRSwNP患者术后复发受到较多因素的影响,当NF-κB≥0.185、AQP5≥0.375时可用于此类患者复发风险的预测。

芳香化浊调气法对功能性腹泻大鼠AQP3、5-HT水平及血管活性肠肽表达的影响

目的 探究芳香化浊调气法对功能性腹泻大鼠水通道蛋白(AQP)3、5-羟色胺(HT)及血管活性肠肽的影响。方法 将大鼠随机分为正常组、模型组、药物1组、药物2组、药物3组和对照组,每组10只。检测各组一般状态;检测粪便性状指标(BSS评分、稀便率、腹泻指数);检测血清及组织中血管活性肠肽(VIP)含量;检测肠道组织中5-HT含量;免疫荧光检测结肠组织中AQP3表达。结果 造模后大鼠出现活动减少,精神萎靡,呈缩肩拱背样,体质量下降,毛色无泽,粪便湿软或不成形;药物干预后各组一般状态得到明显改善。与正常组相比,模型组BSS评分、稀便率和腹泻指数均显著增加(P<0.05);与模型组相比,药物1组、药物2组和药物3组均不同程度降低,且药物3组降低最为显著(P<0.05)。模型组血清及胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑组织中VIP含量较正常组显著降低(P<0.05);和模型组相比,药物1组、药物2组和药物3组均显著升高,且药物3组变化最显著(P<0.05)。与正常组相比,模型组回肠和结肠组织中5-HT含量均显著升高,结肠组织中AQP3水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,药物1组、药物2组和药物3组回肠和结肠组织中5-HT含量均显著降低,结肠组织中AQP3水平明显升高,且呈浓度依赖(P<0.05)。结论 芳香化浊调气法可增加功能性腹泻大鼠AQP3水平和血管活性肠肽水平,减少5-HT水平,对肠道水液吸收功能和运动功能进行改善,进而改善腹泻。

宣肺止咳合剂对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织病理变化、AQP5蛋白表达及血清细胞因子的影响

目的:探讨宣肺止咳合剂对脂多糖(LPS)致急性肺损伤大鼠肺组织病理变化及水通道蛋白5(AQP5)表达和血清细胞因子的影响。方法:60只Wistar大鼠,随机分为正常对照组、LPS模型组、宣肺止咳合剂(7.5、15、30 mg/kg)组、阳性对照(地塞米松0.135 mg/kg)组,每组10只,连续灌胃给药14 d,测定肺组织湿干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;Western blot检测肺组织AQP5蛋白表达;ELISA检测血清IL-1β、IL-8、INF-γ、TGF-β水平。结果:宣肺止咳合剂组大鼠肺水肿程度减轻;宣肺止咳合剂、阳性组组大鼠肺组织炎性细胞减少、纤维化减少、空泡样管腔明显、肺泡壁结构较模型组完整,损伤较模型组明显减轻;模型组肺组织AQP5表达较正常组显著降低(P<0.01),宣肺止咳合剂中、高剂量组和阳性对照组较模型组肺组织AQP5表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-8、TGF-β水平显著升高(P<0.01);宣肺止咳合剂中、高剂量组和阳性对照组血清IL-1β、TGF-β水平降低,且呈现浓度依赖性(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组INF-γ水平降低,宣肺止咳合剂低、中、高剂量组和阳性对照组较模型组均升高(P<0.05)。结论:宣肺止咳合剂对脂多糖所致大鼠急性肺损伤有一定的保护作用,其机制可能与上调AQP5蛋白表达,抑制IL-1β、IL-8炎症因子和纤维化因子TGF-β的释放,上调INF-γ水平有关。

ICU急性呼吸衰竭患者外周血HCAR、DcR3、AQP-5水平与机械通气撤机结局的关系及价值分析

目的 探究重症监护室(ICU)急性呼吸衰竭患者外周血超敏C反应蛋白与白蛋白比值(HCAR)、诱骗受体3(DcR3)、水通道蛋白-5(AQP-5)水平与机械通气撤机结局的关系及临床价值。方法 选取连云港市第二人民医院2018年8月—2021年8月ICU急性呼吸衰竭患者120例,均行机械通气治疗,在符合自主呼吸试验(SBT)指征且通过30 min SBT后撤机,根据撤机后48 h内是否再插管分为撤机成功组(87例)和撤机失败组(33例),撤机前采集外周血检测HCAR、DcR3、AQP-5水平,分析外周血HCAR、DcR3、AQP-5水平与撤机结局的关系及预测价值。结果 两组呼吸衰竭类型、合并器官功能障碍综合征(MODS)、肺部超声评分(LUS)、急性生理与慢性健康评价系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分差异有统计学意义(P<0.05);撤机失败组外周血HCAR、DcR3高于撤机成功组,AQP-5低于撤机成功组(P<0.05);Pearson相关性分析显示外周血HCAR、DcR3与LUS、APACHEⅡ评分呈正相关,AQP-5与LUS、APACHEⅡ评分呈负相关(P<0.05);单因素、多因素分析均显示,外周血HCAR、DcR3、AQP-5影响撤机结局(P<0.05);外周血HCAR、DcR3、AQP-5预测撤机失败的截断值分别为4.10 mg/g、14.55μg/L、7.91μg/L,联合预测撤机失败的曲线下面积(AUC)为0.915(95%CI:0.850~0.958),大于各指标单独预测;以截断值为界分为低水平与高水平,外周血HCAR、DcR3高水平患者30 d生存率低于低水平患者,外周血AQP-5高水平患者30 d生存率高于低水平患者(P<0.05)。结论 ICU急性呼吸衰竭患者外周血HCAR、DcR3、AQP-5水平与撤机结局密切相关,联合检测可作为预测撤机失败的重要辅助手段,还能帮助临床判断死亡风险,为临床提供可靠的数据支持。

AQP5在结直肠癌中的表达及其与临床预后的关系

目的探讨水通道蛋白5(AQP5)的表达与结直肠癌临床病理及预后关系。方法收集术前未予任何治疗的临床病例资料齐全的原发性结直肠癌病例45例,采用免疫组化法检测AQP5的表达。比较AQP5表达与年龄、肿瘤大小、临床分期、肿瘤部位、淋巴结、病理类型之间的关系,并结合随访资料分析AQP5表达与否和预后的关系。结果45个肿瘤标本中,14例(31.1%)高表达AQP5,29例(64.4%)中度表达,2例(4.4%)无AQP5染色。癌旁和正常组织中AQP5表达率分别为3例(6.67%)和3例(6.67%)。AQP5的表达还与TNM分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.016)、远处转移(P=0.000)呈正相关。在年龄、性别、组织学分级和肿瘤大小中其表达没有统计学差异(P>0.05)。结论 AQP5可能被用作预测结直肠癌预后的良好指标。

急性肺损伤大鼠呼吸膜AQP1和AQP5的表达

目的确定水通道蛋白AQP1及AQP5是否在大鼠肺泡毛细血管膜(呼吸膜)表达,进而研究急性肺损伤(ALI)大鼠AQP1和AQP5的表达调节及激素干预的作用。方法采用亲和的抗人AQP1和AQP5抗体,应用免疫组化及免疫电镜的方法研究AQP1及AQP5在呼吸膜的分布。选用肺泡内灌注脂多糖(LPS)制作大鼠ALI动物模型,研究ALI时呼吸膜AQP1及AQP5的变化。结果免疫染色显示AQP1主要表达于正常肺组织的微血管内皮,而AQP5主要表达于肺泡I型上皮细胞。免疫组化分析进一步表明LPS灌注后4h^48h AQP1及AQP5在呼吸膜的表达均下降;AQP1蛋白于LPS灌注后24h及激素干预后有部分恢复(P<0.05),而AQP5无这种恢复现象。结论 ALI时AQP1及AQP5在呼吸膜的表达减少,提示ALI时AQP1和AQP5的下降表达可能与其液体转运的异常有关。

解毒药、通络药及生津药配伍对干燥综合征大鼠AQP5表达的对比分析

目的探讨解毒药、通络药及生津药配伍对干燥综合征大鼠AQP5的影响。方法将70只雌性SD大鼠随机分为7组,即解毒通络生津组(A)、解毒组(B)、通络组(C)、生津组(D)、强的松组(E)、生理盐水组(F)及正常对照组(G)。除正常对照组外,每只大鼠均经过造模,建立SS模型,正常对照组注射相同剂量生理盐水。各组分别给予解毒通络生津中药、清热解毒中药、活血通络中药、养阴生津中药、强的松、生理盐水治疗28 d,正常对照组不做处理。观察大鼠饮水量的变化,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对颌下腺的AQP5进行半定量分析。结果解毒通络生津组大鼠饮水量明显减少,与其他各中药组及强的松组比较差异有统计学意义(P<0.05),通过RT-PCR半定量分析显示,解毒通络生津组AQP5的表达优于其他各组(P<0.05);生津组及强的松组AQP5的表达优于解毒组和通络组(P<0.05)。结论生津药、解毒药及通络药配伍可改善大鼠口干症状,其机制可能与上调大鼠颌下腺AQP5的表达有关。

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织AQP1和AQP5表达的影响

目的通过研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）和水通道蛋白5（AQP5）表达的影响,旨在从水液代谢及气道黏液分泌的角度探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制。方法 SD大鼠90只随机分为正常组（N）、模型组（M）、阳和平喘颗粒低、中、高剂量治疗组（YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H）和地塞米松治疗组（DXM）,每组15只。其中,M、YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM组采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏及雾化吸入的方法建立哮喘大鼠模型,同时应用氢化可的松腹腔注射复制肾阳虚模型,N组则均使用生理盐水作为对照。采取HE染色检测各组大鼠肺组织形态学改变,应用Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠肺组织AQP1和AQP5mRNA及蛋白表达水平的变化,采用免疫组化法检测AQP1和AQP5在肺组织的分布及表达水平变化。结果与N组相比,M组AQP1和AQP5在mRNA及蛋白表达水平均发生显著下降（P〈0.01）;与M组相比,YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H组AQP1和AQP5的表达水平均显著上升（P〈0.05～0.01）,且具有一定的剂量依赖效应;与DXM相比,YHPC-L对AQP1和AQP5的作用效果低于DXM（P〈0.05）,而YHPC-M和YHPC-H则与之具有相当的作用效果（P〉0.05）。结论阳和平喘颗粒可通过上调AQP1和AQP5的表达而调控水液代谢平衡及气道黏液分泌,进而发挥其治疗支气管哮喘的作用。

基于NF-κB信号通路探讨小青龙汤合玉屏风散对变应性鼻炎大鼠AQP5和AQP5mRNA表达影响

目的:基于NF-κB信号通路观察小青龙汤合玉屏风散对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜AQP5含量和AQP5 m RNA表达的影响,揭示小青龙汤合玉屏风散治疗AR的作用机制。方法:将清洁级健康雄性Wistar大鼠48只按体重采用随机区组法分为6组,即分成正常组、AR模型组、Forskolin(c AMP激活剂)干预组、H89(PKA抑制剂)干预组、PDTC(NF-κB抑制剂)干预组、小青龙汤合玉屏风散组,每组8只。采用卵蛋白全身致敏与局部攻击方法制作AR大鼠模型,观察小青龙汤合玉屏风散组治疗后鼻黏膜AQP5含量和AQP5 m RNA表达,结果进行统计学分析。结果:模型组AQP5含量和AQP5 m RNA表达下调,c AMP激活剂Forskolin干预组、NF-κB抑制剂PDTC干预组、小青龙汤合玉屏风散治疗组均能使AQP5含量和AQP5 m RNA表达上调,而PKA抑制剂H89能下调AQP5含量和AQP5 m RNA表达。结论:小青龙汤合玉屏风散治疗变应性鼻炎作用机制可能与抑制NF-κB信号通路和兴奋c AMP-PKA信号通路使AQP5含量和AQP5 m RNA表达上调有关。

不同强度跑台训练对BALB/c小鼠气道muc5ac和aqp5表达的影响

目的:研究不同强度跑台训练对BALB/c小鼠气道muc5ac和aqp5表达的影响,探讨运动性支气管痉挛(EIB)发生的潜在机理。方法:清洁级雌性BALB/c小鼠48只,随机分为4组:对照组(C组)、小强度运动组(L组)、中等强度运动组(M组)和大强度运动组(H组)。L组、M组和H组小鼠分别给予不同强度的跑台训练:速度分别为4 m/min(58%VO2 max)、12 m/min(76%VO2 max)、17 m/min(84%VO2 max),坡度均为0°,每周运动6天,持续2周,每次训练前均做10min热身运动(速度1m/min,跑台坡度0°)。用实时定量荧光PCR法检测气道内muc5ac mRNA和aqp5 mRNA的表达,分别用免疫组化法和免疫印迹法检测muc5ac蛋白和aqp5蛋白在小鼠气道的表达,对气道muc5ac蛋白含量与aqp5蛋白含量进行Spearman等级相关分析。结果:运动各组小鼠气道内muc5ac mRNA及其蛋白表达均明显高于C组(P﹤0.05),而aqp5 mRNA及其蛋白表达均显著低于C组(P﹤0.05);并且气道muc5ac蛋白含量与aqp5蛋白含量呈负相关(r=-0.826,P﹤0.001)。结论:运动可能通过改变气道内muc5ac和aqp5的表达而使气道反应性升高,从而潜在地增加了EIB的发病风险。

乌梅含漱液对尿毒症口干症模型大鼠颌下腺AQP5分布表达变化的研究

目的通过研究"酸甘化阴"治法载体的乌梅含漱液对尿毒症口干模型大鼠颌下腺AQP5分布表达的作用,探究酸甘化阴法治疗尿毒症大鼠口干症的机制。方法研究通过使用5/6肾切除大鼠模型给予M受体阻滞剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine,4-DAMP),制作尿毒症口干症模型大鼠。造模成功后,予酸甘化阴的乌梅含漱液灌胃,根据临床常用剂量及SD大鼠体表面积换算,将造模后的实验动物随机分为乌梅含漱液低剂量组、乌梅含漱液高剂量组及模型对照组,并另外设立正常组。给药后干预4周,期间每3天动态测定各组大鼠的5 min唾液分泌量及干预前后的体重,观察乌梅含漱液干预对唾液分泌的作用及对大鼠体重的影响作用;并分离大鼠的颌下腺组织,检测颌下腺组织形态及AQP5分布表达,并通过Western blot分析乌梅含漱液对颌下腺细胞水分子通道蛋白5(AQP5)表达的影响。结果与正常组相比,模型对照组颌下腺组织的纹状体结构紊乱,导管炎症及水肿,实验前后平均唾液分泌量明显减少(P<0.05),AQP5主要表达在基底膜和顶膜中,较正常组染色较弱,体重增加;相比于模型对照组,乌梅含漱液组纹状体结构紊乱及导管炎症减轻,干预前后的平均唾液分泌量增多(P<0.05),并且一定程度上AQP5表达分布染色较模型组增强,体重增加较模型组少。结论乌梅含漱液能增加唾液流量,减少大鼠体重增加,减轻唾液腺的病理损害,增加唾液腺细胞膜AQP5的表达,促进唾液分泌,改善尿毒症大鼠引起的口干症状。

增液汤对干燥综合征模型鼠颌下腺AQP5的影响

目的:探讨增液汤对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺中水通道蛋白5(AQP5)表达的影响。方法:用免疫组化法分析SS小鼠颌下腺AQP5表达特点。结果:空白组AQP5在腺泡的顶膜、侧膜等处均有较强表达;模型组AQP5表达减少或消失。增液汤组大部分细胞膜有AQP5蛋白散在表达,较模型组表达明显增多(P<0.01),且分布均匀。结论:增液汤可明显增强SS模型鼠颌下腺中水通道蛋白AQP5表达。

高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达及意义

目的观察高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达的变化。方法雄性S D大鼠20只,随机分为2组,对照组(C组)给予全价颗粒饲料喂养;高脂饮食组(H组)给予高脂饮食(饲料成分为胆固醇2%、猪油10%、基础饲料88%)连续喂养2个月,各组动物均不限制饮水。2个月成模后,取血检测血脂;取大鼠下颌下腺组织,进行免疫组织化学染色(SP法)和计算机图像分析。结果①血脂检测结果:C组TG与H组TG比较有显著性差异(P<0.05);C组TC和H组TC比较有显著性差异(P<0.05)。②免疫组化结果:C组大鼠下颌下腺AQP1平均光密度值与H组AQP1平均光密度值比较有差异性(P<0.05);C组大鼠下颌下腺AQP5平均光密度值与H组AQP5平均光密度值比较有差异性(P<0.05)。结论高脂血症大鼠下颌下腺导管上皮细胞内AQP1和AQP5的表达减少,为探讨高脂血症导致下颌下腺分泌功能降低的病理机制提供了形态学依据。

活血解毒方对干燥综合征小鼠颌下腺AQP5表达的影响

目的:探讨活血解毒方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺AQP5表达的影响。方法:以BABL/C小鼠为正常组,选取NOD小鼠为SS模型并随机分为模型组、活血解毒方组(HXJD)和白芍总苷胶囊组(TGPC),给药后观察各组小鼠颌下腺形态学和分泌功能的改变,并采用SABC法检测各组小鼠颌下腺AQP5表达水平的变化。结果:药物干预8周后,模型组较正常组表达AQP5明显降低;与模型组比较,TGPC组和HXJD组AQP5表达均显著升高;TGPC组和HXJD组之间AQP5表达无明显差异。结论:活血解毒方可改善SS模型鼠颌下腺腺泡的分泌功能,提高其颌下腺指数,增加SS模型鼠的唾液分泌量;其作用机理与上调AQP5的表达水平有关。

益气养阴祛瘀方对干燥综合征颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响

目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(SS)患者颌下腺细胞AQP5及M3R表达的影响。方法制备不同剂量SD大鼠益气养阴祛瘀方含药血清,再分别给予以下处理:空白组(仅含RPMI1640培养液),空白血清组(10%空白血清+RPMI1640培养液),分别予含5%、10%、15%、20%不同浓度的含药血清+RPMI1640培养液组,共6组。培养细胞24 h后,分别以倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜观察细胞,Western blot检测细胞中AQP5及M3R蛋白表达水平。结果益气养阴祛瘀方含药血清作用后,激光共聚焦显微镜观察抗体标记细胞的荧光强度明显增强。Western blot检测AQP5与M3R的蛋白表达均有上调。含药血清组中的AQP5及M3R蛋白的表达明显高于空白血清组,且10%、15%含药血清组高于5%含药血清组(P<0.05),但与20%相差不大(P>0.05)。结论益气养阴祛瘀方可以上调颌下腺细胞中AQP5及M3R蛋白的表达,而且与之成一定的剂量依赖关系。