Expression and Emmprin Regulated Function of Aquaporinl in SMMC7221 Cells

Herein lie the crosstalk and regulation between AQP1 and Emmprin in SMMC7221 cells by means of siRNA technology and deglycosylation method. Firstly, HAQP1, rather than hAQP3, was selectively upregulated in SMMC7221 cells by FBS, flollowed by the upregulated expression of Emmprin. Emmprin gene silencing caused a remarkable change in the expression ofAQP1 gene, just like its downstream gene, MMP9, meanwhile the water permeability and cell migration were also descended prominently. Furthermore, when treated with tunicamycin, Emmprin was deglycosylated, which made the expression of AQP 1 significantly declined, followed by remarkably decreased cell membrane water permeability and cell migration. Taken together, all the data indicates the expression level and the modification of Emmprin by glycosylation are the key factors in regulating the expression of AQP1.

金水葶苓汤对肺癌移植瘤恶性胸腔积液模型小鼠的治疗作用及机制研究

目的:通过复制Lewis肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型,考察金水葶苓汤对模型小鼠胸腔积液的抑制作用。方法:通过胸腔注射Lewis细胞复制C57小鼠胸腔积液肺癌模型,观察金水葶苓汤及金水葶苓汤协同顺铂注射液对模型小鼠胸腔积液体积、胸壁转移瘤数量和转移瘤质量、生存时间的影响;采用Western blotting法检测壁层胸膜AQP1和胸腔积液中VEGF蛋白表达的水平,评价金水葶苓汤对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠的治疗作用和机制。结果:与模型组比较,各给药组小鼠体质量增长明显升高,胸腔积液体积、胸壁转移瘤数量、转移瘤质量明显降低,小鼠胸腔积液中VEGF及胸膜中AQP1蛋白表达明显低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且金水葶苓汤+顺铂组比单用金水葶苓汤或顺铂注射液效果更好,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:金水葶苓汤可以抑制恶性胸腔积液模型小鼠胸腔积液生成,改善小鼠体质量,延长小鼠生存时间,降低胸壁肿瘤转移数量和抑制肿瘤生长,降低胸腔积液中VEGF及胸膜中AQP1蛋白表达水平,且金水葶苓汤协同顺铂注射液优于金水葶苓汤或顺铂注射液单用效果。

水通道蛋白1在人胎盘和胎膜中的表达

目的研究正常妊娠晚期人胎盘和胎膜组织中水通道蛋白1(AQP1)的表达及分布模式。方法收集5例正常足月妊娠剖宫分娩的人胎盘和胎膜组织样本,运用RT-PCR法、western印迹和免疫组织化学方法检测AQP1在胎盘和胎膜组织中的表达。结果RT-PCR显示AQP1mRNA在胎盘和胎膜组织均有表达;AQP1Western印迹检测胎盘和胎膜组织在28KD左右有一特异性条带;免疫组织化学结果显示AQP1强表达于胎盘的血管内皮细胞和合体滋养细胞、羊膜上皮细胞、平滑绒毛膜细胞滋养细胞。结论AQP1在人胎盘和胎膜的表达提示其在母胎液体交换及羊水平衡中可能发挥着重要的作用。

水通道蛋白-1在鼻息肉中的表达及其调节机制

目的:研究水通道蛋白-1(aquaporin1,AQP1)在鼻息肉组织中的表达,探讨其与鼻息肉水肿形成及发展的关系。方法:取鼻中隔偏曲矫正术患者下鼻甲黏膜30例和鼻息肉组织60例。鼻息肉组Ⅱ型1期10例,2期15例,3期25例,Ⅲ型10例。采用免疫组织化学检测AQP1在不同类型及不同临床分期鼻息肉和下鼻甲黏膜组织中的表达及在不同类型鼻息肉组织中的表达。结果:(1)鼻息肉上皮层AQP1阳性细胞数显著高于下鼻甲黏膜(P<0 01);不同分型分期鼻息肉上皮层AQP1的阳性细胞数又有差异,Ⅱ型3期和Ⅲ型鼻息肉显著低于Ⅱ型1期鼻息肉(P<0 01);而在鼻息肉血管内皮及腺体细胞中的AQP1的表达明显高于下鼻甲(P<0 01);(2)Ⅱ型3期和Ⅲ型鼻息肉血管内皮中AQP1阳性细胞数显著高于Ⅱ型1期鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮下组织(P<0 01)。结论:AQP1在鼻息肉组织中的异常表达可能与鼻息肉的发生和发展密切相关,具体机制有待进一步研究。

人AQP1-shRNA表达质粒载体的构建与筛选

目的构建针对人水通道蛋白1(AQP1)基因的shRNA表达质粒载体,并验证其干扰效果,为进一步探讨AQP1基因对人乳腺癌细胞的作用及机制建立基础。方法设计合成4对针对人AQP1基因不同位点的shRNA片段,通过DNA重组技术将其插入载体GV115中,构建AQP1-shRNA重组质粒,转染人乳腺癌MCF-7细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果 RT-PCR法证实AQP1在乳腺癌MCF-7细胞中有表达。测序验证表明4对靶向AQP1-shRNA表达载体均构建成功。4组干扰载体能够从基因和蛋白表达水平不同程度抑制AQP1表达,其中以AQP1-shRNA 4对AQP1的干扰效率最强。结论成功有效地构建了针对人AQP1基因的shRNA重组质粒,能够有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7中AQP1的表达。

骨髓间充质干细胞不同途径输注对阿霉素肾病大鼠AQP1、AQP2表达的影响

目的评估骨髓间充质干细胞(MSC)分别通过肾动脉和尾静脉移植方式对大鼠慢性肾病(CKD)模型肾损伤修复的疗效,比较不同移植方式对CKD大鼠水通道蛋白(AQP)1、AQP2表达差异的影响。方法实验取50只大鼠,2只制备骨髓MSC;36只经尾静脉输注阿霉素构建CKD模型,随机分为阿霉素CKD(A-C)组(n=12)、骨髓MSC经肾动脉输注(M-A)组(n=12)、骨髓MSC经尾静脉输注(M-V)组(n=12);另12只为正常对照(N)组。末次骨髓MSC移植隔1周后检测大鼠24 h尿量、24 h尿蛋白定量、血清钠及血清白蛋白,免疫组化检测肾组织AQP1、AQP2表达。结果与A-C组相比,M-V组、M-A组大鼠血清白蛋白及24 h尿量均增高(P<0.05),24 h尿蛋白及血清钠水平均降低(P<0.05),M-A组24 h尿蛋白较M-V组降低更明显(P<0.05)。M-V组、M-A组大鼠肾脏AQP1、AQP2表达均较A-C组降低(P<0.05),M-V组、M-A组间差异无统计学意义(P<0.05)。结论骨髓MSC移植可增加血清白蛋白,降低尿蛋白、血清钠和肾实质细胞内AQP1、AQP2表达,对修复阿霉素CKD大鼠肾损伤有作用。在一定时间内肾动脉途径移植效果优于外周静脉途径,但两种移植途径的效果差异与AQP1、AQP2表达无明显关联。

真武汤对肾阳虚型慢性肾功衰竭模型大鼠肾组织AQP1表达的影响

[目的]观察CRF大鼠肾组织AQP1表达变化，研究真武汤对肾阳虚型CRF大鼠肾组织AQP1表达的影响。[方法]健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组和真武汤组，采用腺嘌呤灌胃法建立肾阳虚慢性肾衰大鼠模型。成模后模型组及真武汤组大鼠每日上午继续灌服腺嘌呤，下午分别灌服生理盐水和真武汤连续21天后，采用免疫组化方法检测肾组织AQP1表达。[结果]与对照组比较，模型组大鼠肾组织AQPI表达水平降低（P〈0．05）；与模型组比较真武汤组大鼠肾组织AQP1表达明显升高（P〈0．05）。[结论]CRF大鼠肾组织AQP1表达降低，真武汤能够提高慢性肾衰大鼠肾组织AQP1的表达水平。

透痹转气法对类风湿关节炎关节滑膜AQP1表达的影响

目的:观察透痹转气法(TBZQ)对类风湿关节炎(RA)疗效及对水通道蛋白1(AQP1)的影响。方法:研究对象25例,RA组10例为活动期RA有膝关节肿痛者,OA组15例为膝关节骨性关节炎患者。RA组应用透痹转气法治疗1疗程(3月),治疗2疗程后观察临床疗效及CRP、RF等指标变化。检测RA组治疗前、后及OA组治疗前关节滑膜AQP1基因表达。结果:RA组临床症状明显改善,炎症指标明显降低(P<0.05);AQP1在膝关节滑膜细胞有表达,治疗前RA组较OA组表达增强,治疗后RA组增强的表达下调(P<0.05)。结论:透痹转气法明显改善RA患者的症状,降低炎症指标;AQP1高表达可能是RA关节肿痛机制之一。

水通道蛋白1在人羊膜上皮细胞的表达及意义

目的:探讨水通道蛋白1(Aquaporin1,AQP1)在人羊膜中的表达、定位及意义。方法:应用免疫组织化学方法检测12例正常足月妊娠产妇、11例羊水过少及9例羊水过多者足月妊娠产妇的羊膜组织中AQP1蛋白的表达。结果:AQP1在羊膜组织立方上皮细胞中有阳性表达,且主要位于细胞浆中,而在成纤维细胞中仅有微弱表达。羊水过少及过多患者与正常产妇的羊膜组织AQP1蛋白面积积分光密度值比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:人羊膜组织表达AQP1蛋白,其在羊水的液体转运中可能起着重要作用,为羊水的水转运机制研究提供了分子生物学基础,并且为羊水量异常的治疗提供了新的思路。

水通道蛋白1在大鼠角膜碱烧伤新生血管形成中的表达

目的检测大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成过程中水通道蛋白1(AQP1)的表达变化,探讨其在角膜新生血管(CNV)形成中的作用。方法碱烧伤诱导CNV模型,将25只SD大鼠按处死的时间点不同分成5组,每组5只。每日裂隙灯下观察CNV的生长情况,并采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测AQP1及VEGF在大鼠CNV形成中的表达。结果在正常大鼠角膜组织中,AQP1和VEGF不表达或弱表达。碱烧伤后1 d,AQP1表达开始增强,第7天表达最强,14 d下降,21 d时仍有弱表达。RT-PCR检测显示碱烧伤后AQP1表达增强,在伤后第7天表达最明显,21 d后呈弱表达(t1 d=3.491,t4 d=10.690,t7 d=12.936,t14 d=10.767,t21 d=8.594,P<0.05)。免疫组织化学检测结果表明,VEGF与AQP1的表达分布相似,强度较弱,统计学分析表明二者的表达水平呈正相关(r=0.834,P<0.05)。结论AQP1在碱烧伤后角膜中的表达水平与新生血管的形成明显相关。

水通道蛋白-1与大鼠急性一氧化碳中毒性脑病的关系

目的观察急性一氧化碳(CO)中毒后大鼠脑组织水通道蛋白1(AQP1)的表达,探讨AQP1与急性CO中毒性脑病发生的相关性及其作用机制。方法将112只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组(BC组,n=8)、急性CO中毒组(CO组,n=8)。腹腔注射CO或空气制备大鼠模型。分别于大鼠造模后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d取大鼠脑组织额叶皮质,利用免疫印迹法检测AQP1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达变化。免疫组化染色检测大鼠额叶皮质AQP1蛋白的表达。结果 Western blotting法显示,在6 h、12 h、24 h时,大鼠脑皮质CO组的AQP1表达量与BC组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05),大鼠在CO中毒后24 h脑皮质AQP1的表达量最多。CO组大鼠脑皮质在6 h、12 h、24 h时的GFAP表达量与BC组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05),在24 h CO组大鼠GFAP的表达达到峰值。CO组在造模后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d各个观察时间点的p38 MAPK表达量与BC组比较均无明显差异(均P> 0. 05)。CO组在6 h、12 h、24 h各时间点的p-p38 MAPK表达量与BC组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05),其在24 h时间点的p-p38 MAPK的表达量最多,达峰值。CO组大鼠在造模后6 h、12 h、24 h各个观察时间点的皮质区AQP1光密度值均高于BC组(均P <0. 05)。结论大鼠急性CO中毒后脑皮质AQP1蛋白表达的上调,可能参与了CO中毒后脑水肿的病理生理过程。CO中毒后,大鼠脑皮质AQP1表达的变化伴随GFAP、p-p38 MAPK的改变,其机制可能是通过激活p-p38MAPK信号传导通路,上调AQP1、GFAP的表达,引起脑组织水肿。AQP1可能成为急性CO中毒脑损伤机制研究的新靶点。

严重急性呼吸综合征肺水通道蛋白1表达的研究

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)参与严重急性呼吸综合征(SARS)肺水肿、急性肺损伤(ALI)的可能机制。方法2003年5月至6月运用免疫组织化学法对7例SARS死亡病例肺标本,6例具有ALI表现的非SARS死亡病例肺标本及4例无明显病变的肺组织标本进行检测。用图像分析比较三者表达量的不同,并结合临床资料探讨影响AQP1表达变化的因素。结果AQP1在正常人肺组织微血管内皮、肺泡上皮的胞膜上和胞浆中均有表达。AQP1在SARS肺和非SARS所致ALI肺中的表达均较正常肺组织明显下降(P<0.05);而SARS肺中AQP1的表达和非SARS所致ALI肺中AQP1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论AQP1的表达下调可能参与了各种因素造成的ALI时肺水肿形成。与非SARS所致ALI相比,AQP1在SARS肺的表达改变无特异性。本研究为进一步探讨SARS肺水肿的形成机制及AQP1在生理和病理状态下的功能提供实验依据,也为临床治疗肺水肿提供了新的思路。

半滑舌鳎两种Aquaporin1同源基因的克隆与表达分析

克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AQP1o和AQP1基因的全长cDNA序列,并对其序列和表达模式进行了分析.结果表明,AQP1ocDNA全长为993 bp,包括120 bp的5′非翻译区,789 bp的开放阅读框,84bp的3′非翻译区,编码262个氨基酸的蛋白质,分子质量为28.3×103.AQP1的cDNA全长为1 335 bp,包括63bp的5′非翻译区,786 bp的开发阅读框,486 bp的3′非翻译区,编码261个氨基酸的蛋白质,分子质量为27.4×103.聚类分析表明半滑舌鳎AQP1o蛋白与金头鲷和塞内加尔鳎等海洋鱼类在卵巢中特异表达的AQP1o聚为一类,而AQP1与非卵巢特异表达的AQP1聚为一类,表明该两类基因为不同类型的AQP1同源基因.RT-PCR分析表明两个基因具有不同的表达模式,AQP1o主要在卵巢中表达,提示其在卵巢中具有特定的生理功能、而AQP1则在雌雄鱼的多种组织中表达.

大鼠弥散性血管内凝血时水通道蛋白1基因表达与肾脏损伤的关系

目的研究对Wistar大鼠滴注脂多糖（LPS）造成弥散性血管内凝血（DIC）后，肾脏细胞表面水通道蛋白1（AQP1）mRNA表达变化与其损伤的关系。方法清洁级，雄性Wistar大鼠50只随机分为5组（每组10只）：对照组（经鼠尾静脉持续4h滴注10mL生理盐水后直接取血及组织）；DIC组：滴注LPS（30mg／kg，溶于10mL生理盐水持续4h鼠尾静脉滴注）后4h，6h，8h，10h组，在滴注LPS后4h，6h，8h及10h取血及组织。检测各组血小板（PLT）计数、凝血酶原时间（Pr）、活化部分凝血活酶时间（AFIT）、纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D-D）；各组。肾、肺组织苏木苏-伊红（HE）染色，观察肾、肺组织中微血栓形成情况及病理变化（结合血液学指标与病理变化判断DIC病程），提取各组大鼠肾组织总RNA，RT-PCR检测AQP1 mRNA水平的表达。采用SNK-q方法对结果进行统计学分析。结果各实验组PLT计数、PT、APT、FIB及D—D与对照组相比，差异具有统计学意义（P〈0．01）；滴注LPS后4h的AQP1 mRNA表达较对照组下调（P〈0．01），6h达最低；滴注LPS后6h肾小管细胞浊肿，8h肾小管细胞变性坏死。结论肾脏AQP1 mRNA表达下调先于肾小管细胞的损伤，表明AQP1参与了大鼠DIC时肾小管细胞的损伤。