响应面法优化两面针中三种生物碱的回流提取工艺

以两面针为试材,采用响应面法,研究了回流提取时间、提取溶剂浓度和料液比对氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱提取得率的影响,以期获得两面针中3种生物碱的最佳回流提取工艺,为深入开发利用两面针中的生物碱提供参考依据。结果表明:3种生物碱的最优回流提取条件为提取时间2.4 h·次^(-1)(重复提取2次)、提取溶剂67%乙醇、料液比1∶20 g·mL^(-1),此时氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱的得率分别为0.381%、0.560%、0.058%。该结果与响应面法预测值接近,说明该研究拟合的3种生物碱响应面回归模型可靠。优化后氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱的得率分别提高了14%、95%、23%,优化工艺提取效率高,可用于两面针中3种生物碱的制备。

两面针粗生物碱的富集

目的探索两面针对体外人红系白血病细胞(HEL细胞)增殖活性有抑制作用的粗生物碱富集方法,为两面针药材抗肿瘤活性研究提供参考。方法以不同浓度(60%、70%、80%、90%、100%)乙醇对两面针药材的干燥根进行提取,以最高提取率确定最佳提取条件;通过静态、动态吸附实验考察不同类型(HPD 100、XDA-5、D101、HPD 722、HPD 400)大孔树脂对两面针药材的吸附量确定上样量,富集两面针粗生物碱;采用噻唑蓝(MTT)法研究各组粗生物碱对HEL细胞增殖活性的影响。结果两面针药材经5种浓度乙醇提取,其中60%乙醇提取浸膏的得率最高[(11.937±0.002)%];静态、动态吸附实验表明,5种大孔树脂对两面针药材吸附量为1:500(两面针浸膏:大孔树脂);不同型号大孔树脂富集得到的粗生物碱对HEL细胞的增殖活性影响不同,两面针粗生物碱样品浓度为80μg·mL-1时,抑制率分别为(59.62±3.46)%(XDA-5)、(55.81±5.16)%(HPD 100)、(59.33±1.33)%(D101)、(79.63±1.02)%(HPD 722)、(83.97±0.38)%(HPD 400),HPD 400型大孔树脂富集的两面针粗生物碱抑制HEL细胞增殖作用最显著(P<0.01)。结论大孔树脂富集两面针粗生物碱工艺简单、可行,HPD 400型大孔树脂富集的两面针粗生物碱对HEL细胞抑制作用显著。

两面针提取物(S0)对小鼠镇痛、抗炎和止血作用的研究(英文)

本研究对两面针根的提取物S0进行了镇痛、止血和抗炎药理实验,每种作用选用两种实验方法来评价。镇痛作用采用热板法和扭体法。热板法实验显示,S0在150mg/kg剂量时,小鼠痛阈值明显提高(P<0.01);扭体法实验显示,S0在150mg/kg剂量为时,对冰醋酸致痛的小鼠扭体反应次数减少了70.96%(P<0.01)。抗炎实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法及腹腔染料渗出法。二甲苯致炎剂实验表明,S0在150mg/kg剂量时,对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用,抑制率为63.45%(P<0.01);冰醋酸所致的腹腔毛细血管通透性实验中,S0在150mg/kg和75mg/kg两个剂量组时,对小鼠的抗炎效果分别为52.94%(P<0.01)和52.00%(P<0.01)。止血实验采用毛细玻璃管法和载玻片法。毛细玻璃管实验表明S0在150mg/kg和75mg/kg两个剂量时,凝血时间明显缩短(P<0.01);载玻片实验表明S0在150mg/kg剂量时,凝血时间明显缩短(P<0.01)。总之,两面针中提取物S0对小鼠具有显著的镇痛、止血和抗炎作用。

正交实验法优选两面针的提取工艺研究

目的优选两面针的提取工艺。方法采用正交设计实验法,以氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、L-芝麻素的含量为指标,多指标综合评分法进行数据分析,优选提取条件。结果两面针的最佳提取工艺为加入80%的乙醇提取3次,每次14倍量乙醇,每次提取1 h。结论优选出的最佳工艺条件合理、稳定,指标性成分含量高,可以用于生产。

加酸内部沸腾法提取氯化两面针碱及其纯化研究

为降低两面针生物碱提取过程酸对设备的腐蚀及提高纯化过程的回收率,采用了加酸内部沸腾法强化提取氯化两面针碱,提取液直接用阳离子交换树脂吸附及超声波辅助强化洗脱在树脂表面结晶出来的两面针生物碱晶体。实验结果表明:两面针粉末先用4倍物料量的乙醇盐酸解吸剂解吸,解吸剂中盐酸和乙醇的质量浓度分别为0.61%和80%,然后用16倍物料量的20%质量浓度的乙醇在82℃下提取4 min,在此条件下氯化两面针碱提取得率为0.134%;用732阳离子交换树脂直接在40℃下静态吸附133倍树脂用量的内部沸腾法提取液,用盐酸浓度为3 mol·L-1、乙醇质量浓度为70%的酸乙醇洗脱液在超声波的辅助下间歇解吸附,解吸率达到99%以上,分离得到的氯化两面针碱纯度为94.5%,回收率为77.7%。与传统酸醇回流提取对比,加酸内部沸腾法提取快37.5倍、乙醇和盐酸消耗量减少一倍,对设备腐蚀大为减轻,提取液可以用阳离子交换树脂直接富集分离,氯化两面针碱回收率提高24.2%。

两面针生物碱不同提取方法的比较

复合酶预处理两面针药材后,以氯化两面针碱、总生物碱得率和干膏收率为指标,采用正交试验和动态过程优化半仿生-超声法、渗漉法和回流法提取工艺,对其提取效果进行比较。各以4倍量枸橼酸-三乙胺60%乙醇缓冲液(p H 2.0、7.5和8.3)为溶剂,依次超声(250 W)提取15、12和9 min,氯化两面针碱得率2.52‰,总生物碱得率2.15%,干膏收率16.14%。以60%乙醇(5 g/L盐酸)为溶剂,浸润10 min后以10mL/min流速渗漉16倍量溶剂,氯化两面针碱得率2.30‰,总生物碱得率2.18%,干膏收率14.86%。分别用6、5和4倍量60%乙醇(5 g/L盐酸)依次回流15、12和9 min,氯化两面针碱得率2.46‰,总生物碱得率2.36%,干膏收率15.37%。半仿生-超声法和渗漉法比回流法经济,可为工业生产提供参考依据。

从两面针中提取总生物碱的工艺研究

目的研究两面针总生物碱的提取工艺。方法以总生物碱提取率为指标,正交设计优选两面针总生物碱的提取工艺。结果用体积分数60%乙醇-5g.L-1盐酸回流提取两面针药材粗粉3次,溶剂量分别为6,5和4倍,回流时间分别为1,0.5和0.5h,总生物碱提取率为94.7%。结论该工艺简便高效,为工业生产奠定了基础。

加酸减压内部沸腾法提取氯化两面针碱及其指纹图谱评价

为降低酸醇提取过程酸对设备的腐蚀及提高生物碱提取效果,提出了加酸减压内部沸腾提取两面针生物碱的方法,并以指纹图谱的方法对其与其他七种提取方法进行评价。结果表明,在酸乙醇解吸剂和乙醇提取剂质量浓度及用量分别为80%(其中盐酸浓度为0.61%)、40%及3、16mL·g-1,提取温度为50℃,系统压力为0.020MPa,提取时间为3min时,得到氯化两面针碱的提取得率及纯度分别为0.132%和0.657%。分析指纹图谱,发现加酸减压内部沸腾法出峰数量及时间和其他提取方法相同,氯化两面针碱的峰面积与总出峰面积之比较大,提取效果显著,并且加酸减压内部沸腾法能有效减轻提取过程酸对设备的腐蚀。

超声波提取两面针中的总碱

在提取两面针总碱时,超声提取法与回流提取法相比较,具有省时、节能、提出率高的等优点。

酶法辅助浸渍提取两面针中的氯化两面针碱

目的优选酶解预处理后浸渍提取两面针中氯化两面针碱的工艺。方法用正交实验法研究pH、酶解温度、时间等酶解因素和溶剂、次数、时间等浸渍提取因素对氯化两面针碱提取率的影响。结果最佳工艺条件为:纤维素酶、果胶酶底物质量比均为1∶250,4倍量缓冲液(pH=5),室温(30℃)下酶解30 min,再以60%乙醇-5 g.L-1盐酸室温下浸渍提取3次,溶剂量分别为10,4和3倍量,每次2 h,氯化两面针碱提取率85.96%。结论该工艺经济高效、节能环保,为工业生产奠定了实验基础。

两面针提取工艺研究

目的优选两面针药材的最佳提取工艺。方法采用正交试验,以乙醇体积分数、乙醇用量、提取次数和提取时间作为优选因素,以出膏率和氯化两面针碱转移率为综合指标,确定合理的醇提取工艺。结果最佳提取工艺条件是:乙醇体积分数为70%,乙醇用量为8倍,提取4次,每次1.5 h。结论优化得到的提取工艺稳定可行,为生产提供了实验依据。

正交实验优选两面针的提取工艺

目的:对两面针的提取工艺进行优选。方法:以氯化两面针碱转移率为评价指标,用RP-HPLC法测定其含量,采用正交实验法对两面针的提取工艺进行优选。结果:最佳提取工艺条件为两面针药材用60%的乙醇溶液提取两次,第1次9倍量,提取2h,第2次7倍量,提取1.5h。结论:优选出的工艺科学合理。

星点设计—效应面法优选两面针活性成分的提取工艺

目的:优选两面针活性成分的最佳提取工艺。方法:以加氯仿倍量、提取时间为主要影响因素,以氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱和L-芝麻素含量为评价指标,用星点设计—效应面法优选两面针活性成分的最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为加入60倍量氯仿,提取3次,每次提取120min。结论:用星点设计—效应面法优选两面针活性成分的提取工艺简便易行,预测性好。

超声-酶法提取两面针中血根碱的工艺优选

目的优化超声-酶法提取两面针中血根碱的工艺条件。方法以高效液相色谱(HPLC)法测定血根碱提取率为指标,考察提取溶剂加酸和酶解预处理对两面针超声提取的适用性,正交实验优化超声功率、提取次数和溶剂量,最后动态过程优化超声提取时间。结果最佳工艺条件为:两面针复合酶预处理后,以体积分数40%乙醇(含盐酸0.2%)超声(250 W)提取3次,第1次以6倍量溶剂提取15 min,第2,3次各以3倍量溶剂提取12 min,血根碱提取率为88.6%。结论该提取工艺经济、高效、节能、省时,可为开发利用血根碱提供实验基础。

两面针水提物对酵母朊病毒作用研究

为研究两面针水提物的抗朊病毒作用,借助酵母朊病毒[PSI+]表型系统分析两面针水提物对[PSI+]表型的治疗作用,引入半变性琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白水平分析两面针水提物对酵母朊病毒的治疗效果。结果显示,两面针水提物浓度为125mg/mL时,作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d的治愈率为90.2%;并且两面针水提物浓度在25mg/mL～125mg/mL范围内,药物剂量与酵母朊病毒[PSI+]表型治疗效果呈现较好正相关性。蛋白水平试验表明两面针水提物作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d后红色菌落的朊病毒聚集体大小与[psi-]相似。

两面针中氯化两面针碱提取工艺优化

目的考察不同pH值水溶液对氯化两面针碱的提取的影响。方法采用正交实验法对提取溶液的pH、温度、加水量条件进行筛选，以氯化两面针碱的提取率作为指标，用HPLC法测定溶液中氯化两面针碱的含量。结果氯化两面针碱的最佳条件为适量的两面针流浸膏加入10倍量，40℃的水，调整酸度pH=1．0的溶液环境。结论优选的氯化两面针碱提取条件适合工业大生产。

正交设计和动态过程优化两面针半仿生提取工艺

目的优选两面针的半仿生提取工艺条件。方法以总生物碱得率和干膏收率为指标,采用正交实验优选半仿生提取工艺后,再动态过程精选提取工艺。结果最佳工艺条件为:复合酶预处理后再70℃水浴提取,第1次以6倍量pH 2.0缓冲液提取80 min,第2次以6倍量pH 7.5缓冲液提取60 min,最后以6倍量pH 8.3缓冲液提取50 min。结论该工艺高效、节能、省时,为工业生产奠定实验基础。

入山虎不同提取部位抗类风湿性关节炎活性研究

目的考察入山虎Zanthoxylum nitidum var.tomentosum不同提取部位对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用及提取部位的化学成分分析。方法考察入山虎不同提取部位对人RA成纤维样滑膜MH7A细胞增殖活性和炎症因子含量的影响,通过对大鼠足趾部皮内注射完全弗氏佐剂建立RA大鼠模型,测定大鼠体质量、全身评分、关节炎指数、足跖肿胀度、脏器系数、血清中炎症因子含量,采用苏木素-伊红染色观察踝关节组织病理,以评价入山虎不同提取部位的抗RA活性作用。采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析入山虎提取部位的化学成分。结果入山虎中的氯仿及石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水提取部位在体内外对RA均具有良好的抗炎作用。在体外,能够抑制MH7A细胞的增殖(P<0.05、0.01),减少炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-17A、IL-1β的分泌(P<0.01);在体内,入山虎的提取部位可不同程度降低RA大鼠的足跖肿胀度、全身评分及关节炎评分(P<0.05、0.01),改善踝关节的病理改变,缓解RA大鼠的炎症反应,还能减少促炎因子IL-6、IL-17A、IL-1β的分泌(P<0.01),增加抗炎因子IL-4、IL-10的分泌(P<0.01)。对入山虎的提取部位进行化学成分分析,发现入山虎的提取物含有的化合物比较相似,含有生物碱、黄酮、香豆素等其他化合物,以生物碱类居多,主要包括呋喃喹啉类、苄基异喹啉类、原小檗碱类、阿朴啡类、苯并菲啶类、酰胺类等。结论入山虎中的氯仿及石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水部位在体内外对RA均具有良好的抗炎作用,入山虎提取物主要含有生物碱、黄酮、香豆素等其他化合物。