基于BMSCs淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质提取工艺研究

目的筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺。方法采用正交设计,选取提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素,以BMSCs细胞增殖率结合淫羊藿苷、总黄酮含量为考察指标,筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺,并对最佳提取条件进行验证。结果兼顾生产效率和节约能源,优选出淫羊藿-仙茅-巴戟天角药药效物质的最佳提取条件为提取时间1.5 h,乙醇浓度55%,溶剂用量10倍。验证实验结果BMSCs细胞增殖率、淫羊藿苷及总黄酮含量与工艺考察结果非常接近。结论该方法在保证淫羊藿-仙茅-巴戟天角药治疗骨质疏松的药效基础上,结合淫羊藿苷及总黄酮含量进行综合评价,优化提取工艺,使得实验结果更科学合理。

巴戟天水提液对双酚A染毒小鼠性激素及受体表达的影响

目的探讨巴戟天水提液对双酚A(BPA)染毒小鼠性激素及受体表达的影响。方法将60只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组和巴戟天水提液低、中、高剂量组(20、40、60 mg/kg),每组12只。模型组和巴戟天水提液各剂量组小鼠灌胃BPA[50 mg/(kg·d),每天1次,连续4周]以建立BPA染毒模型。造模后,各药物组小鼠灌胃相应药液,每天1次,连续4周。末次给药后,称定各组小鼠的体重和睾丸质量,观察其睾丸组织病理改变,检测其血清性激素[黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)]含量和睾丸组织中LH受体(LHR)、FSH受体(FSHR)mRNA及蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠睾丸组织存在结构变性,生精细胞与支持细胞之间连接松散、出现明显裂隙,且生精细胞数量减少;睾丸组织中LHR、FSHR mRNA及蛋白的表达均显著下调(P<0.01),但其体重、睾丸质量和血清LH、FSH含量均无明显变化(P>0.05)。与模型组比较,巴戟天水提液各剂量组小鼠睾丸组织病理改变均有不同程度改善;睾丸组织中LHR、FSHR mRNA及蛋白的表达亦有不同程度上调(P<0.05或P<0.01),且部分指标水平与对照组相当(P>0.05),但其体重、睾丸质量和血清LH、FSH含量无明显变化(P>0.05)。结论巴戟天水提液对BPA染毒小鼠睾丸损伤有一定的改善作用,可能与其提高LHR、FSHR蛋白及mRNA的表达有关。

巴戟天多糖的提取及纯化研究

采用纤维素酶水解方法提取巴戟天粗多糖,并通过离子交换和凝胶过滤层析对得到的粗多糖进行了分离纯化。正交试验得到最佳的酶处理条件为:纤维素酶用量8mg/g、pH5.0、水解温度40℃以及水解时间2h。采用阶段梯度洗脱方式,巴戟天多糖在DEAE-Sephrose CL-6B柱上被分为三个组分:MOPI-1、MOPI-2和MOPI-3。将离子交换层析得到的MOPI-2和MOPI-3组分进行Sephadex G-50凝胶过滤层析,由MOPI-3可得到均一组分MOPI-3a,而MOPI-2被分为MOPI-2a和MOPI-2b两个组分。

巴戟天醇提取物的抗抑郁作用

目的 探索巴戟天醇提物的抗抑郁作用。方法 采用大小鼠强迫性游泳和大鼠低速率差式强化程序 (DRL 72s)法。结果 在小鼠强迫性游泳模型上 ,po醇提物 2 0 0～ 40 0mg·kg- 1 ,或醇提物A 5 0mg·kg- 1 ,与ip地昔帕明 10mg·kg- 1 的作用类似 ,明显缩短小鼠的不动时间 ;同样 ,po醇提物 5 0～ 15 0mg·kg- 1 或醇提物A 2 5mg·kg- 1 也显著缩短大鼠强迫性游泳的不动时间 ,po地昔帕明 40mg·kg- 1 也有类似的效果。另外 ,在大鼠DRL 72s模型上 ,ip醇提物 10 0mg·kg- 1 或醇提物A 2 0mg·kg- 1 ,显著增加大鼠的强化数 ,其效应与ip地昔帕明 5mg·kg- 1 的相当 ,并显示明显的剂量依赖性。但与此同时 ,醇提物和醇提物A并不影响大鼠的反应数和效应比率。

巴戟天多糖的分离与纯化新方法

以巴戟天(Morinda officinalisHow)为原料,运用多种理化方法,提取纯化巴戟天粗多糖,经红外吸收光谱比较和鉴定确认提取物中有多糖特征吸收.采用苯酚—硫酸法测定多糖含量,以多糖的纯度和提取率为主要指标,对提取方法进行优化.结果表明,用乙醇-水提取法进行提取,用Sevag法除蛋白,氯化十六烷基吡啶(CPC)结合醇沉法进行纯化.正交实验结果表明提取纯化巴戟多糖最隹条件是乙醇浓度为85%,CPC浓度为0.4%,粗多糖浓度为10%的条件下,纯化多糖的纯度为89.7%,多糖的提取率为10.2%.

RSM优化巴戟天多糖的超声波辅助提取工艺

利用响应面分析法(RSM),对超声波水提巴戟天多糖的工艺进行优化.在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,运用SAS 8.2和Design-Expert 7.1.1分析软件对实验数据进行二次响应面分析.获得巴戟天多糖的最佳提取条件:料液比(原料质量与提取液体积的比,g∶mL)为1∶13,超声波提取时间为30 min,提取次数为2次.在此最优工艺条件下,测得巴戟天多糖质量比为35.93 mg.g-1.

响应面法优化巴戟天多糖提取工艺

为确定巴戟天多糖热水浸提的最佳工艺,以多糖提取率为考察指标,选取液料比、浸提时间、浸提温度3个因素进行单因素试验和基于Box-Behnken设计的响应面试验,利用Design-Expert软件对多糖提取率的二次多项式回归模型进行分析,结果表明:浸提时间对巴戟天多糖提取率影响最为显著,巴戟天多糖提取的最佳工艺为液料比为25∶1 m L·g^(-1),浸提温度为81℃,浸提时间为3.1 h;该条件下多糖提取率为11.282 4%,与模型预测值接近,相对误差仅为0.38%,说明采用响应面法优化巴戟天多糖提取工艺合理可行。

南药巴戟天多糖提取方法的比较研究

以巴戟天(MorindaOfficinalisHow)为原料,运用多种理化方法,提取巴戟天粗多糖,经红外吸收光谱、紫外吸收光谱的比较和鉴定确认提取物中有多糖特征吸收.测定粗多糖中多糖、蛋白质组成物质的含量,以多糖的纯度和提取率为主要指标,对提取方法予以比较,结果表明蒸馏水处理为较理想的提取方法.

酶法辅助提取巴戟天多糖的工艺研究

应用单因素和正交试验探讨酶用量、酶解温度、时间和酶作用pH对巴戟天多糖提取率的影响。结果表明,纤维素酶能够显著提高巴戟天多糖的提取率,适宜提取工艺条件为温度55℃、pH5.0、酶用量0.5%、提取时间2h,此条件下多糖提取率为8.56%,为热水浸提法多糖提取率的1.91倍。

巴戟天环烯醚萜苷类成分含量测定和提取方法的研究

目的建立测定巴戟天环烯醚萜苷类成分含量的方法,并研究其最佳提取方法。方法以巴戟天环烯醚萜苷类成分水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷为对照品,采用HPLC法进行含量测定。色谱柱为艾杰尔Venusil MP Cl8柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸+0.01mol/L磷酸氢二钠缓冲盐(B)梯度洗脱(0~12min,1%~2%A;12~30min,2%~25%A),检测波长为235nm,流速为1.0ml/min,柱温为25℃,进样量为20μl。采用单因素考察和正交试验优化巴戟天环烯醚萜苷类成分的提取方法。结果水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷在0.375~12、0.13~4.16、0.016~0.516和0.012~0.384μg范围内,线性关系良好;重复性、精密度、加样回收率和稳定性试验结果均符合要求。优化的巴戟天环烯醚萜苷类成分的最佳提取方法为:巴戟天药材用16倍10%乙醇浸泡9h,渗漉提取,流速为0.8BV/h。结论此法可准确、灵敏地测定巴戟天环烯醚萜苷类成分的含量,并可使该类成分得到充分提取。

多指标综合评分法优选巴戟天低聚糖提取工艺

目的优选巴戟天低聚糖提取工艺。方法在单因素试验的基础上,采用正交试验法,以液固比、乙醇体积分数、提取时间、提取次数为考察因素,以出膏率及低聚糖、巴戟甲素和耐斯糖提取率为指标,进行综合评分。结果优选出的最佳提取工艺为加入15倍量的40%乙醇浸泡24 h,提取2次,每次1.0 h。结论优化的提取工艺结果可靠,评价指标可控,对巴戟天的质量控制与开发利用具有一定意义。

巴戟天萃取液对环磷酰胺损伤大鼠生精功能的影响

目的：探讨巴戟天萃取液（MO）对环磷酰胺（CTX）损伤成年雄性SD大鼠生精功能的影响。方法：56只成年雄性SD大鼠（重约210～250 g）按巴戟天不同浓度,随机分为7组,空白对照组、CTX模型组、CTX＋生理盐水（NS）组、CTX＋10 g/kg MO组、CTX＋20 g/kg MO组、CTX＋30 g/kg MO组、CTX＋40 g/kg MO组。以不同浓度的环磷酰胺构建大鼠生精功能损伤动物模型;巴戟天水提物用乙酸乙酯萃取后取水层成分,分别以10 g/（kg·d）、20 g/（kg·d）、30 g/（kg·d）、40 g/（kg·d）的浓度给予4组治疗组灌胃,持续2周。观察各组大鼠体重、睾丸指数、附睾指数;睾丸组织经HE染色后,观察微细结构,比较各组生精小管直径和睾丸活检评分。结果：治疗后CTX＋NS组体重（234.83±28.77）g和附睾指数（2.71±0.34）与CTX＋10 g/kg MO组、CTX＋20 g/kg MO组、CTX＋30 g/kg MO组、CTX＋40 g/kg MO组之间比较无差异。CTX＋NS组睾丸指数[（12.15±1.04）g]与CTX＋20 g/kg MO组[（13.71±0.97）g]、CTX＋30 g/kg MO组[（13.30±0.29）g]、CTX＋40 g/kg MO组[（13.48±0.51）g]比较显著升高（P〈0.05）。光镜下观察可见CTX＋NS组明显病理改变,4个治疗组的睾丸生精小管的结构明显改善。CTX＋NS组、CTX＋10 g/kg MO组、CTX＋20 g/kg MO组、CTX＋30 g/kg MO组、CTX＋40 g/kg MO组的生精小管直径分别为[（189.74±8.55、204.78±11.03、216.55±10.93、218.03±11.23、218.59±14.06）μm],睾丸活检评分分别为（5.95±1.21、9.03±0.39、9.69±0.26、9.83±0.18、9.89±0.11）,CTX＋NS组与4个治疗组比较存在显著性差异（P〈0.05）,随着巴戟天萃取液治疗浓度的提高治疗效果也随之提高。结论：巴戟天萃取液对环磷酰胺损伤的大鼠生精功能具有修复作用,并且以30 g/（kg·d）、40 g/（kg·d）的治疗浓度治疗效果最佳。

巴戟天多糖提取工艺及抗氧化抗疲劳活性研究

以广东德庆地区的巴戟天为原料,对巴戟天多糖提取工艺进行响应面优化分析,并对提取所得巴戟天多糖的抗氧化性及抗疲劳作用进行评价。结果表明,最佳提取条件为提取时间2h,提取次数3次,料液比1:11(g/mL),巴戟天多糖得率为6.71%,与理论预测值仅相差0.11%;体外抗氧化研究表明,在该条件下得到的巴戟天多糖具有良好的O_2^-·和DPPH·清除能力。表明优化所得工艺条件稳定可行,且所得多糖具有良好抗氧化能力。NIH小鼠试验结果显示,巴戟天多糖能降低体内的尿素氮和乳酸,升高肝糖元含量,呈现出一定的抗疲劳效用。

巴戟天水提取物油脂抗氧化性和抗菌活性研究

目的:研究巴戟天水提取物的油脂抗氧化性和抗菌活性。方法:采用水煎法提取巴戟天后,将其提取物用于抗氧化活性和抗菌活性的试验应用。结果:巴戟天水提取物具有油脂抗氧化作用,并且随着添加量的增加抗氧化效果越好;抗菌试验说明巴戟天水提取物对细菌的抗菌效果较好,尤其是对金黄色葡萄球菌的抗菌能力强,但对于酵母和霉菌的抑制作用弱。结论:巴戟天水提取物具有油脂抗氧化作用和抗菌活性,可进一步深入研究并将其用于食品添加剂。

超声波提取巴戟天多糖工艺的研究

以巴戟天为试材,通过正交实验方法,研究了不同液固比、超声时间和温度对巴戟天多糖提取效率的影响。结果表明:液固比、超声时间和温度3个因素在单因素试验条件下对巴戟天多糖的提取率都有影响。正交实验结果表明,温度是对巴戟天多糖提取率影响最大的因素,优化的最佳提取条件为:温度80℃,液固比为45∶1mL/mg,超声时间45min。

不同提取方法对巴戟天中金属元素含量影响的初步探讨

采用了水提、醇提及模拟胃酸浓度的酸提法对巴戟天药材进行提取 ,并用火焰原子吸收分光光度法分别对其中的金属元素含量进行了测定。实验结果表明 ,三种提取方法中 ,醇提法金属溶出量最少 ,对于有害重金属含量较高的中药 ,可以在中药提取的工艺当中 ,利用不同的提取方法除去有害重金属。通过对三种提取方法所得的提取液中Pb、Cd的存在形态研究表明 ,Cd在工艺过程除去相对较容易 ,而Pb较困难 。

巴戟天正丁醇提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后炎性细胞因子的影响

目的:观察巴戟天正丁醇提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后炎性细胞因子的影响。方法:采用培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、巴戟天正丁醇提物小、中、大剂量组。平衡法测定TNF-α、IL-1β、IL-6的含量变化。结果:巴戟天正丁醇提物可明显改善缺氧、复氧损伤;降低TNF-α、IL-1β、IL-6的含量。结论:巴戟天正丁醇提取物对缺氧/复氧损伤的心肌细胞有防护作用;其防护作用可能与降低TNF-α、IL-1β、IL-6的含量有关。

巴戟天乙醇提取物的油脂抗氧化性和抗菌活性

采用不同浓度乙醇溶液提取巴戟天后,将其提取物用于抗氧化活性和抗菌活性的实验研究。结果表明,巴戟天乙醇提取物具有油脂抗氧化作用,并且随添加量的增加抗氧化效果越好,且乙醇溶液浓度为80%时提取物的抗氧化效果最好。巴戟天乙醇提取物对细菌的抗菌效果较好,但对于酵母和霉菌的抑制作用弱。

巴戟天萃取物对环磷酰胺诱导生精障碍大鼠支持细胞的影响

目的探讨巴戟天萃取物对环磷酰胺(CTX)诱导生精障碍大鼠睾丸支持细胞的影响。方法 48只成年雄性SD大鼠,随机分为6组,空白对照组、CTX+NS组、CTX+MO 10 g/kg组、CTX+MO 20 g/kg组、CTX+MO 30 g/kg组、CTX+MO 40 g/kg组。以CTX构建大鼠生精障碍动物模型;巴戟天水提物用乙酸乙酯萃取后取水层成分,分别以10、20、30、40 g/(kg·d)的浓度给予4个剂量实验组灌胃,空白对照组及CTX+NS组予生理盐水灌胃,持续2周。取各组大鼠睾丸组织,荧光定量PCR检测卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和雄激素结合蛋白(ABP)mRNA表达的差异。结果 4个剂量实验组FSHR mRNA和ABP mRNA表达明显高于CTX+NS组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论巴戟天萃取物对CTX诱导生精障碍大鼠的睾丸支持细胞具有保护作用,进而修复睾丸的生精功能。

无多糖巴戟天基因组DNA提取物的制备

由于巴戟天(MorindaofficinalisHow)植株中多糖含量较高,故其总DNA的提取明显存在着多糖干扰的问题。多糖可以抑制多种生物学酶类(如聚合酶、连接酶、限制性内切酶等)的活性,对DNA的浓缩也有影响;受多糖污染的DNA呈粘稠的胶状,不便于后续的DNA分子生物学实验操作。笔者在对比多种DNA提取方法的基础上,确定先对材料进行一定的预处理,再用CTAB法提取基因组DNA。这种方法,不但有效地解决了巴戟天基因组DNA受多糖干扰的问题,而且仅需使用常用试剂,实验成本低,简便易行。