中药材鹿鞭的分子鉴定研究

目的 :建立中药材鹿鞭的分子分类学鉴定试剂盒。方法 :根据对不同产地梅花鹿、马鹿、白唇鹿、水鹿线粒体DNA进行PCR扩增和序列测定 ,并与常见伪充药材来源动物线粒体DNA同位置序列比较 ,找到该 4个鹿种的特征片段 ,经过实际检验 ,筛选出合适片段作为鹿的种属特异性PCR引物。结果 :该引物与相关试剂组成试剂盒后 ,可用于中药材鹿鞭与常见伪充药材牛鞭、驴鞭等的鉴别。结论 :用分子分类学方法鉴别中药材鹿鞭 ,具有科学、稳定、准确、简便等特点 ,值得推广。

灰关联度法评价鹿鞭药材质量研究

目的:建立鹿鞭药材质量评价方法。方法:采用灰关联度法,从不同品种和产地鹿鞭药材中测定6种主要成分的含量,以定义的相对关联度为测度,构建质量评价模型。结果:通过该模型,9份鹿鞭药材样品的质量评价结果与传统鹿鞭药材的产地及目前药材市场经营的品种相符合。结论:本方法及模型可用于鹿鞭药材质量评价。

基于毛细管电泳的鹿鞭DNA指纹鉴定方法

目的研究基于毛细管电泳的鹿鞭DNA指纹鉴定方法。方法盐析法提取梅花鹿鞭、马鹿鞭、驯鹿鞭和赤鹿鞭的线粒体DNA,对序列为GAGCGTCGAA的引物进行RAPD扩增,毛细管电泳法分析其产物,再对所得指纹图谱的相似度进行分析。结果梅花鹿鞭指纹图谱中有9个共有峰,马鹿鞭指纹图谱中有21个共有峰,与驯鹿鞭和赤鹿鞭有明显差异。而且,其相似度均小于0.7。结论该方法客观、准确、方便,可有效区分梅花鹿鞭、马鹿鞭及其伪品(驯鹿鞭、赤鹿鞭)。

商品鹿鞭中多胺类组分含量比较

目的:比较不同品种与产地的鹿鞭药材中3种多胺类成分的含量。方法:采用HPLC法分别测定10个鹿鞭样品腐胺、精胺及精脒的含量。结果:不同样品的3种多胺类成份及总多胺含量均有一定差异。结论:多胺类成分含量可作为鹿鞭质量控制指标之一。

两种鹿鞭水提物对顺铂诱导小鼠急性肾损伤的保护作用

目的研究和比较两种鹿鞭水提物对顺铂(CDDP)诱导小鼠急性肾损伤保护作用,并探讨可能机制。方法 64只雄性小鼠随机均等分为空白对照组、CDDP模型组、新西兰马鹿鞭和梅花鹿鞭水提物高、中、低剂量(100μg/g、200μg/g、400μg/g)+CDDP保护组;各鹿鞭保护组连续灌胃7天,在第5天给药1 h后(除空白对照组)小鼠均腹腔注射CDDP(20μg/g)诱导急性肾损伤。造模48 h后,测定小鼠血清和肾组织中肾功能指标水平和观察HE染色肾脏组织病理学切片变化。结果与CDDP模型组比较,两种鹿鞭水提物各剂量保护组均可改善肾功能指标水平和肾损伤状况,梅花鹿鞭较新西兰马鹿鞭效果更佳,其中梅花鹿鞭水提物高剂量保护组效果最为显著:BUN、CRE和MDA显著降低(P<0.01),SOD和GSH显著升高(P<0.01);明显改善损伤肾脏中肾小管变性和坏死的现象,但未恢复正常水平。结论两种鹿鞭水提物均对顺铂诱导小鼠急性肾损伤有明显保护作用,可能与清除自由基和抗氧化应激作用有密切联系。

鹿鞭炮制前后化学成分的研究

用50%乙醇浸出物、氯仿浸出物、总氮、总灰分,18种氨基酸、20种无机元素和2种激素作指标,对鹿鞭炮制前后作了成分分析。鹿鞭与其炮制品的多数成分无明显差片。炮制后能达到去腥、便于粉碎和浸出的目的。

鹿鞭的药理作用及其感官真伪鉴别

系统地阐述了鹿鞭的药理作用及其感官形态特征,有助于提高人们对鹿鞭的认识,增强鉴别真伪鹿鞭的能力,同时促进鹿鞭市场的规范化。

鹿鞭的化学成分及药理活性研究现状

鹿鞭(Testis et penis ceⅣi)为传统珍贵中药之一,主要是指鹿科动物梅花鹿(Cervus nippon)和马鹿(Cervus elaphus)的干燥带睾丸的阴茎,具有多种生物活性作用,是历史悠久的益精血、壮肾阳宝贵中药。文中以国内外有关文献为基础,综述了鹿鞭性状特征、化学成分、药理活性以及应用现状,为鹿鞭进一步开发利用提供重要依据。

鹿鞭线粒体DNA指纹鉴定

目的探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法碱变性法提取新鲜鹿鞭及牛鞭,采用引物设计软件PrimerPremier5.0对鹿鞭及牛鞭的细胞色素b基因序列分析,用于鉴定正品鹿鞭的特异性引物,经聚合酶链式反应(PCR)扩增,对鹿鞭进行DNA指纹鉴定。结果对鹿鞭进行mtDNA鉴定图谱显示,真品鹿鞭有306bp条带,伪品没有。结论用此方法对鹿鞭进行鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行。鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于鹿鞭的鉴定。

胶束电动毛细管色谱法分析性激素

用胶束电动毛细管色谱法分离和测定雌三醇、炔诺酮、睾酮、雌酮、雌二醇、炔雌醇、黄体酮性激素,考察各种操作参数及有机添加剂对分离的影响.各组分在7min内得到很好的分离,检出限1.0～4.5 mg/L,样品的加标回收率91.5～106.3 mg/L,相对标准偏差4.7%～5.3%.该方法简便、快速,已成功用于炔诺酮片和鹿鞭提取液中性激素的同时分析.

市售鹿鞭的DNA指纹鉴定研究

目的探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因(Cytb)部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法对市售鹿鞭进行样本处理,模板制备,采用鹿鞭特异性引物进行PCR反应,对市售鹿鞭样本采取DNA指纹鉴定。结果对市售鹿鞭中药材进行mtDNA鉴定,有三个样本为正品。结论此方法对市售鹿鞭鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行,说明鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于市售鹿鞭的鉴定。

响应面法优化鹿鞭肽酶解工艺及体外补肾健骨活性分析

目的:确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件,并探究其体外补肾健骨活性。方法:以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素,水解度为响应指标,在单因素实验的基础上,结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计,获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺;探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)的存活率以及睾酮(Testosterone,T)的分泌影响和对成骨细胞(MC3T3-E1)的存活率、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活力以及骨钙素(Osteocalcin,OCN)的分泌影响。结果:最佳酶解工艺条件为温度51℃,pH8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为40.36%±0.22%;体外活性实验结果表明,TM3细胞不同浓度(25、50、100、200μg/mL)给药组与模型组相比较,均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌(P<0.05),并在50μg/mL质量浓度下,鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强,其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度(25、50、100、200μg/mL)给药组与模型组相比较,细胞存活率和ALP活力、OCN分泌都有显著提高(P<0.05),并在50μg/mL质量浓度下,ALP活力及OCN分泌作用最显著,ALP活力为6.80金氏单位/g prot,OCN分泌量为15.63 ng/mL。结论:本实验通过响应面法确定了鹿鞭肽的最佳酶解工艺,验证了鹿鞭酶解肽具有较好的体外补肾健骨活性,为以后鹿鞭的综合开发利用提供一定的理论基础。

鹿鞭商品中总多糖含量测定

目的建立鹿鞭药材中总多糖含量测定方法,以评价不同产地的鹿鞭药材质量。方法采用乙醚脱脂水提取后,苯酚-硫酸显色,采用分光光度法,测定两个品种、10个不同产地的鹿鞭药材中的总多糖含量。结果样品中总多糖含量以葡萄糖计的回归方程Y=0.0209X-0.2007(r=0.9991),线性范围在0～50μg,RSD=1.7%,平均回收率为101.11%。结论采用硫酸-苯酚法测定鹿鞭药材中总多糖含量的方法简便,结果理想,可作为该药材质量控制的方法。

聚合酶链式反应偶联单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术用于鹿鞭线粒体DNA指纹的研究

目的建立一种快速、简便、准确的分子生物学方法,用来鉴别鹿鞭真伪及品种。方法应用柱色谱法提取梅花鹿鞭、马鹿鞭、牛鞭以及市售鹿鞭线粒体DNA;根据GenBank中鹿类动物线粒体细胞色素b基因序列,设计一对引物用于线粒体DNA的聚合酶链式反应(PCR)特异性扩增;应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对聚合酶链式反应产物进行单链构象多态分析(single strand conformation polymorphism,SSCP)。结果梅花鹿鞭、马鹿鞭以及部分市售鹿鞭可显示清晰且迁移率不同的片段;对照组伪品鹿鞭及部分市售鹿鞭无特异性显示。结论柱色谱法提取线粒体DNA所需时间短,DNA纯度高,DNA分子的破坏性较小,为特异性聚合酶链式反应扩增提供一级结构保证;单链构象多态分析法可以清晰显示正品梅花鹿鞭、马鹿鞭以及部分市售鹿鞭单链片段,其一级结构中的碱基差别为正品梅花鹿鞭、马鹿鞭的不同迁移率提供依据,也为药源市场鹿鞭的鉴别提供一种可以直接进行亚种间鉴别的快速、简便、准确的可行性方法。

花鹿鞭和马鹿鞭抗疲劳作用的研究

目的:研究和比较花鹿鞭和马鹿鞭对小鼠抗疲劳的作用。方法:将梅花鹿鞭和新西兰马鹿鞭醇提物粉末分别配制成高、中、低剂量组样品溶液,小鼠连续灌胃28 d后,测定小鼠负重游泳的时间,疲劳小鼠血清中尿素氮(BUN)、血乳酸(BLA)、乳酸脱氢酶(LDH)和肝糖原(LG)、肌糖原(MG)及肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)氧化应激指标。结果:与空白对照组相比,新西兰马鹿鞭和梅花鹿鞭均可延长小鼠负重游泳时间,降低运动后小鼠BUN、BLA和MDA水平,升高LDH、LG、MG、SOD和GSH水平,改善小鼠疲劳状况;新西兰马鹿鞭较梅花鹿鞭抗疲劳效果更为显著,其中高剂量组效果更好,存在剂量依赖。结论:2种鹿鞭均对小鼠有明显的抗疲劳功效,为鹿鞭进一步研究和合理开发利用提供理论参考。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定鹿鞭中13种类固醇激素

该文基于QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定了鹿鞭中13种类固醇激素(诺龙、雄烯二酮、甲睾酮、睾酮、炔诺酮、甲羟孕酮、孕酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雌二醇、雌三醇、可的松、氢化可的松)的含量。样品经甲醇提取,QuEChERS前处理方法净化,经ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm, 3.5μm)分离,分别在电喷雾正、负离子模式下以多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)进行测定。结果显示,不同时期梅花鹿鹿鞭与马鹿鹿鞭及睾丸中激素含量存在差异。发情期的梅花鹿鹿鞭中睾酮和氢化可的松分别为10.88、12.82μg·kg^(-1),显著高于生茸期梅花鹿鹿鞭中睾酮和氢化可的松质量分数(分别为1.05、0.73μg·kg^(-1))。马鹿鹿鞭中孕酮检出量较高(6.07μg·kg^(-1)),显著高于梅花鹿鹿鞭。马鹿睾丸中孕酮最高达27.46μg·kg^(-1),是马鹿鹿鞭中的4.5倍。该检测方法前处理过程简单,灵敏度、准确度及精密度均符合要求,适用于动物源性食品中激素的检测。