多花黄精根须皂苷的提取工艺及其抗氧化活性研究

多花黄精根须一直以来被认为是利用价值低的加工副产物,极少有相关研究报道。该研究旨在明确多花黄精根须皂苷的较优提取工艺,并了解其抗氧化活性。响应面分析表明,最佳提取工艺为:72%乙醇体积分数,1∶25 g·mL^(-1)料液比,41 min提取时间。通过拟合分析得到提取率(Y)与乙醇体积分数(A)、料液比(B)、提取时间(C)的关系方程为:Y=5.58+0.5162A+0.0788B+0.05C-0.02AB-0.0075AC-0.0025BC-1.38A2-0.4395B2-0.257C2。通过验证表明,最优条件下皂苷提取率为5.62%,与理论最高值5.628%非常接近。体外抗氧化试验结果表明,皂苷IC50DPPH值为0.87 mg·mL^(-1),IC50ABTS值为0.68 mg·mL^(-1),具有良好的抗氧化性。综上,多花黄精根须中的皂苷成分具有可观的利用价值。研究结果可为多花黄精根须综合利用提供重要依据,也为其他副产物活性成分提取提供参考。

多花黄精水提物成分分析及抗肿瘤活性研究

目的分析多花黄精水提物成分,并对其体内外抗肿瘤活性进行评价,为进一步开发利用多花黄精提供理论基础。方法(1)通过水提法制备多花黄精水提物,利用UPLC-Q-TOF/MS、苯酚硫酸法等方法分析多花黄精水提物化学成分,并通过CCK-8法检测多花黄精水提物对多种肿瘤细胞增殖抑制活性,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况,利用多花黄精水提物含药血清检测入血成分对细胞增殖抑制活性。(2)构建荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(予以生理盐水)、阳性药环磷酰胺组(50 mg·kg^(-1))以及多花黄精水提物低、中、高剂量组(55.9、111.8、223.6 mg·kg^(-1)),灌胃治疗7 d。治疗期间,观察小鼠体质量及肿瘤体积变化情况。治疗结束后处死小鼠,采用苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肺、肾以及肿瘤组织病理学变化;免疫组化(IHC)检测肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果多花黄精水提物多糖含量达到(10.07±1.3)%,黄酮含量为(0.044±0.004)%,并且通过UPLC-Q-TOF/MS检测出39种成分,包含黄酮类的黄芩素、槲皮素、木犀草素、芦丁,有机酸类的阿魏酸及多酚类的没食子酸等抗肿瘤成分。多花黄精水提物对Hela、A549、4T1、B16、MFC和HepG2细胞均有抑制作用(P<0.001),其中对B16细胞抑制作用最为明显,且多花黄精水提物可诱导B16细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.001)。流式双染和Western Blot结果显示多花黄精水提物明显促进B16细胞凋亡,降低Bcl-2的表达,且促进Bax的表达(P<0.01,P<0.001)。多花黄精水提物入血成分对B16细胞也具有抑制作用(P<0.001)。此外,多花黄精水提物体内活性实验结果显示,与模型组比较,不同剂量的多花黄精水提物能够抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞坏死,降低Bcl-2表达,提高Bax的表达。结论多花黄精水提物成分丰富,含有多种抗肿瘤活性成分,能抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,显示较强的抗肿瘤作用,值得深入研究。

多花黄精提取物体外干预3T3-L1前脂肪细胞并缓解其脂质积累

研究多花黄精提取物对3T3-L1前脂肪细胞以及分化后成熟脂肪细胞的作用。用φ=70%乙醇和复合酶(纤维素酶:木瓜蛋白酶=3:7)为提取剂,分别提取出多花黄精生品乙醇提取物(Raw Products Extract,RPE)、多花黄精九蒸九制品乙醇提取物(Processed Products Extract,PPE)和多花黄精生品多糖(Polysaccharide from Polygonatum cyrtonema Hua,CPP),得到的九蒸九制品提取物中多糖质量百分比减少(RPE 29.83%,PPE 1.92%),但表现出更高的皂苷、总黄酮和总酚含量(13.63%、5.37 mg/g、14.52 mg/g)。各多花黄精提取物处理3T3-L1细胞后,均观察到3T3-L1前脂肪细胞被阻滞在G0/G1和S期,细胞被诱导凋亡从而抑制细胞的增殖,成熟脂肪细胞内脂滴沉积累量和甘油三酯(Triglyceride,TG)所占比例显著降低,且高剂量组的PPE(380μg/mL)对降低TG占比的效果最显著,与市售多花黄精九蒸九制品多糖(Polysaccharides from Purchased Products,PP)无显著差异。此外,脂肪生成和脂肪酸氧化有关基因也可受到调控,包括抑制PPARγ、C/EBPα、FABP4和LPL的mRNA表达,促进CPT-1的mRNA表达。结果提示,多花黄精提取物可防止脂肪细胞在体外积聚脂肪,表明多花黄精可能具有抗肥胖作用。

多花黄精多糖含片制备工艺的优化

采用超声辅助提取法开展多花黄精多糖提取工艺研究,在单因素试验的基础上,以多糖得率为指标,响应面法优化料液比、超声功率、超声时间、超声温度提取工艺参数;采用响应面设计优化多花黄精多糖含片配方,以综合评分为指标,在考察单因素基础上,获得最佳的填充剂、矫味剂、润滑剂添加量以及制粒润湿剂的体积分数。结果表明,多花黄精多糖超声辅助提取法最佳提取工艺参数为料液比为1∶40(g/mL)、超声功率为270 W、超声温度为71℃、超声时间为49 min,该条件下多花黄精多糖提取的得率为(25.07±0.15)%。多花黄精多糖含片最佳配方为填充剂添加量19.91%(甘露醇:微晶纤维素=3∶1,质量比)、矫味剂木糖醇添加量14.55%、矫味剂柠檬酸添加量5.04%、润滑剂硬脂酸镁添加量0.5%、制粒润湿剂乙醇的体积分数为85%。多花黄精多糖提取及其含片制备工艺稳定可控,多花黄精多糖含片中黄精多糖含量不低于0.28 g/片,崩解时限、脆碎度符合质量要求,呈淡黄色,色泽均匀,酸甜适宜。

炮制对多花黄精水提物抗氧化活性的影响

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum Mill.)植物,是一种常见的“药食同源”植物,可经黄酒“九蒸九制”炮制。文章首先将炮制前后的多花黄精粉末经热水浸提获得炮制前后的水提物,经醇沉,取上清液再经离心、浓缩、干燥得到脂溶性部位,取醇沉物经除蛋白、透析、干燥以得到多糖部位,发现2个部位提取率存在明显差异;然后体外评价水提物的抗氧化活性,发现“九蒸九制”后水提物总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和DPPH自由基清除能力均得到显著性提高;通过测定T-AOC和DPPH自由基清除能力等指标,发现炮制后水提物脂溶性部位和多糖部位体外抗氧化活性均显著高于炮制前。该文对了解多花黄精的药效学基础、临床应用和开发有效药物具有一定的意义。

不同基原与产地的黄精对比研究

目的对不同产地黄精药材进行多糖和浸出物含量测定,为黄精药材的优选提供参考。方法在全国范围收集黄精样品,用紫外分光光度法测定黄精中多糖含量,用稀乙醇作为溶剂测定黄精浸出物。结果野生滇黄精多糖含量在11.01%~17.22%,浸出物含量46.59%~58.16%,根茎繁殖和种植的滇黄精优于野生滇黄精;野生多花黄精多糖含量在10.39%~22.75%,浸出物含量48.67%~63.90%;野生黄精多糖含量在6.34%~16.79%,浸出物含量48.66%~63.09%。结论野生品种黄精多糖含量大小顺序为多花黄精>滇黄精>黄精,浸出物含量未见明显规律。品种种植中,贵州产滇黄精多糖含量与浸出物含量均较高,其次为多花黄精。

多花黄精炮制前后不同极性部位抗氧化与降血糖活性研究

研究多花黄精炮制前后不同极性部位的抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,筛选最佳活性部位。采用50%乙醇回流提取制备多花黄精生品和蒸制品醇提物,并测定其多糖、总黄酮、总酚含量。利用系统溶剂萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水相4个不同极性部位,以维生素C为对照,采用DPPH法、ABTS法、羟自由基法和超氧阴离子自由基等方法评价其抗氧化活性,同时以阿卡波糖为阳性对照测定各部位对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,多花黄精炮制加工后的醇提物中多糖含量降低,总黄酮、总酚含量升高,抗氧化和降血糖活性增强。多花黄精炮制前后不同极性萃取相均显示不同程度的作用,抗氧化综合能力顺序为:乙酸乙酯相>水相>正丁醇相>石油醚相,且制多花黄精醇提物>生多花黄精醇提物,蒸制品多花黄精乙酸乙酯相抑制α-葡萄糖苷酶活性最强,IC_(50)=(1.369±0.004)mg/mL。该研究结果为药食同源植物多花黄精作为降血糖食品和天然抗氧化剂提供了理论依据。

不同产地多花黄精化学成分含量比较分析

对8个产地收集的多花黄精中多糖、黄酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb、Cd的含量进行比较分析,结果显示,江西宜春的多花黄精多糖含量最高,为14.77%;湖南张家界的多花黄精黄酮及浸出物含量最高,分别为(1.09±0.04)mg/g、74.51%;四川广安的多花黄精多酚含量最高,为(1.45±0.02)mg/g;Cu、Se含量最高的分别为广东清远的多花黄精(1.7859μg/g)、江西宜春的多花黄精(77.99 ng/g);Pb、Cd含量最高的分别为广东清远的多花黄精(2.4694μg/g)、广西桂林的多花黄精(0.2637μg/g),但均低于国家的限量标准,不存在重金属超标问题。表明不同产地的多花黄精化学成分含量存在一定的差异。

炆黄精乙酸乙酯部位化学成分研究

目的:对炆黄精的乙酸乙酯部位化学成分进行分离和鉴定。方法:炆黄精70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、反相中压柱色谱和半制备高效液相色谱法分离纯化,并通过理化性质、质谱、核磁共振技术和相关文献数据等对所得化合物进行结构鉴定。结果:从炆黄精的乙酸乙酯部位分中离得到15个化合物,分别鉴定为:(2R,8Z)-2-hydroxy-{(2S,3R,5R,6S)-3,5-dihydroxy-6-[(1E,5Z)-hexadeca-1,5-dienyl]-2-(β-D-glucopyranosyloxy)methyl piperidine-1-yl}tetracos-8-enamide(1)、邻苯二甲酸二丁酯(2)、5-羟甲基糠醛(3)、(5-formylfuran-2-yl)methyl-2-hydroxypropanoate(4)、cirsiumaldehyde(5)、丁香脂素(6)、环(L-脯氨酸-L-酪氨酸)二肽(7)、5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(8)、胸腺嘧啶(9)、焦谷氨酸甲酯(10)、5-羟甲基糠醛基-甲基-丁二酸酯(11)、methyl-2-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)propanote(12)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(13)、(3S,6S)-3-benzyl-6-(hydroxymethyl)piperazine-2,5-dione(14)、2-羟甲基-5-羟基吡啶(15)。结论:其中,化合物1、4、5、7、9、11~14为首次从黄精属植物中分离得到,化合物8、15为首次从多花黄精中分离得到。

多花黄精不同组织总RNA提取方法的比较和改良

分离提取出高质量的RNA是研究多花黄精基因表达、调控与基因工程的基础。为了筛选多花黄精不同组织总RNA最佳提取方法,本研究以多花黄精根茎、茎、叶和花为材料,应用隶属函数法对Trizol法、CTAB-异丙醇法、植物总RNA提取试剂盒、CTAB-LiCl法、热酚法和改良热酚法6种方法不同的提取结果进行了浓度和质量的综合比较。结果表明,6种RNA提取方法中改良热酚法的效果最理想,提取多花黄精不同组织的RNA均能得到完整清晰的RNA条带,RNA的OD_(260)/OD_(280)和OD_(260)/OD_(230)值均在1.8~2.1之间,提取浓度在77.16~185.72μg/g之间。本研究对提取高质量的多花黄精总RNA具有一定的参考价值。