表皮葡萄球菌双组分信号转导系统arlS基因生物学功能研究

目的探讨表皮葡萄球菌arlS/R双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCS)的组氨酸激酶arlS基因删除对细菌生物学的影响。方法构建含有红霉素抗性基因(ermB)的pBT2-△arlS质粒,随后将电转入表皮葡萄球菌1457的重组质粒在43℃条件下振摇培养,筛选表皮葡萄球菌1457菌株的arlS缺失突变株(SE1457-△arlS);采用微量板半定量方法检测arlS删除突变对细菌生物被膜形成的影响,通过检测A595值观察其生长曲线,检测过夜培养上清液对菌细胞裂解的活性,并用0.1%TritonX-100诱导细菌自溶的方法检测SE1457-△arlS突变株的自溶情况。结果成功构建pBT2-△arlS质粒,利用同源重组基因删除的方法表皮葡萄球菌1457 arlS基因被删除。△arlS突变株与野生株的生长曲线基本相似,提示arlS基因删除对细菌的增殖无明显影响,但SE1457-△arlS突变株形成生物被膜的能力明显低于野生株,降低90.96%;在0.1%Triton X-100诱导下SE1457-△arlS基因删除突变株的裂解率为97.83%,野生株为55.38%;而△arlS突变株过夜培养上清液对靶细菌裂解的活性则低于野生株,其裂解率为20.50%,野生株为56.12%。结论表皮葡萄球菌arlS/R双组分信号转导系统arlS基因可调控细菌生物被膜形成、菌细胞自溶以及胞外细菌裂解酶的活性。

房间隔缺损患者心肌组织中ARL4基因的表达

目的:探讨房间隔缺损(ASD)患者心房肌组织中ARL4基因的表达变化,分析ARL4基因与ASD病理生理学之间的关系。方法:获取10例单纯Ⅱ孔型ASD患者和8例正常对照右房心耳肌组织标本,采用RT-PCR技术检测心房肌组织中ARL4基因mRNA的表达丰度。结果:ARL4基因表达于正常和ASD患者心房肌组织中,正常心肌组织中的表达丰度为(38.25±14.73)％,ASD患者心肌组织中的表达丰度为(70.71±16.26)％,ASD患者心肌组织中ARL4基因的表达丰度显著高于正常对照(t=4.3835,P<0.001)。结论:ARL4基因在心肌组织中的异常表达可能与ASD的病理生理学发生相关。

东北狍ARL3基因cDNA克隆及序列分析

为了研究ARL3基因的结构及其编码蛋白的理化性质,从而进一步推测该基因的功能,试验采用基因克隆技术成功获得东北狍(Capreolus pygargus)ARL3基因包含全部编码区的cDNA序列,并利用生物信息学方法对东北狍ARL3基因核苷酸及其编码氨基酸序列的结构特征进行初步预测和分析,并基于ARL3蛋白的氨基酸序列构建了分子系统进化树。结果表明:ARL3基因开放阅读框(ORF)为549 bp,共编码了182个氨基酸。ARL3蛋白具有亲水的特性,不存在信号肽,其二级结构主要由无规则卷曲组成,其次是α-螺旋和延伸链,分别占46.15%、33.52%和20.33%。ARL3蛋白有一个与P-loop;TPase超家族相似度很高的ARL3活性蛋白区域。生物信息学分析发现东北狍ARL3基因在进化上较为保守,构建的进化树表明东北狍与白尾鹿、野耗牛等物种亲缘关系较近。