肝素酶超表达对HEK293细胞中Arc基因的调节

目的:利用RT-PCR验证基于肝素酶转基因小鼠的大脑皮层组织表达芯片发现的表达上调基因Arc,研究肝素酶基因Hpse对Arc基因表达的影响。方法:在稳定转染小鼠肝素酶基因Hpse的HEK293细胞体系中,采用半定量PCR的方法分析Arc的mRNA表达情况。结果:与前期的小鼠大脑皮层表达芯片结果相反,Hpse下调Arc基因的表达。结论:推断肝素酶可能通过影响Arc基因的表达,从而影响细胞功能。

Arc基因表达及甲基化与幼龄鼠和成年鼠空间记忆形成的相关性

目的探讨Arc基因表达及甲基化与幼龄鼠和成年鼠空间记忆形成的相关性。方法应用Morris水迷宫对2月龄幼龄鼠和6月龄成年鼠进行定位航行训练,以判断其空间记忆形成情况。采用RT-PCR检测定位航行训练后大鼠海马组织Arc基因mRNA的转录水平,并对海马基因组DNA进行亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测Arc基因的甲基化情况,并进行DNA甲基化序列分析。结果随着定位航行训练入水次序及训练天数的增加,幼龄鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05);而成年鼠在训练当天随着入水次序的增加,逃避潜伏期缩短,但第2天逃避潜伏期不仅与入水次序有关,也随着放入点距离的增大,逃避潜伏期相对延长(P<0.05),至第3天逃避潜伏期与入水次序及距离均无关,形成稳定的记忆能力。成年鼠定位航行训练组海马组织Arc基因mRNA的转录水平显著高于正常对照组(P<0.01),且高于幼龄鼠(P<0.05)。与幼龄鼠正常对照组相比,幼龄鼠和成年鼠定位航行训练组第8和24位点均无甲基化,成年鼠定位航行训练组与正常对照组相比,甲基化位点无变化。结论幼龄鼠瞬时记忆能力接近成年鼠,但形成稳定记忆的能力弱于成年鼠。Arc启动子甲基化影响其mRNA的表达,而Arc基因mRNA的转录水平与大鼠空间记忆能力及年龄相关,进一步证实了甲基化参与调解学习和记忆。

Arc基因与幼龄鼠和成年鼠记忆能力关系的研究

目的研究Arc基因与不同月龄大鼠记忆形成的关系,以探讨认知功能障碍的机制。方法应用Morris水迷宫对2月龄幼龄鼠和6月龄成年鼠进行定位航行训练和空间探索能力检测以判断其记忆形成情况,用RT-PCR检测海马Arc mRNA的表达量。结果幼龄鼠和成年鼠平均逃避潜伏期逐渐降低,第3d显著低于第1d(P<0.05),尤其是幼龄鼠,表明其学习、记忆能力强,但其平均逃避潜伏期仍高于成年鼠,虽无显著性,但记忆能力已接近成年鼠,只是不稳定。幼龄鼠的穿越次数少于成年鼠,在目标象限的停留时间也短于成年鼠,虽然差异不显著,但可说明其空间探索能力低,也进一步说明其记忆能力接近成年鼠。RT-PCR结果显示定位航行训练组海马Arc mRNA的表达量明显高于对照组,且成年鼠高于幼龄鼠。结论幼龄鼠瞬时记忆能力接近成年鼠,但形成稳定记忆的能力弱于成年鼠。Arc基因在幼龄鼠和成年鼠静息状态时无明显差别,但行为训练后在成年鼠海马的表达量高于幼龄鼠。

甲基安非他命(冰毒)诱导基因表达变化研究进展

甲基安非他命进入机体后,其最根本的变化是引起了成瘾者许多基因转录和表达改变。这些基因包括与神经元损害有关的基因、与日节律有关的基因、与行为异常有关的基因及其它一些无法分类的基因。它们基因转录和表达水平增高或者降低引起了甲基安非他命成瘾者各种临床表现。研究这些基因表达可以为法医学鉴定提供依据。

口蹄疫病毒3ABC基因遗传关系分析

参考GenBank中发表的猪源O型口蹄疫病毒 3ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,分别以 5株猪源O型FMDV流行毒株基因组RNA为模板 ,通过RT PCR的方法获得 3ABC基因 ,并克隆到 pMD18 T载体中。测序结果显示 ,5株O型FMDV流行毒株的 3ABC基因cDNA均为 12 81bp ,编码由 4 2 7个氨基酸残基组成的多肽。同源性比较和系统发育树分析表明 ,5株O型FMDV流行毒株亲缘关系密切 ,属同一基因型。

温肾健脾调枢方对腹泻型肠易激综合征大鼠的治疗作用及机制

目的观察中药温肾健脾调枢方干预对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠磷酸化cAMP应答元件结合蛋白(pCREB)及下游即刻早期基因Arc、c-fos表达的影响。方法将40只Wistar大鼠适应性喂养5 d后,采用随机数字表法分为正常组(NG)、模型组(MG)、中药温肾健脾调枢方高剂量组(ZHG)、中药温肾健脾调枢方中剂量组(ZMG)和中药温肾健脾调枢方低剂量组(ZLG)5组,各8只。MG组、ZHG组、ZMG组和ZLG组均采用番泻叶灌胃法+避水应激实验建立IBS-D大鼠模型,ZHG组、ZMG组、ZLG组按高、中、低剂量给予温肾健脾调枢方灌胃,MG组、NG组给予生理盐水灌胃,1次/d,连续10 d。观察比较各组大鼠一般情况、体质量变化、排便粒数、内脏敏感性和组织病理学,免疫组化检测结肠组织中pCREB、Arc、c-fos表达。结果治疗结束后,ZHG组和ZMG组大鼠体质量高于MG组(P<0.05);ZHG组、ZMG组、ZLG组大鼠1 h内排便粒数低于MG组(P<0.05);ZHG组大鼠腹壁撤退反射(AWR)评分低于MG组(P<0.05);MG组和ZLG组组织病理学观察可见黏膜轻度水肿;ZHG组、ZMG组和ZLG组大鼠结肠组织pCREB表达低于MG组(P<0.05);ZHG组、ZMG组大鼠结肠组织Arc、c-fos表达低于MG组(P<0.05)。结论温肾健脾调枢方能够增加IBS-D大鼠体质量、减少排便粒数、降低内脏敏感性,其作用机制可能是通过调控结肠组织中pCREB、Arc和c-fos的表达实现。

耳鸣模型大鼠听皮层生长相关蛋白-43和细胞骨架活性调节蛋白的表达

目的检测神经元功能可塑性基因生长相关蛋白-43(growth associated protein,GAP-43)和细胞骨架活性调节蛋白(activity regulated cytoskeleton associated protein,ARC)在水杨酸诱导耳鸣大鼠听皮层中的表达,探讨其在耳鸣产生中的作用。方法将24只白色Wistar大鼠随机分为3组:水杨酸钠组(8只)、生理盐水组(8只)和空白对照组(8只)。前两组从条件反射建立前开始于每次条件反射训练前2小时分别腹腔注射10%水杨酸钠溶液(350mg/kg)和同体积生理盐水,至实验结束,空白对照组不做任何处理。通过行为学方法证实水杨酸钠组动物感受到耳鸣后,利用荧光定量PCR检测动物听皮层中GAP-43和ARC的表达。结果水杨酸钠组大鼠听皮层中GAP-43和ARC蛋白阳性神经元的表达(分别为2.17±0.72、4.90±2.13)明显高于生理盐水组(分别为1.05±0.20、1.13±0.42)和空白对照组(分别为0.96±0.97、1.07±0.70)(P<0.01),而生理盐水组和空白对照比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论耳鸣大鼠听皮层中神经元功能可塑性基因GAP-43和ARC蛋白阳性神经元的表达增加,推测它们可能在耳鸣的发生发展中起重要作用。

灯盏花ARC1基因的克隆及序列分析

本研究对灯盏花ARC1基因进行克隆及序列分析。根据实验室前期预测灯盏花的序列设计引物,以灯盏花花蕾为材料提取RNA作为模板,通过反转录(RT-PCR)扩增得到cDNA,作为PCR扩增的模板,将扩增的ARC1基因连接到p MD19-T上,阳性克隆经PCR检测后进行测序结果分析,得到2 199 bp的核酸序列。序列分析结果表明,该基因存在2个结构域,不存在内含子,编码733个氨基酸,其核酸序列的同源性达到64%以上,氨基酸序列同源性达61%。本研究首次从灯盏花中克隆出ARC1基因,为后期研究该基因提供理论基础。