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PVX介导的槟榔坏死环斑病毒CP蛋白在烟草中的表达和纯化
被引量:
2
1
作者
孙迪
沈文涛
+5 位作者
庹德财
唐庆华
言普
黎小瑛
李娟玲
周鹏
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2021年第10期3306-3313,共8页
槟榔坏死环斑病毒(areca palm necrotic ringspot virus,ANRSV)是新发现的一种槟榔黄化病致病病毒。本研究利用马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)表达载体pgR107,在烟草中表达ANRSV的外壳蛋白(coat protein,CP),旨在分离纯化该蛋白并开...
槟榔坏死环斑病毒(areca palm necrotic ringspot virus,ANRSV)是新发现的一种槟榔黄化病致病病毒。本研究利用马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)表达载体pgR107,在烟草中表达ANRSV的外壳蛋白(coat protein,CP),旨在分离纯化该蛋白并开展对病毒蛋白的功能研究和利用该蛋白制备多克隆抗体。为方便纯化,将8肽Strep蛋白标签序列融合到ANRSV-CP编码基因的3’端,利用In-Fusion无缝克隆策略将其克隆到PVX载体,构建重组表达质粒PVX-ANRSV-CP-Strep。采用电转化法将质粒PVX-ANRSV-CP-Strep转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟,14 d后对收集的16 g表达ANRSV-CP-Strep蛋白、PVX侵染的本生烟草样品进行了蛋白提取,采用SDS-PAGE和Western blot检测ANRSV-CP-Strep蛋白的表达情况。测序结果显示植物病毒表达载体PVX-ANRSV-CP-Strep构建成功。经Strep-Tactin■XT High Capacity亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示ANRSV-CP-Strep重组蛋白可通过PVX载体在烟草中有效表达,其表达量为22μg/g(鲜叶质量)。本研究为后续利用该蛋白制备多克隆抗体并建立ELISA方法进行病毒检测提供了理论依据。
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关键词
槟榔坏死环斑病毒(
areca
palm
necrotic
ringspot
virus
)
真核表达
载体构建
蛋白纯化
原文传递
题名
PVX介导的槟榔坏死环斑病毒CP蛋白在烟草中的表达和纯化
被引量:
2
1
作者
孙迪
沈文涛
庹德财
唐庆华
言普
黎小瑛
李娟玲
周鹏
机构
海南大学园艺学院
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
中国热带农业科学院椰子研究所
出处
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2021年第10期3306-3313,共8页
基金
海南省重大科技计划项目(ZDKJ201817-1-1-1)资助。
文摘
槟榔坏死环斑病毒(areca palm necrotic ringspot virus,ANRSV)是新发现的一种槟榔黄化病致病病毒。本研究利用马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)表达载体pgR107,在烟草中表达ANRSV的外壳蛋白(coat protein,CP),旨在分离纯化该蛋白并开展对病毒蛋白的功能研究和利用该蛋白制备多克隆抗体。为方便纯化,将8肽Strep蛋白标签序列融合到ANRSV-CP编码基因的3’端,利用In-Fusion无缝克隆策略将其克隆到PVX载体,构建重组表达质粒PVX-ANRSV-CP-Strep。采用电转化法将质粒PVX-ANRSV-CP-Strep转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟,14 d后对收集的16 g表达ANRSV-CP-Strep蛋白、PVX侵染的本生烟草样品进行了蛋白提取,采用SDS-PAGE和Western blot检测ANRSV-CP-Strep蛋白的表达情况。测序结果显示植物病毒表达载体PVX-ANRSV-CP-Strep构建成功。经Strep-Tactin■XT High Capacity亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示ANRSV-CP-Strep重组蛋白可通过PVX载体在烟草中有效表达,其表达量为22μg/g(鲜叶质量)。本研究为后续利用该蛋白制备多克隆抗体并建立ELISA方法进行病毒检测提供了理论依据。
关键词
槟榔坏死环斑病毒(
areca
palm
necrotic
ringspot
virus
)
真核表达
载体构建
蛋白纯化
Keywords
ANRSV
Prokaryotic expression
Vector construction
Protein purification
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PVX介导的槟榔坏死环斑病毒CP蛋白在烟草中的表达和纯化
孙迪
沈文涛
庹德财
唐庆华
言普
黎小瑛
李娟玲
周鹏
《分子植物育种》
CAS
北大核心
2021
2
原文传递
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参考文献
引证文献
统计分析
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