方斑东风螺人工养殖、环境生理和营养需求研究进展

方斑东风螺作为新兴的养殖品种,其养殖技术、疾病防控、环境生理和营养需求研究尚不完善。本文综述了方斑东风螺在人工育苗、病害防控、营养需求等几个方面的研究进展,对方斑东风螺现阶段的研究进行讨论并展望,以期为方斑东风螺人工养殖和饲料营养需求的深入研究提供参考。

陶粒材质和粒径对方斑东风螺存活、生长和底质微生物群落的影响

为了探索方斑东风螺(Babylonia areolata)室外水泥池养殖适宜的底质,采用海砂(SS)、细陶粒(FC)、粗陶粒(CC)和海砂+粗陶粒混合(SS+CC)4种底质进行对比试验,分析了不同陶粒材质和粒径大小对体质量为(4.692±1.033)g的方斑东风螺存活与生长、养殖水质及底质微生物群落的影响。结果表明:4种底质条件下方斑东风螺的存活率均大于90%且无显著性差异(P>0.05);FC组体质量特定生长率最高,为(1.3864±0.2196)%/d,显著高于CC、SS、SS+CC组(P<0.05);不同底质的微生物群落结构组成不同,SS组的微生物群落丰富度和多样性最低,FC组的丰富度和多样性均较高;FC组底质微生物中变形菌门(Proteobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和酸杆菌门(Acidobacteriota)相对丰度较高;FC、SS+CC组中弧菌(Vibrio)相对丰度较低,微小杆菌(Exiguobacterium)和盐单胞菌(Halomonas)相对丰度较高,表明细陶粒对抵抗病原弧菌、防止水质恶化具有积极作用;微生物功能预测显示,FC组中微生物不同物质代谢相关通路的相对丰度增加;水质分析显示,24 h内CC和FC组的NH_(4)^(+)-N质量浓度均显著低于SS、SS+CC组(P<0.05),FC组NO_(2)^(-)-N质量浓度显著低于CC组(P<0.05)。研究表明,底质材质对方斑东风螺生长和底质微生物群落结构组成有显著影响,选用细陶粒作为方斑东风螺室外养殖池底质材料,能促进其体质量增长,抑制病原微生物生长,并对养殖池水质具有一定的净化作用。

水泥池养殖方斑东风螺Babylonia areolata的生长特性

对室外水泥池养殖方斑东风螺的生长特性进行了研究。对1龄内不同生长发育阶段的1400余个方斑东风螺的壳高、体重生长参数进行测量和分析,结果表明:(1)水泥池养殖方斑东风螺壳高和体重呈幂函数关系,W=0.2349H^(2.89)(R^2=0.9822,P<0.01);(2)1龄内养殖方斑东风螺的壳高生长曲线和体重生长速度曲线呈现出不断升高趋势,壳高日均增长和体重日均增重为0.11 mm·d^(-1)和0.03 g·d^(-1);壳高特定增长率 IGR_H 和体重特定增重率 IGR_W 平均为0.69%和1.96%;养殖方斑东风螺在1龄以内为快速生长期,远没有达到生长的拐点;同时,方斑东风螺的生长明显受水温影响,当水温降到20.2℃时,其日均增长和日均增重降到最低,分别为0.09 mm·d^(-1)和0.01 g·d^(-1);特定增长率和特定增重率分别降到0.42%和0.64%。

鸢乌贼(Sthenoteuthis oualaniensis)减菌处理及其对方斑东风螺(Babylonia areolata)摄食率影响的研究

为了探讨不同灭菌方法对鸢乌贼(Sthenoteuthis oualaniensis)减菌处理效果及其对方斑东风螺(Babylonia areolata)摄食率的影响,本研究通过H_(2)O_(2)溶液处理、酒精处理、臭氧处理及紫外线处理等4种灭菌方法对鸢乌贼进行减菌处理,并将预处理后的鸢乌贼作为食物投喂体质量为(0.53±0.14)g的方斑东风螺稚螺5 d。结果显示,不同灭菌方法处理后的样品,其异养细菌和大肠埃希氏菌(Escherichia coli)数量显著减少(P<0.05);通过H_(2)O_(2)溶液和酒精处理后的鸢乌贼对方斑东风螺摄食率的影响显著低于对照组(P<0.05),而经过紫外线处理和臭氧处理后,其摄食率与对照组差异不显著(P>0.05)。综上,在实际生产作业中,使用臭氧处理方法对鸢乌贼进行20 min减菌化处理为最优方案,不仅可以除去鸢乌贼中大量有害细菌,而且不会影响方斑东风螺的摄食率。

鸢乌贼为蛋白源的方斑东风螺人工配合饲料养殖研究

【目的】鸢乌贼是丰富且极具开发潜力的软体动物资源,探究鸢乌贼作为方斑东风螺人工配合饲料蛋白源的可行性。【方法】设计7种鸢乌贼质量分数(33.1%、43.1%、53.1%、63.1%、73.1%、83.1%、100%)的方斑东风螺人工配合饲料,以杂鱼为对照,投喂初始体质量为0.37(±0.03)g的方斑东风螺,养殖试验期90d,以日均增重、日增长率、饲料系数、成活率和单位面积产量为指标,对养殖效果进行评价。【结果】以63.1%鸢乌贼处理的方斑东风螺日均增重0.034g、日增长率9.31%,显著高于对照处理的0.029 g和7.96%;该处理的饲料系数为1.33,显著低于对照处理的2.27;该处理的单位面积产量为3168.6 g/m^(2),高于对照处理(2856.8 g/m^(2)),但差异不显著;其他试验处理的日均增重和日增长率低于或显著低于对照处理。添加鸢乌贼处理的方斑东风螺成活率均低于对照处理,其中添加63.1%以上鸢乌贼的处理与对照处理无显著差异。【结论】该方斑东风螺人工配合饲料的使用无需清除残饵残渣,可减少养殖工作量;且可降低对杂鱼的依赖,保护近海渔业资源。从日均增重、日增长率及饲料系数来看,方斑东风螺人工配合饲料中添加鸢乌贼具有可行性,添加的质量分数参考值为63.1%。以鸢乌贼作为主要蛋白源,将成为方斑东风螺饲料发展的重要方向。

芽孢杆菌对方斑东风螺生长、存活、免疫及消化酶活性的影响

为探究芽孢杆菌(Bacillus)是否可替代抗生素在方斑东风螺(Babylonia areolata)养殖中的应用,在方斑东风螺早期面盘幼虫到稚螺生长发育过程中,使用芽孢杆菌[凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)]和抗生素(磺胺甲恶唑)进行人工调控,研究其对方斑东风螺生长、存活、免疫及消化相关酶活性的影响。结果显示,芽孢杆菌和磺胺甲恶唑均促进了方斑东风螺各性状指标的生长,两者之间差异不显著(P>0.05);芽孢杆菌组成活率在后期面盘幼虫阶段之后均显著高于对照组和磺胺甲恶唑组(P<0.05);芽孢杆菌能够提高机体碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂肪酶(LPS)和淀粉酶(AMS)活性,丙二醛(MDA)水平和总抗氧化能力(T-AOC),并且高于对照组和磺胺甲恶唑组。结果表明,在对方斑东风螺进行苗种繁育时适当使用芽孢杆菌(凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌)可以提高机体免疫力和抗病性,在一定程度上提高消化酶活性、促进幼体生长和提高成活率,且效果优于磺胺甲恶唑。

光因子对方斑东风螺胚胎和幼虫发育的影响

为研究光因子对方斑东风螺胚胎受精孵化过程的影响,实验采用析因实验设计法研究了光照强度、光质和光周期等不同光条件对方斑东风螺胚胎发育过程中受精率(FR)、孵化率(HR)和变态率(MR)的影响,通过回归模型,优化光条件,找到利于胚胎发育的最佳光质、光强和光周期。结果显示,不同光质条件下,光照强度和光周期一次效应、交互效应和二次效应均呈显著水平,三者存在互作效应。在绿光条件下,光照强度为13.70μmol/(m^(2)·s),光照时间为15.54 h时,其FR、HR和MR达到最优值,其值分别为91.36%、88.64%和92.02%,优化后绿光促进东风螺胚胎发育效果最为明显,其次是红光和白光。在蓝光条件下,其光照强度和光周期任意组合水平下FR、HR和MR与其他光质比较均较低,且随着光照强度增加和光照时间延长,三项指标值下降越明显,因而表明蓝光对胚胎发育起到抑制作用。实验表明,合适的光照强度和光周期能与光质协同作用,可以提高方斑东风螺育苗效率和苗种品质。

高产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及其在方斑东风螺养殖中的应用

方斑东风螺是我国及东南亚地区重要的海水养殖品种,由于养殖底质污染,导致方斑东风螺病害频发。文章从健康方斑东风螺养殖池底沙中筛选蛋白酶高产菌株,基于形态、生理生化和分子特征对高产蛋白酶菌株进行鉴定,通过菌株溶血性检测和药敏试验初步评价其安全性,在单因素试验的基础上通过正交试验对其发酵培养基碳源、氮源及金属盐进行优化,并在室内养殖条件下考察了其对方斑东风螺养殖水体(氨氮、亚硝酸盐氮、化学需氧量)、底沙(总氮、有机碳)以及方斑东风螺生长(存活率、特定生长率)的影响。结果表明:从健康方斑东风螺养殖池底沙分离得到一株高产蛋白酶芽孢菌,其蛋白酶活性为324.0U·mL^(-1),命名为YZS02,经鉴定菌株YZS02为越南蔷薇菌(Rossellomorea vietnamensis),该菌株没有溶血活性,对24种抗生素敏感,其最优发酵培养基为酵母粉15g·L^(-1)、可溶性淀粉20g·L^(-1)、MgCl28g·L^(-1)、NaCl 30g·L^(-1),用此优化培养基在30℃,200r·min-1条件下摇瓶发酵24h,菌体密度可达到7.19×10^(9)个·毫升^(-1),该密度是优化前的2.89倍,同时优化后蛋白酶活性可达753.3U·mL^(-1),为原来的2.3倍。YZS02能够有效降低方斑东风螺养殖水体氨氮和化学需氧量水平,对底沙中的总氮也有很好的去除效果,试验结束时对照组水体氨氮浓度为2.33mg·L^(-1)、化学需氧量为278.37mg·L^(-1)、底沙总氮含量为538.31μg·g-1,而试验组水体氨氮浓度为0.78 mg·L^(-1)、化学需氧量为128.47mg·L^(-1)、底沙总氮含量为128.71μg·g-1。YZS02还能有效提高方斑东风螺的存活率及特定生长率。

不同底质环境对方斑东风螺稚螺生长、壳色及抗氧化性能的影响

为优化方斑东风螺(Babylonia areolata)健康养殖技术,比较分析了方斑东风螺稚螺在5种底质环境下(河砂、棕色陶粒、黑色陶粒、黄色陶粒、白色陶粒)的生长、壳色及抗氧化性能差异。结果表明,河砂组中底质氨氮(NH_(4)^(+)-N)质量浓度为(0.382±0.010)mg·L^(−1),显著高于其他实验组(P<0.05);棕色陶粒组的成活率最高[(62.00±2.00)%],显著高于河砂[(56.00±1.00)%]、黄色陶粒[(48.00±2.00)%]和白色陶粒[(42.50±3.00)%]组(P<0.05);河砂组和棕色陶粒组的壳高、壳宽、体质量显著高于黑色、黄色、白色陶粒组(P<0.05)。实验结束时,棕色陶粒组的壳色更艳丽,其壳色的明度值(L^(*))、红度值(a^(*))、黄度值(b^(*))皆显著高于其他实验组(P<0.05)。棕色陶粒组总抗氧化能力显著高于其他实验组,而过氧化氢酶活性和丙二醛质量摩尔浓度分别为(12.614±0.378)U·mg^(−1)和(1.179±0.001)nmol·mg^(−1),均低于其他实验组。综上所述,底质环境会显著影响方斑东风螺稚螺的生长、壳色和抗氧化性能,其中棕色陶粒较适合方斑东风螺稚螺的养殖,在生产中可以选用棕色陶粒替代河砂作为底质。

基于转录组测序方斑东风螺LPS刺激的免疫机制研究

[目的]进一步挖掘方斑东风螺(Babylonia areolata)免疫系统中参与响应脂多糖刺激的重要功能基因与通路。[方法]采用Illumina HiSeqTM 2000高通量测序平台对不同处理条件的方斑东风螺进行测序分析。所得的原始数据经质控、组装后分别比对到KOG、Nr、Swiss-Prot和KEGG数据库进行功能注释,筛选差异表达基因并进行聚类分析。[结果]GO功能注释结果显示,多数unigenes被注释到代谢过程(metabolic process)、催化活性(catalytic activity)和细胞过程(cellular process)。KEGG注释结果显示,多数差异表达基因集中于代谢通路(Metabolic pathways)(28.3%)、次生代谢物的生物合成(Biosynthesis of secondary metabolites)(8.69%)、核糖体(Ribosome)(7.47%)和内吞作用(Endocytosis)(5.84%)。对比对照组,试验组中LPS刺激后4 h组具有9096个差异表达基因,8 h组具有10335个差异表达基因,而4 h组和8 h组间则存在8756个差异表达基因,通过KEGG数据库对DEGs进行注释和功能富集,关注到的显著通路包括NOD样受体信号通路、趋化因子信号通路等。[结论]暗示脂多糖调节方斑东风螺的抗病能力通过许多通路,是一个复杂的过程,可为进一步研究方斑东风螺的免疫响应机制研究提供理论数据。

杉李盖痂锈菌锈孢子阶段的寄主种类调查

2017至2020年,在甘肃省插岗梁省级自然保护区云杉人工林和苗圃,采集不同云杉树种的球果,分别在显微镜和扫描电镜下观察锈孢子器、锈孢子及其包被的形态特征,对病原进行初步鉴定,同时调查9种云杉上球果锈病发病率。结果表明:在插岗梁省级自然保护区内5种常见云杉中,大果青杄Picea neoveitchii球果鳞片上未发现锈孢子器;沙滩苗圃13种云杉中,只有4种结果,东方云杉P. orientalis和黑云杉P. mariana球果鳞片上未发现锈孢子器,丽江云杉P. likiangensis和西藏云杉P. spinulosa感病;通过形态特征比对,初步确定6种云杉上球果锈病的病原均为杉李盖痂锈菌Thekopsora areolata。

方斑东风螺肿吻症病原菌的分离鉴定及药敏分析

从海南省文昌县某养殖场患病方斑东风螺（Babylonia areolata）的吻、肌肉和肝脏中分离到2株优势菌。人工感染证实其中1株为致病菌，经形态学检测和生化鉴定，该病原菌为鳗弧菌生物变种Ⅰ（Vibrio anguillarum Biovar Ⅰ）。该病原菌对方斑东风螺的LD50值为1．7×10^6cfu／g。药敏试验表明派拉西林、罗红霉素、红霉素、洁霉素、氟哌酸、先锋必、妥布霉素、菌必治、复方新诺明、利福平、复达欣、呋喃妥因等12种抗生素类药物对该病原菌敏感。

盐度对方斑东风螺耗氧率和排氨率的影响

采用实验生态学方法研究盐度对方斑东风螺Babylonia areolata耗氧率和排氨率的影响。根据方斑东风螺个体大小设立A、B、C(壳高分别为6.86±0.24、4.75±0.37、3.15±0.12cm,软体部干重分别为11.064±0.361、4.245±0.690、2.015±0.122 g)3组,盐度设13、18、23、28、33等5个梯度,实验水温为27—28℃。结果表明:(1)盐度、个体大小对方斑东风螺的耗氧率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的耗氧率都随盐度的升高而增加;当盐度升至33时,耗氧率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重耗氧率(O)之间的关系符合幂函数方程O=aWb,其中a值的范围为1.365 5—3.072 2,平均值是2.236 8,b值的范围为-0.195 2—-0.093 6,平均值为-0.130 6。(2)盐度、个体大小以及二者的交互作用均对方斑东风螺的排氨率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的排氨率随着盐度的升高而增加;当盐度升至33时,排氨率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重排氨率(N)之间的关系也符合幂函数方程N=c Wd,其中c值的范围为261.769 4—360.427 9,平均值为320.643 4,d值的范围是-0.325 3—-0.189 0,平均值是-0.248 5。(3)单位体重耗氧率和排氨率与盐度(S)、软体部干重(W)的二元线性回归方程分别为:O=1.208-0.039W+0.039S(R=0.578,F=10.517,显著性概率=0.000)、N=-210.442-9.255W+2.965S(R=0.813,F=40.834,显著性概率=0.000)。

方斑东风螺早期发育过程中几种消化酶的活性

将方斑东风螺Babylonia areolata(Link)的早期发育从早期面盘幼体到变态后15d的稚贝分成6个阶段,分别测定各阶段蛋白酶(P)、脂肪酶(L)、淀粉酶(A)和纤维素酶(C)活性。研究结果表明,随着幼体发育的推进,蛋白酶比活力逐渐减小,脂肪酶比活力逐渐增加,淀粉酶和纤维素酶比活力则在变态前逐渐增加,而变态后逐渐减小。比较A/P和(A+C)/(P+L)两种指标指示方斑东风螺幼体发育过程中的食性变化,提出(A+C)/(P+L)用于指示方斑东风螺食性变化更合理、准确。综合比较幼体发育各阶段4种消化酶活性,发现在面盘幼体向稚贝变态期间,幼体消化能力最弱,原因与幼体的变态过程有关。实验结果也验证了贝类具有分泌纤维素酶的能力,该酶在东风螺对纤维素分解中占主导地位。

氨氮胁迫对方斑东风螺六种免疫酶活性的影响

本文研究了氨氮对方斑东风螺(Babylonia areolata)的急性毒性及不同浓度的氨氮溶液(22、47.5、102和220mg/L)对其体内六种免疫酶过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化物酶(POD)活性的影响。实验结果表明:氨氮浓度越大,其毒性作用越强,方斑东风螺死亡率越高;500mg/L氨氮处理组于24h便出现(20.3±2.1)%死亡率,并且96h后存活率降为0。而相同条件下,随试验时间的延长,方斑东风螺死亡率也越高。氨氮浓度和处理时间均对方斑东风螺免疫酶活力有显著的影响(P<0.05)。与对照组相比,处理组CAT和AKP活性均表现出“诱导-抑制”的趋势,ACP和T-SOD活性表现出“抑制-诱导”的趋势,CSH-PX活性呈现“诱导-抑制-诱导”的趋势,而氨氮对处理个体POD活性的影响整体表现为抑制作用。可见,养殖水体中的氨氮会对方斑东风螺免疫酶活性产生较大的影响。本研究从生态现象和生理指标相结合的方式阐述了氨氮对方斑东风螺个体的致毒特性,将对方斑东风螺的养殖具有实用意义,同时丰富了氨氮对贝类毒理实验免疫性能层面的基础数据,并为其他贝类氨氮胁迫实验提供参考。

饥饿对方斑东风螺幼螺生化组成和消化酶活力的影响

通过室内试验测定方斑东风螺Babylonia areolata在饥饿120d过程中体内生化组成、能值及消化系统主要消化酶活力的连续变化。结果表明,随着饥饿时间延长,螺体的水分与灰分含量逐渐上升,而蛋白质、脂肪及糖原含量和能值均呈下降趋势。胃、肠道与肝胰脏中脂肪酶总活力在饥饿10d时较对照组略有上升,随后呈下降趋势;淀粉酶总活力和蛋白酶总活力均随饥饿时间延长而降低。饥饿70d时,脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶分别降为对照的70.12%、63.66%、42.79%,脂肪酶与淀粉酶总活力在70—90d时迅速下降;各酶活力在90—120d均降至较低的水平。结果进一步显示,幼螺在饥饿前期主要消耗脂肪与糖原供能,70d后加大对贮备蛋白质的动用量,而后期(90—120d)则以利用蛋白质为主;各消化酶活性在饥饿90d前快速下降,之后呈恒定状态。饥饿时螺体含水量可作为预测其营养状态的指标。

方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺(Babylonia areolata)"急性死亡症"进行了病原分离纯化、人工感染试验,以及病原16S rDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌(Vibrio harveyi);药敏试验结果显示,该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感,而对青霉素表现为耐药;组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。

方斑东风螺对饲料蛋白质需要量的研究

以白鱼粉和酪蛋白为蛋白源设计了8个不同蛋白质水平的饲料，在水温26．90±1．52℃，盐度27．6±0．5及遮光的条件下对初始个体体质量为2．16±0．05g的方斑东风螺（Babylonia areolata Link）进行为期60d的生长实验．统计分析结果表明：饲料中蛋白含量对方斑东风螺的相对增质量率呈抛物线回归关系，在饲料蛋白含量为43．10％时，相对增质量率达到最大值（p〈0．05）．饲料效率、饲料系数在蛋白含量35．17％以上基本上无显著差异（p〉0．05），蛋白质效率随着饲料中蛋白质含量的增加而降低，各蛋白组间的成活率没有显著差异（p〉0．05）．以相对增质量率为指标，采用回归分析法确定方斑东风螺饲料蛋白质适宜含量为36．47％～43．10％．

温度与盐度对方斑东风螺胚胎发育及幼虫生长的影响

在水温14～33℃(盐度34)、盐度18～40(水温25.5～26℃)范围内各设12个梯度,采用突变法进行温、盐度对方斑东风螺[Babylonia areolata(Link)]卵囊孵化及幼虫生长实验.结果显示:(1)方斑东风螺胚胎发育适宜水温为23～31℃,最适水温为25～30℃;适宜盐度为28～38,最适盐度为30～38.在适宜水温和盐度范围内,孵化速度随水温和盐度升高而加快,但以水温的影响效应最明显;温度或盐度超过其适宜范围时,孵化率明显下降或幼虫畸形率明显增大.(2)幼虫适宜水温及最适水温与胚胎发育的基本一致;适宜盐度和最适盐度存在向高盐度延伸的现象,其适宜和最适盐度下限分别为30和32.温盐度超过适宜范围时,死亡率明显增大,生长受到抑制.

不同pH和盐度下氨氮对方斑东风螺的毒性研究

在不同海水盐度和pH的条件下进行了氨氮对日龄30 d的方斑东风螺(Babylonia areolata)的急性毒性试验.结果表明:海水盐度和pH对氨氮的毒性有较大的影响,水温为29～30 ℃条件下,当盐度为18、23、28时,氨氮对方斑东风螺的安全浓度分别为9.39、10.40、11.97 mg/L,盐度越低氨氮毒性越强;当pH为6.5、7.5、8.5时,氨氮对方斑东风螺的安全浓度分别为18.500、14.080、10.200 mg/L,pH值越高氨氮毒性越强.