基于Open Array技术的妊娠期阴道菌群检测研究

目的探讨Open Array平台技术用于孕期阴道菌群分析及筛查感染病原菌检测的临床效率。方法选择2017年11月至2018年5月在北京协和医院产检的孕妇中纳入200例。采集其阴拭子标本,分别应用传统培养法和Open Array平台技术进行检测。结果对于阴道真菌和细菌的检测,传统培养法和Open Array平台技术的检测阳性率分别为19.0%(38/200)和20.0%(40/200),差异无统计学意义(P=0.800)。传统培养法和Open Array平台技术检测细菌的总相符率为94.5%,真菌相符率为97.1%。此外,Open Array平台技术可另检出细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)34例(17.0%)。本研究中单纯BV阳性病例中,胎膜早破比例(26.1%)较BV阴性且无其他感染的病例中发生率(17.6%)稍高,但尚不具有显著性差异(P=0.053),需进一步的大样本量研究。结论Open Array平台技术可以作为筛查妊娠期阴道菌群及病原体的快速检测技术,与传统培养的检出率相当,符合度较高,在临床需要快速检测进行针对性处理及用药指导时具有可信性。

核型分析联合其他遗传学检测技术在高龄孕妇产前诊断中的应用

目的探讨核型分析联合单核苷酸多态性微阵列技术(single nucleotide polymorphism array,SNP array)或荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)或细菌人工染色体微珠标记技术(BACs on Beads,BoBs)在高龄孕妇产前诊断中的应用价值。方法回顾性研究因高龄行产前诊断的930例孕妇,全部行核型分析,联合BoBs检测420例,联合SNP array检测343例,联合FISH检测167例,分析其染色体结果及妊娠结局。结果930例胎儿中,核型异常192例(20.7%),三体综合征中以21-三体居多,性染色体异常中以克氏征居多。在核型联合其他检测中,联合SNP array检测可显著提高胎儿染色体异常检出率,差异有统计学意义(χ^(2)=6.191,P=0.013)。对于染色体嵌合体的诊断,核型联合FISH检测可更精准地确定嵌合类型及比例。孤立性高龄胎儿染色体异常风险相对较低,高龄合并无创高危胎儿染色体异常率最高,在高龄合并超声软指标中,随超声软指标数目增多,染色体异常率随之升高(P=0.001)。高龄孕妇年龄与核型异常、非整倍体尤其21三体的发生率呈正相关(P<0.05)。结论孤立性高龄孕妇胎儿染色体异常风险相对较低,高龄合并无创高危胎儿染色体异常的风险高,随超声软指标数目增多、孕妇年龄增长胎儿染色体异常的风险增加,核型联合FISH检测可更精准地确定嵌合类型及比例,核型分析联合其他检测尤其与SNP array技术可显著提高染色体异常检出率,有利于遗传咨询及再生育指导,是高龄孕妇首选的产前诊断方案。

基于PCRarray技术探讨丹参酮Ⅱa对高脂血症大鼠肝脏脂蛋白及胆固醇信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的:采用PCR array技术初步探讨丹参酮Ⅱa对高脂血症大鼠肝脏脂蛋白及胆固醇信号通路相关基因mRNA表达的影响。方法:24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组、丹参酮组。高脂血症组、丹参酮组予高脂饲料喂饲12周后,丹参酮组予丹参酮Ⅱa磺酸钠腹腔注射12周。检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,观察肝脏形态变化及肝脏脂质沉积,PCR array检测大鼠肝脏脂蛋白及胆固醇信号通路相关基因mRNA表达。结果:高脂血症组TC、TG、LDL-C升高(P<0.01),HDL-C降低(P<0.01),肝细胞脂质沉积,胞浆内见脂肪空泡;丹参酮组肝脏脂滴减少。PCR array显示丹参酮组Abca1、Apoa1、Cyp7a1、Cyp11a1、Hmgcr、Insig2、Lcat、Ldlr、Lep、Pcsk9 mRNA发生差异性变化。结论:丹参酮Ⅱa可能通过调控脂蛋白及胆固醇信号通路改善高脂血症大鼠肝脏的变化,其可能机制为Abca1、Cyp7a1、Hmgcr、Insig2、Lcat、Ldlr、Lep、Pcsk9基因与SREBP之间的相互调控作用。

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因水平的影响

目的:应用cDNA array技术分析骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因水平的影响。方法:制作去卵巢大鼠模型,24周后,活杀动物,腹主动脉取血6 mL,并取出脊髓4锄,抽提totalRNA,分离mRNA,进行检测。结果:空白对照组血样与模型组的差异为70个基因,空白对照组与骨碎补总黄酮组的差异为9个基因。骨碎补总黄酮灌服后大鼠模型基因过度表达基本恢复正常。该实验cDNA array分析中脊髓基因基本无差异。结论:骨碎补总黄酮灌服6 个月后大鼠模型基因过度表达能基本恢复正常。表明骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因表达水平有一定的影响。

卵巢癌组织差异蛋白的筛选及信号通路的研究

目的:筛查卵巢癌组织中差异蛋白,探讨这些蛋白与卵巢癌发病之间的关系。方法:收集临床正常卵巢组织标本12例作为对照组,卵巢癌组织标本19例作为实验组,提取组织蛋白,采用Pathway Array技术,用37种磷酸化抗体、73种非磷酸化抗体分析卵巢癌和正常卵巢组织中蛋白表达的差异,利用QUANTITY ONE分析软件分析图片结果计算蛋白表达量,并对结果进行统计学分析。结果:共52种蛋白有表达(47%),其中23种(21%)蛋白表达差异显著(P<0.05)。与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织p-Stat3、p-PDK1、p-cdc2、p-p38、p-AKT、XIAP、PCNA、cdc2p34、p53、Cdk2、Mesothelin、E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);而ERK、Cdc25C、Wee1、Akt、N-cadherin、α-tubulin、Vimentin、cdc42、Bax、PTEN蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结合体外实验,与正常卵巢组织和正常卵巢细胞系比较,卵巢癌组织和卵巢癌细胞系中p-Stat3、p-PKD1和p-AKT表达水平明显升高(P<0.05)。结论:Stat3、PKD1和AKT作为重要信号传导分子参与了卵巢癌的发生、发展。

应用BACs-on-Beads等技术对一例Wolf-Hirschhorn综合征的产前诊断

目的应用BoBs(BACs-on-Beads)等多种技术对一例WHS(Wolf-Hirschhorn综合征)进行产前诊断,评价BACs-on-Beads技术在产前诊断中的应用价值和探讨Wolf-Hirschhorn综合征胎儿的遗传学特征。方法应用染色体G显带核型分析技术、BoBs技术和SNP array技术从多个水平对Wolf-Hirschhorn综合征胎儿断裂位点进行识别与定位。结果首先经由BoBs技术发现的这例Wolf-Hirschhorn综合征利用染色体G带核型分析和SNP array技术证实4号染色体4p16.3p15.31区段存在18.6Mb片段的缺失。结论 BACs-on-Beads技术应用于产前诊断有利于提升技术水平。

多重病原体核酸分子检测在儿童病毒性中枢神经系统感染的诊断效果评价

目的评价多重病原体核酸分子检测在儿童病毒性中枢神经系统感染诊治的临床意义。方法回顾性纳入176例2017年1月至2021年5月于上海儿童医学中心疑诊为中枢神经系统感染的患儿。使用Film Array脑膜炎/脑炎多重病原体核酸联检技术(FA-M/E)检测患儿的脑脊液样本,与患儿临床症状和脑脊液相关指标进行比较。结果FA-M/E病毒检测阳性样本共34例,阳性率为19.32%(34/176)。34份FA-M/E病毒阳性样本中,最常见的为肠道病毒(27例,79.41%)。在不同变量组合中,所有脑脊液指标变量组合检测的敏感度和阳性预测值均<90%。FA-M/E病毒阳性和阴性患儿使用抗病毒药物的中位时间分别为4.5(0,8.5)d和2.6(0,2.0)d,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论多重病原体分子检测技术能快速、敏感地检测病原体,提高临床诊断病毒性中枢神经系统感染的能力。