三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和脾淋巴细胞亚群增殖的影响

目的研究三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和淋巴细胞亚群的影响。方法将MRL/lpr狼疮鼠随机分为:ATO组、生理盐水(NS)组和环磷酰胺(CTX)组。另设正常C57/BL小鼠,随机分为ATO治疗组(0.4 mg/kg.d)和对照组(0.25 mL)。以上每组各6只,隔日腹腔注射,给药2个月后处死,称体重和脾脏重量算出脾脏指数;ELISA法测各组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平;流式细胞术测脾脏细胞亚群百分比。结果(1)MRL/lpr小鼠ATO治疗组脾脏指数、血清抗ds-DNA抗体水平和CD19+、CD3+、CD3+CD4+细胞百分比均低于NS对照组(P<0.01或P<0.05),NK细胞百分比明显高于NS对照组(P<0.05);(2)ATO治疗组小鼠的脾脏指数和CD3CD4双阳性细胞百分比显著低于CTX组(P<0.01),CTX治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平均较对照组明显降低(P<0.01),但ATO治疗组的抗体水平较CTX治疗组高(P<0.05);(3)在C57/BL小鼠中,ATO治疗组和NS治疗组之间以上指标均无差异。结论ATO抑制MRL/lpr狼疮鼠T、B淋巴细胞活化同时上调NK细胞功能,减少体内自身抗体产生;但是对正常小鼠的抗体水平和细胞亚群并无明显影响。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响

探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响。将发病早期和晚期的MRL/lpr狼疮鼠分别接受ATO、环磷酰胺(CTX)和生理盐水(NS)治疗2个月,然后用ELISA法测血清中IFN-γ、IL-4的浓度和抗ds-DNA抗体水平及四色流式细胞术测脾脏CD3+(T)细胞、CD3+CD4+(Th)细胞、CD3+CD4+IFN-γ+IL-4-(Th1)细胞和CD3+CD4+IL-4+IFN-γ-(Th2)细胞的百分率,从而研究ATO对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响。发现给药后,3、5月龄ATO组MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体水平明显下降(P<0.05),其血清IFN-γ和IL-4浓度、Th1、Th2和CD3+细胞百分率均低于相应月龄的NS组(P<0.05),且NS组中5月龄组Th1/Th2值较3月龄组显著升高(P=0.003),而在ATO组中差异无统计学意义(P=0.187)。因此,研究显示ATO能显著降低发病早期和发病晚期的MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体的水平,可抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IFN-γ和IL-4的血清水平和细胞诱生水平,并在一定程度上逆转发病晚期的MRL/lpr狼疮鼠的Th1偏移。

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响(英文)

目的研究三氧化二砷(As2O3)对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响。方法45只MRL/lpr狼疮小鼠ip给予环磷酰胺50 mg·kg-1(每周1次)和As2O30.8 mg·kg-1,每天1次,共2个月。用ELISA法检测血清抗双链DNA(dsDNA)抗体、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)浓度;用流式细胞术测定脾CD3+,CD19+,CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞亚群的百分比;用PAS染色法观察肾组织病理变化;用免疫荧光方法检测肾组织IgG和补体C3的表达。结果与给药前比较,给药2个月后,正常对照组血清抗dsDNA抗体水平升高,由给药前1.18±0.26升高至1.80±0.26(P<0.01),As2O3和环磷酰胺组该抗体水平明显降低,分别由给药前1.14±0.58和1.09±0.22降低至0.92±0.06和0.67±0.14(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较:①As2O3和环磷酰胺组血清抗ds-DNA抗体、IFN-γ和IL-12浓度明显降低(P<0.05),环磷酰胺组抗ds-DNA抗体比As2O3组显著降低(P<0.01);②As2O3组CD3+,CD3+CD4+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01),环磷酰胺组CD3+,CD3+CD8+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01);As2O3组CD3+CD4+细胞百分率明显降低(P<0.01);③As2O3和环磷酰胺组小鼠肾小球细胞计数和活动度积分明显降低(P<0.05,P<0.01),As2O3和环磷酰胺组无显著差异;④As2O3和环磷酰胺组肾IgG表达明显降低(P<0.05),补体C3表达无明显差异,As2O3和环磷酰胺组之间无显著性差异。结论As2O3能降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体水平,抑制T,B和Th细胞活化和增殖,降低血清IFN-γ和IL-12水平,从而缓解狼疮肾炎的病理变化。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响

目的:本文旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响及其作用机制。方法:将20周龄MRL/lpr狼疮鼠和正常C57BL/6J小鼠随机分组,分别接受ATO(0.4mg·kg^(-1)·d^(-1))和同体积生理盐水(NS)治疗2个月,分离脾脏淋巴细胞,然后用实时荧光定量PCR法检测T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的mRNA水平及T-bet/GATA3 mRNA的比值,Western blot法检测T-bet和GATA3的蛋白表达,ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的浓度。结果:(1)MRL/lpr狼疮鼠NS组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、Tbet/GATA3 mRNA比值均高于C57BL/6J小鼠NS组(P<0.05),而GATA3、IL-4的mRNA及其蛋白表达均低于C57BL/6J小鼠NS组(P<0.05);(2)在MRL/lpr狼疮鼠中,与NS组相比,ATO组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、T-bet/GATA3 mRNA比值均下降(P<0.05),而2组中GATA3、IL-4的mRNA及蛋白表达无明显差异;(3)在C57BL/6J小鼠中,NS组和ATO组之间以上指标均无显著性差异。结论:ATO可能通过影响MRL/lpr狼疮鼠Tbet/GATA3信号通路,降低T-bet表达,从而减少Th1型细胞因子IFN-γ的表达和分泌。

三氧化二砷对MRL-lpr鼠狼疮肾炎淋巴细胞凋亡的影响

目的利用动物模型进行体内实验，探讨三氧化二砷对MRL-lpr鼠狼疮肾炎淋巴细胞凋亡的影响。方法将14只MRL-lpr小鼠随机分为实验组和对照组。实验组给予隔日腹腔注射三氧化二砷，对照组给予生理盐水。55d后检测两组的尿蛋白、血尿素氮、抗双链DNA抗体（ELISA法）、肾脏免疫球蛋白G沉积（直接免疫荧光法）的变化及流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞凋亡情况。结果实验组尿蛋白、血尿素氮、抗双链DNA抗体水平、肾脏免疫球蛋白G沉积均低于对照组；实验组脾脏淋巴细胞凋亡率明显高于对照组。结论三氧化二砷能够减轻MRL-lpr鼠狼疮肾炎免疫损伤，该治疗作用可能与其诱导自身反应性淋巴细胞凋亡有关。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ基因表达的调控

目的:探讨三氧化二砷(ATO)调控MRL/lpr狼疮鼠干扰素γ(IFN-γ)基因表达的机制。方法:将20周龄MRL/lpr狼疮鼠和正常C57BL/6J小鼠无菌条件下取出脾脏,制成脾脏淋巴细胞悬液。体外经植物血球凝集素P(PHA-P,终浓度20 mg/L)和白细胞介素-2(IL-2,终浓度106IU/L)常规刺激48 h后,随机分为PBS组(空白对照)和ATO(1.0μmol/L)组,继续培养24 h。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组培养上清液IFN-γ的表达量,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组IFN-γmRNA的表达情况,应用基于半定量PCR和Q-PCR的染色质免疫共沉淀(ChIP)技术检测各组细胞IFN-γ启动子区乙酰化组蛋白H3、H4(acH3,acH4)及启动子区结合RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ)的水平。结果:(1)MRL/lpr狼疮鼠PBS组IFN-γ的分泌和IFN-γmRNA的表达均高于C57BL/6J小鼠PBS组(分别P<0.01和P<0.05),并且IFN-γ启动子区acH3、acH4的水平及启动子区域富集RNAPⅡ水平高于C57BL/6J小鼠PBS组(均P<0.01)。(2)在MRL/lpr狼疮鼠中,与PBS组相比,ATO组IFN-γ的分泌和IFN-γmRNA的表达下降(分别P<0.01,P<0.05),IFN-γ基因启动子区域acH3、acH4的水平及启动子区域富集RNAPⅡ水平也下降(均P<0.01)。(3)在C57BL/6J小鼠中,PBS组和ATO组之间以上指标均无差异。结论:ATO下调MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ的分泌和IFN-γmRNA的表达可能是通过降低基因启动子区域acH3、acH4的水平减弱了RNAPⅡ依赖的转录,而ATO对正常C57BL/6J小鼠无明显影响。

三氧化二砷及5-氮胞苷对狼疮鼠的免疫状态和基因甲基化的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)及5-氮胞苷(5-Aza)对MRL/lpr狼疮小鼠免疫状况和基因甲基化的影响。方法:12周龄MRL/lpr小鼠36只,随机分为3组分别给ATO、5-Aza与生理盐水(NS),疗程为60d。分别检测治疗前后抗dsDNA抗体,治疗后用高效液相方法检测脾脏、淋巴结、胸腺和血液DNA甲基化水平。结果:(1)治疗后ATO组血清抗dsDNA抗体明显低于NS组与5-Aza组(P<0.01);(2)治疗后ATO组脾脏及淋巴结重量较NS组与5-Aza组有明显减轻(P<0.05);(3)治疗后ATO组脾脏及淋巴结的甲基化水平较NS组有明显升高(P<0.05),而血液及胸腺甲基化水平两组间差异无统计学意义,治疗后5-Aza组脾脏、淋巴结及血液的甲基化水平较NS组明显下降(P<0.05)。结论:ATO能够降低小鼠外周血抗dsDNA抗体水平并抑制淋巴组织的增生,明显提高脾脏和淋巴结的基因甲基化水平。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响。方法MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组(0.4mg·kg-1·d-1,ip)、环磷酰胺(CTX)组(50mg·kg-1每周1次,ip)和生理盐水(NS)组(按体重取量,ip),给药2个月。取脾脏制成脾细胞悬液,加入佛波醇酯(PMA)和ionomycin活化,同时加monensin抑制蛋白转运,于37℃,5%CO2培养4h后,用四色流式细胞术测脾脏CD3+(T)细胞和CD3+CD4+(Th)细胞的百分率以及CD3+CD4+(Th)细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平;分离血清,用ELISA法测血清中抗ds-DNA抗体、IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的浓度。结果①给药后,ATO组小鼠血清的抗ds-DNA抗体水平较给药前明显下降(P<0.01),而NS对照组则明显升高(P<0.05)。②ATO组CD3+细胞和CD3+CD4+百分率均显著低于NS组(P<0.01);③ATO组的血清IFN-γ和IL-12浓度均低于NS组(前者P<0.01,后者P=0.018);④ATO组Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12表达均显著低于NS组(P<0.01)。结论三氧化二砷能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IFN-γ和IL-12的血清水平和Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平。

三氧化二砷对MRL／lpr狼疮小鼠肾脏病理和组织转化生长因子-β1核因子-κBp65异常表达的影响

目的研究MRL／lpr狼疮小鼠肾脏病理转化生长因了（TGF）-β1、核因子（NF）-κB p65的异常表达及三氧化二砷（ATO）的干预作用：方法将MRL／lpr狼疮鼠45只随机分为ATO组、环磷酰胺（CTX）组和对照组，观察各组MRL/lpr狼疮小鼠治疗前后尿蛋白（半定量）的变化；给药2个月后处死，经苏木素-伊红（HE）染色、PAS染色后观察肾组织病变程度；用免疫荧光方法检测肾组织IgG、C3的表达；用免疫组织化学方法检测肾组织TGF—β1、NF—κB p65的表达。结果①尿蛋白分析：给药后ATO组较对照组有明显减少（P=0．004）、CTX组较对照组也有减少（P=0．005）。②免疫荧光检测IgG、C3的表达：在对照组可见IgG沿肾小球系膜区，毛细血管袢弥漫沉积（＋～＋＋＋），而ATO组、CTX组则明显减少（-～＋），经统计发现ATO组、CTX组较对照组明显减少（P〈0．05）；C3的表达差异无统计学意义。③肾小球细胞数及肾组织活动积分在ATO组及CTX组中均较对照组明显减少（P〈0．05）。④免疫组织化学：TGF-β1、NF—κB p65在对照组肾小管上皮细胞可见明显表达，经ATO及CTX组表达明显减少，肾小球表达各组均不明显。结论TGF—β1、NF—κB p65主要表达在MRL／lpr狼疮小鼠肾小管上皮细胞，ATO通过下调TGF—β1、NF-κB p65的表达改善小管病变达到改善狼疮肾炎的进展。