Artemin、GFRα3在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌神经浸润转移的相关性

目的探讨artemin、GFRα3在胰腺癌中表达的意义及其与胰腺癌神经浸润转移的相关性。方法应用免疫组化链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法和RT-PCR检测胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织中artemin、GFRα3的表达,观察artemin、GFRα3的阳性表达率与胰腺癌神经浸润转移之间的相关性。结果胰腺癌组织中artemin和GFRα3阳性表达率分别为72.09%和67.44%,均显著高于癌旁组织中表达水平(18.19%,22.73%)。Artemin、GFRα3在有神经浸润的胰腺癌组织中阳性表达率均明显高于无神经浸润癌组织(χ2=11.11,11.78,P<0.01),胰腺癌组织artemin mRNA表达量(0.741±0.014)明显高于正常组织(0.101±0.031)(P<0.05),有神经浸润癌组织artemin mRNA表达量(0.843±0.012)明显高于无神经浸润癌组织(0.512±0.017)(P<0.05)。结论Artemin、GFRα3的表达在胰腺癌神经浸润转移过程中起着重要作用,可能为反应胰腺癌生物学行为的重要指标。

Artemin和基质金属蛋白酶2在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的通过检测artemin和基质金属酶2(MMP2)在食管鳞癌中的表达水平,探讨其与食管癌的生长、浸润及转移之间的关系。方法采用免疫组化的方法,对126例食管鳞癌患者手术切除的标本进行artemin和MMP2检测,并分析其临床病理意义。结果 Artemin与患者的TNM分期及淋巴结转移有密切的关系(P<0.05),与病变的分化程度、病变长度无明显的关系(P>0.05)。而且artemin与MMP2的表达呈正相关(r=0.551,P<0.01)。结论 Artemin的表达与食管癌的病理分期、淋巴结转移和病变的分化程度有密切的关系,artemin与MMP2表达呈正相关,可以作为临床评估食管癌进展和预后的指标。

胃癌组织中Artemin蛋白的表达

目的:评价Artemin蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法:应用免疫组化的方法检测122例胃癌组织和98例癌旁正常胃组织中Artemin蛋白的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系。结果:胃癌组织中Artemin蛋白阳性表达率(77.1%,94/122)高于癌旁正常胃组织(16.3%,16/98;χ2=80.154,P<0.001)。Artemin蛋白阳性表达率随着胃癌浸润程度的加深和TNM分期的增加而逐渐升高(P均<0.05);Artemin蛋白的表达与淋巴结转移有关(χ2=17.835,P<0.001),与胃癌的分化程度、患者的性别、年龄无关(P均>0.05)。结论:Artemin可能参与了胃癌的发生发展,且与侵袭转移密切相关。

Artemin对体外胰腺癌细胞增殖与侵袭影响的实验研究

目的:探讨Artemin对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响。方法:以0、10、100ng/ml Artemin处理胰腺癌PDAC细胞株24、48、72 h后,MTT法检测其对PDAC细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜(Matrigel)侵袭实验,观察胰腺癌对PDAC细胞侵袭的影响。结果:MTT实验结果表明,Artemin对PDAC-1细胞增殖有一定抑制作用,但随时间延长和药物浓度加大其抑制效应增强不显著。Artemin处理后PDAC-1细胞侵袭能力增加。结论:Artemin对胰腺癌的增殖影响不明显,但能增加癌细胞的侵袭性。

Artemin在食管癌中表达作用的研究

目的:探讨Artemin(ATRN)在食管癌中的表达及作用。方法:采用免疫组化和real-time PCR方法检测ATRN在食管癌组织126例、癌旁组织126例和正常组织21例中的表达水平;应用siRNA技术在食管癌TE11细胞系中研究ATRN表达及对肿瘤细胞的凋亡影响。结果:126例食管癌中ATRN的阳性表达率为73.81%(93/126),癌旁组织的阳性表达率为44.44%(56/126);21例正常食管组织中的ATRN阳性表达率为14.29%(3/21),正常食管组织与食管癌组织及癌旁组织比较差异均有统计学意义(χ2分别为32.89、23.15,均P<0.01);TE11-siRNA细胞系ATRN的mRNA和蛋白表达水平均低于TE11-CK细胞系中相应的表达水平。siRNA抑制食管癌细胞中ATRN的表达后,促进了TE11细胞的凋亡。结论:ATRN与食管癌的生物学行为有关。

Artemin调控肿瘤生长的研究进展

Artemin是胶质细胞源性神经营养因子(gilal cellline derived neurotrophic factor,CDNF)家族中的一个成员,同时也是转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族中的一个亚型。Artemin通过GDNF受体转导信号调控肿瘤的生长,Artemin参与了胰腺癌、食管癌等消化道肿瘤的发生、发展,并与胰腺癌的嗜神经侵袭密不可分。Artemin可以提高子宫内膜癌、乳腺癌等生殖系统肿瘤细胞的致癌性和侵袭力,降低癌细胞对化疗药物的敏感度。Artemin还在鳞状细胞肺癌和内分泌腺瘤等肿瘤的生长调控中发挥了重要作用,降低Artemin的表达水平可有效抑制肿瘤生长和转移。Artemin有望成为肿瘤诊疗的新靶点。

GDNF家族成员artemin在大鼠视网膜神经节细胞中的表达及其功能

目的观察胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)家族成员artemin在正常大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)中的分布、表达及其功能。方法体外培养出生1～3dSD乳鼠的视网膜神经上皮细胞,免疫荧光染色检测RGCs中artemin的定位及表达,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)对RGCs中artemin进行定量检测。并用40mmol/L葡萄糖处理细胞12h后,再进行上述检测,观察高糖对于RGCs中artemin表达的影响。结果免疫荧光的结果证实了培养的RGCs出现Thy1.1抗体阳性的红色荧光,且多重荧光标记显示RGCs同时存在显示绿色荧光的artemin抗体和红色荧光的Thy1.1抗体,表明artemin在RGCs中有分布。正常对照组中Thy1.1抗体阳性的细胞为(442±9)个/高倍视野,而40mmol/L高糖培养组中为(263±7)个/高倍视野,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR对大鼠RGCs中artemin的mRNA水平进行定量分析,40mmol/L葡萄糖处理视网膜神经细胞12h后,artemin在视网膜神经细胞及RGCs的表达明显下降(P<0.05)。结论研究发现在原代培养的大鼠视网膜神经细胞及RGCs中均有artemin的表达,并且在高糖作用下表达下降,为进一步研究artemin对受损RGCs的保护作用提供了思路。

Artemin和MMP-9在大肠癌中表达的关系

目的检测大肠癌ARTEMIN和基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白的表达,探讨其在不同临床病理特征中的意义。方法 86例大肠癌新鲜标本作为观察组,70例正常新鲜大肠黏膜组织作为对照组,采用流式细胞技术,检测两组中ARTEMIN和MMP-9表达的关系,观察二者表达在不同临床特征中的差别。结果大肠癌中ARTEMIN和MMP-9的表达量明显高于对照组,ARTEMIN和MMP-9的表达与大肠癌的分化程度、浸润深度、Dukes分期、PCNA表达及淋巴结转移密切相关。ARTEMIN和MMP-9在大肠癌中的表达呈正相关性。结论大肠癌中ARTEMIN和MMP-9高表达,二者可能具有协同作用,参与肿瘤的发生发展。

Artemin在大肠杆菌中的表达及寡聚体的电镜观察

通过定点突变生成的方法,分别构建了全长artemm cDNA和2个C末端缺失突变体Ar-C△19和Ar-C△35,以及2个单点替代突变体Ar-C22和Ar-C61,并在大肠杆菌BL21PRO中得到表达,重组蛋白的表达水平约占细胞总蛋白的2%～3%.电镜检测结果表明,重组artemin寡聚体呈规则的花环状,直径为18nm左右,大于铁蛋白重链的寡聚体(12 nm)和来自于休眠卵的artemin寡聚体(16 nm),2个C末端的缺失突变对artemin的寡聚化没有明显影响,而单点替代突变Ar-C22对寡聚化影响较小,Ar-C61则完全不能寡聚化,说明Cys61对于维持artemin的空间构象有着重要的作用.

基因组步行法扩增Artemin基因上游调控序列

为克隆artemin基因上游调控序列,探明该基因表达的调控机理,分别用4种不同的具有平末端的限制性内切酶消化卤虫基因组DNA,然后与DNA接头连接,构建成无载体连接的卤虫GenomeWalkerDNA文库.利用基因组步行法,经2轮TD-PCR扩增出长度约750bp的artemin基因上游调控序列片段,扩增产物测序后得到2个长度分别为209bp和210bp的序列.序列分析表明:在3′-末端片段中,存在转录起始位点"TTATTT",TATA框位于-32～-38,CAAT框则位于-75～-78.此外,在这两个片段中还存在一些潜在的TFIIB识别元件,GC盒,AT富含元件,这些元件对于该基因的转录具有一些潜在的调控作用.

Artemin在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的初步分析和探讨三阴性乳腺癌患者artemin表达情况,及其对疾病预后的价值。方法选取我院肿瘤科2005年7月至2009年7月收治的149例浸润性乳腺癌患者为研究对象,根据ER、PR和HER-2免疫组化检测结果,将其分成三阴性乳腺癌组和非三阴性乳腺癌组,采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测artemin在两组患者肿瘤组织中的表达情况,并分析artemin在不同组织学分级、临床分期和N分期三阴乳腺癌组患者中表达情况。结果三阴性乳腺癌组免疫组化artemin阳性表达率为79.22%(61/77),高于非三阴性乳腺癌组患者25.00%(18/72),差异有统计学意义(χ2=5.170,P=0.006);三阴性乳腺癌组artemin mRNA表达量为(3.36±0.04)×103copies/m L,非三阴性乳腺癌组患者为(2.52±0.06)×103copies/m L,两组差异有统计学意义(χ2=3.416,P=0.04);三阴性乳腺癌患者中artemin表达率与组织学分级、临床分期和N分期相关,差异具有统计学意义(P<0.05),而与就诊年龄、恶性肿瘤家族史、肿瘤长径以及绝经状态无关(P>0.05)。结论三阴性乳腺癌患者的artemin表达率显著高于非三阴性乳腺癌患者,artemin在三阴性乳腺癌组织中的表达与组织学分级、临床分期和N分期密切相关,临床检测artemin可以对患者疾病的发展和预后判断提供重要的依据。

人Artemin cDNA扩增及表达

以人胎脑RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增人Artemin cDNA。序列分析表明,扩增的人Artemin cDNA核苷酸序列与已发表序列(GenBank登录号:AF115765)同源性为99.7%,氨基酸序列同源性为100%。将经过序列分析确定的Artemin cDNA插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达载体pGEX-6p-1-hART。通过SDS-PAGE分析重组人Artemin融合蛋白在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,重组人Artemin融合蛋白表达量约占宿主菌总蛋白的18.32%,主要以包涵体形式存在。对表达的重组人Artemin融合蛋白包涵体进行溶解和复性,并进行Western blotting分析。说明体外成功扩增人Artemin cDNA,并在原核表达系统中高效表达了重组人Artemin融合蛋白。

PCR法克隆卤虫（Artemia franciscana） Artemin基因上游调控序列

利用限制性内切酶(Dra I和Hpa I)对卤虫(Artemia franciscana)基因组DNA进行酶切后，连上接头构建基因组“DNA文库”(即未克隆，带接头的DNA片段)，再以TD-PCR(Touch-down PCR)的方法扩增卤虫的Artemin．基因的上游调控序列，得到一段大为750bp的片段，将这一上游序列片段克隆到pMDl8-T载体中，以获得包括启动子、增强子等顺式作用元件在内的Artemin基因的上游调控序列，为进一步研究Artemin基因的表达模式及其功能提供依据。

Artemin CXCL13 MMP-9在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:研究Artemin、CXCL13和MMP-9在子宫内膜癌组、非典型增生组、单纯性增生组和正常内膜组,以及在不同临床病理特征内膜癌组织中的表达,分析其差异性表达与子宫内膜癌临床病理分期的关系。方法:选取承德医学院附属医院妇科2016年6月至2018年4月手术切除子宫内膜标本共154例,其中子宫内膜癌Ⅰ期56例(EC-Ⅰ组),Ⅱ期15例(EC-Ⅱ组),Ⅲ期7例(EC-Ⅲ组),非典型增生32例(EAH组),单纯性增生46例(ESH组),正常内膜组织44例(NE组)。Western Blot法检测Artemin、CXCL13和MMP-9蛋白在不同内膜组织中的表达,实时荧光定量PCR技术检测Artemin、CXCL13、MMP-9 mRNA在各组子宫内膜癌组织中的表达,分析其表达情况与子宫内膜癌临床病理特征的关系。结果:Artemin、CXCL13、MMP-9蛋白在EC组的表达量高于EAH、ESH和NE组(F=38.54,F=98.74,F=72.46,P均<0.05)。Artemin、CXCL13、MMP-9 mRNA在子宫内膜癌中的表达与肌层浸润深度、病理分化程度、FIGO分期及淋巴结转移相关(P均<0.05),与患者年龄不相关(P>0.05)。结论:Artemin、CXCL13、MMP-9在子宫内膜癌的发生发展中发挥作用,可为子宫内膜癌的早期诊断及预后判断提供新的研究方向。

蛋白Artemin在三阴性和非三阴性乳腺癌组织中的表达及其意义

目的研究蛋白Artemin在三阴性(triple-negative breast cancer,TNBC)和非三阴性(non-triplenegative breast cancer,non-TNBC)乳腺癌组织中的表达情况,进一步探索蛋白Artemin与乳腺癌临床病理及预后的关系,为临床判断其生物学行为及评估预后提供有力证据。方法回顾性分析2005年7月至2009年7月间河北医科大学附属沧州市中心医院收治的乳腺癌患者,根据入选标准,随机抽取三阴性及非三阴性乳腺癌各120例作为研究对象。运用统计学方法对所有数据进行t检验、χ2检验,生存分析采用寿命表法、Kaplan-Meier曲线,Cox比例风险模型进行检验。结果蛋白Artemin阳性率为61.7%(148/240),在TNBC中的阳性率为82.5%(99/120),明显高于non-TNBC中的阳性率41.0%(49/120);在TNBC组中蛋白Artemin阳性与阴性的患者1、3、5年生存率分别为93.0%、78.0%、50.0%vs.100.0%、89.0%、79.0%;non-TNBC组中蛋白Artemin阳性与阴性的患者1、3、5年生存率分别为98.0%、89.0%、89.0%vs.99.0%、97.0%、97.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蛋白Artemin在TNBC乳腺癌中的表达明显高于non-TNBC,生存率明显降低,是判断乳腺癌恶性程度的重要指标,值得推广研究。

Artemin在软骨肉瘤中的表达及其对内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨Artemin在软骨肉瘤中的表达水平及其对内皮细胞增殖与迁移的作用及其机制。方法:收集2015年5月至2019年4月南京中医药大学连云港附属医院手术切除的40例软骨肉瘤患者的肿瘤组织标本,分为低(Ⅰ级)、高级别(Ⅱ、Ⅲ级)软骨肉瘤各20例;对照组为20例因车祸等意外伤截肢患者的正常软骨组织标本。用免疫组化法检测肿瘤组织中Artemin、血管内皮生细胞长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Ki-67表达水平和CD31^+血管密度。用10 ng/ml的Artemin处理SW1353细胞后,用ELISA实验检测细胞培养上清中VEGF、基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)、基质金属蛋白酶2(matric metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9的含量变化,用Transwell迁移实验和MTT细胞增殖实验分别检测Artemin处理的软骨肉瘤细胞对ECV304细胞增殖和迁移的影响。结果:低级别组软骨肉瘤组织中Artemin和Ki-67表达水平均显著高于对照组(均P<0.01),高级别组软骨肉瘤组织中Artemin表达水平和Ki-67表达率显著高于低级别组(均P<0.01)。Artemin表达与软骨肉瘤组织中VEGF水平和血管密度呈正相关(均P<0.01);Artemin促进软骨肉瘤细胞分泌VEGF,而对SDF-1、MMP2和MMP9分泌无显著的影响;Artemin通过促进软骨肉瘤细胞分泌VEGF,诱导ECV304细胞增殖和迁移(均P<0.01)。结论:Artemin在软骨肉瘤组织中高表达且与VEGF水平和血管密度呈正相关,Artemin能够增强软骨肉瘤细胞诱导血管生成功能。

Artemin的研究进展

尽管肺癌外科治疗技术和多学科综合治疗等有了很大的进步,肺癌总的治愈率仍仅为10%-15%,而I期肺癌的5年生存率可达80%以上。其主要原因是缺乏有效的早期诊断手段和治疗肿瘤转移的有效方法。恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移是一个极其复杂的多阶段、多步骤的过程。

乳腺癌侵袭转移中Artemin作用的探讨

目的:探讨Artemin对乳腺癌侵袭转移的作用与意义。方法:采用免疫组织化学方法对乳腺癌组织切片进行Artemin表达分析。以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,通过si RNA技术降低内源性ARTN的水平获得siATRN-MDA231稳定克隆细胞,通过Western blot技术验证siATRN-MDA231稳定克隆细胞ARTN表达水平变化。通过划痕和趋化运动实验观察细胞迁移和定向运动能力的变化。通过粘附和侵袭实验观察siATRN-MDA231细胞粘附功能以及侵袭能力变化。结果:乳腺癌组织中Artemin表达水平与肿瘤大小无关,但与淋巴结转移关系密切。siATRN-MDA231细胞Artemin的蛋白表达量明显比对照组降低,通过划痕和趋化实验显示肿瘤细胞的运动能力显著降低。细胞的粘附功能和侵袭水平也有不同程度减低。结论:Artemin参与EGF诱导的乳腺癌细胞的运动和侵袭。

Artemin在恶性肿瘤转移中的研究进展

恶性肿瘤是危害人类健康的一大难题,转移是导致恶性肿瘤具有难治性和致死性的关键因素。Artemin(ARTN)是胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)配体家族(GDNF-family ligands,GFLs)中的一员,其信号转导主要通过与共受体GFRα3-RET结合,形成一个信号复合物调节细胞内信号转导,影响神经系统发育和细胞内稳态。近年来,多项研究表明Artemin在呼吸系统肿瘤、消化系统肿瘤等多种恶性肿瘤中具有促进肿瘤细胞侵袭和转移的作用,与肿瘤的复发转移及预后密切相关。

Artemin蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系

目的探讨Artemin蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法对90例胃癌患者的癌组织及30例胃癌患者的癌旁良性组织中的Artemin蛋白进行检测,统计学分析Artemin蛋白在胃癌组织中的表达,并探讨推测Artemin蛋白与胃癌患者的临床病理特征的关系。同时通过荧光定量RT-PCR法测定胃癌组织与癌旁组织中Artemin m RNA的表达差异。结果 Artemin蛋白在胃癌组织中阳性表达率为78.89%,明显高于癌旁良性组织的10.00%,差异具有统计学意义(P<0.05),且Artemin蛋白在胃癌组织中的表达与胃癌患者的肿瘤浸润程度、淋巴结转移及临床TNM分期有密切关系(P<0.05),而与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关(P>0.05);Artemin m RNA在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织7.01倍,推测Artemin参与了胃癌的发生或发展的过程。结论胃癌组织中的Artemin蛋白表达与肿瘤的侵袭转移有密切关系,可作为有效的检测指标来预测分析胃癌的发生、发展及侵袭过程,具体机制有待进一步研究。