白果内酯对IL-1β诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响

旨在探讨白果内酯对白介素1β(IL-1β)诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响。采用10 ng·mL^(-1)IL-1β诱导ATDC5软骨细胞构建体外炎症模型,随机分为对照组、IL-1β组、白果内酯组(低、中、高剂量)。利用EdU检测细胞新合成的DNA,并结合细胞核标记物(Hoechest)进行双重标记检测细胞增殖速度。使用膜Annexin-V/PI通过流式细胞仪分析ATDC5软骨细胞凋亡情况。通过mRFP-GFP-LC3双荧光系统的组合测量方法检测自噬流。蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组软骨细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、BAX、Caspase-3和Bcl2的蛋白和mRNA表达情况。结果显示,IL-1β诱导ATDC5软骨细胞后,细胞增殖减弱,下调自噬促进凋亡,而白果内酯干预能够过促进自噬和细胞增殖,抑制凋亡。白果内酯促进ATDC5软骨细胞的增殖(P<0.05),与IL-1β组相比,抑制了LC3-II、Beclin1、BAX和Caspase-3的蛋白和mRNA表达(P<0.05),促进Bcl2蛋白和mRNA表达(P<0.05),激活自噬并上调自噬流,凋亡率显著降低(P<0.05)。结果提示,白果内酯能够促进IL-1β诱导ATDC5软骨细胞的自噬并且抑制细胞凋亡,促进细胞增殖进而发挥保护软骨细胞作用。

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程软骨细胞凋亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建 3周的组织工程软骨进行透射电镜、流式细胞仪检测和3 H TdR掺入测定 ,与 3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨有 5 %左右的细胞凋亡 ,正常关节软骨未见明显的细胞凋亡 ;流式细胞仪显示软骨细胞有 8.5 %左右的亚二倍体细胞 ,正常关节软骨有 2 .4%左右的亚二倍体细胞。3 H TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养 3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。

胰岛素样生长因子-Ⅰ对软骨细胞凋亡的抑制

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对软骨细胞增殖及白细胞介素-1(IL-1)诱导软骨细胞凋亡的影响,揭示其抗损伤作用机制,为关节软骨损伤治疗提供理论依据。方法:分离培养人胚胎关节软骨细胞,采用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定不同含量软骨细胞增殖活性的变化,利用光镜、电镜、DNA电泳及流式细胞仪测定作为凋亡检测指标。结果:IGF-Ⅰ呈剂量依赖式促软骨细胞增殖,当IGF-Ⅰ含量达50μg/L时,促软骨细胞增殖作用达最大值。IL-1组光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳示特征性的DNA梯状条带,IGF-Ⅰ处理组未见明显凋亡征象。流式细胞仪检测发现,IGF-Ⅰ处理后软骨细胞凋亡率显著降低。结论:IGF-Ⅰ能促进软骨细胞增殖,对IL-1诱导的软骨细胞凋亡具有保护作用。

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及其抗凋亡机制

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺对佐剂性关节炎(AIA)大鼠关节软骨细胞增殖凋亡的影响及抗凋亡机制。方法弗氏完全佐剂诱导AIA大鼠模型,胰酶-胶原酶法分离培养关节软骨细胞,环巴胺体外给药处理AIA软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,DNA电泳、Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Shh、Gli1、Ptch1、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果环巴胺(0.08、0.4、2、10、50μmol/L)剂量依赖性地提高AIA软骨细胞增殖。AIA组可见凋亡细胞DNA梯状条带,环巴胺(0.4、2、10μmol/L)给药组的梯状条带明显减少;AIA组存在核碎裂与染色质固缩,环巴胺给药组均匀蓝色荧光的细胞数量增多;流式分析结果表明AIA软骨细胞凋亡率显著升高,环巴胺明显减少细胞凋亡率;与正常组相比,AIA组软骨细胞中Hh信号通路相关基因(Shh、Ptch1、Gli1)mRNA表达显著升高,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达显著下降,而促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA表达明显升高。环巴胺体外给药能抑制Hh信号通路过度活化,提高Bcl-2 mRNA表达,并降低Bax、Caspase-3 mRNA表达。结论环巴胺体外给药能促进AIA软骨细胞的增殖,并抑制AIA软骨细胞的过度凋亡;该抗凋亡作用和调节Bcl-2、Bax和Caspase-3表达密切相关,提示干预软骨细胞Hh信号通路对保护类风湿关节炎关节软骨具有潜在的治疗意义。

离心管技术构建的组织工程软骨细胞生物学特性的研究

目的 观察离心管技术构建的组织工程化软骨的细胞生物学特点 ,探讨该技术构建组织工程化软骨的可行性。方法 取 3周龄兔关节软骨的表层软骨 ,经酶消化获得大量的软骨细胞 ,用离心管技术构建软骨组织。对培养 3周的组织工程软骨进行组织学、免疫组织化学、透射电镜、3 H TdR掺入量等检查。结果 组织学显示软骨细胞位于陷窝 ,基质异染 ,Ⅱ型胶原免疫组化阳性 ,细胞内富含高尔基体 ,分泌囊泡和糖原颗粒 ,3 H TdR掺入显示软骨细胞DNA较正常软骨细胞明显增强。结论 离心管内软骨细胞的增殖较正常关节软骨增强。离心管技术可用于组织工程软骨的构建。

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺对体外培养的佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型(模型组),对照组足趾皮内注射等量生理盐水;观察继发侧足肿胀,28 d后,HE染色评价踝关节形态学变化;胰酶-胶原酶消化培养AA大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,CCK-8法检测环巴胺处理对AA大鼠软骨细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测环巴胺对AA大鼠软骨细胞凋亡影响,Western blot法检测AA大鼠软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)的表达情况。结果第12天,AA大鼠继发侧关节肿胀明显,HE染色表明AA大鼠踝关节破坏明显;Ⅱ型胶原和甲苯胺蓝染色证实成功培养AA大鼠软骨细胞;不同剂量的环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞增殖,抑制其凋亡,降低Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达。结论环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其机制与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号通路有关。

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞增殖和凋亡影响

目的观察川芎嗪对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞的增殖及凋亡的影响。方法兔原代软骨细胞培养及鉴定,用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,利用流式细胞仪检测各组软骨细胞的周期及凋亡率;利用MTT法检测软骨细胞的生长状态。结果与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞的凋亡率显著增加,差异具有显著统计学意义(P<0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率,有显著统计学意义(P<0.01);与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞被明显阻滞在G_1期(P<0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β对软骨细胞G_1期的阻滞作用,细胞增殖指数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞抑制凋亡并促进生长。

circDHRS3通过调节TLR4/NF-κB信号通路对关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circDHRS3通过调节TLR4/NF-κB信号通路对关节软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外分离培养人关节软骨细胞,用不同浓度(0、1、5、10μg·L^(-1))的IL-1β处理,采用qRT-PCR检测circDHRS3的表达。选取10μg·L^(-1)处理关节软骨细胞,将细胞分组,分别为Control组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-circDHRS3组、IL-1β+si-circDHRS3+pcDNA组和IL-1β+si-circDHRS3+TLR4组。CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Weatern blot检测p21、PCNA、Bcl-2、Bax和TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:经过不同浓度IL-1β处理关节软骨细胞后,circDHRS3在软骨细胞中高表达,呈浓度依赖性。与Control组相比,IL-1β组抑制细胞活力及PCNA、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡及p21、Bax、TLR4和p-NF-κB蛋白表达;与IL-1β+si-NC组相比,IL-1β+si-circDHRS3组促进细胞活力及PCNA、Bcl-2蛋白表达,抑制细胞凋亡及p21、Bax、TLR4和p-NF-κB蛋白表达;与IL-1β+si-circDHRS3+pcDNA组相比,IL-1β+si-circDHRS3+TLR4组抑制细胞活力及PCNA、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡及p21、Bax蛋白表达。结论:circDHRS3通过上调TLR4/NF-κB信号通路抑制关节软骨细胞的增殖和诱导细胞的凋亡。