Eremothecium ashbyii T_(30)发酵产脂肪酶特性的研究

研究了一株核黄素高产突变株E .ashbyiiT3 0 产脂肪酶的条件 ,确定了比较合适的脂肪酶发酵培养基 :豆饼粉 30g/L ,玉米浆 30ml/L ,豆油 5ml/L ,KH2 PO4 5g/L ,MgSO4 ·7H2 O 0 15g/L ,pH消前7 5。T3 0 在此培养基上振荡培养 2 8h ,既定条件下测脂肪酶活力可达 2 32酶活单位 /ml(较原株提高 36 5 % ) ,从一个侧面证实其突变株特性。另外 ,对T3 0 所产脂肪酶的诱导酶属性及脂肪酶在T3 0

Eremothecium ashbyii T_(30)菌株的细胞学特性研究

E .ashbyiiT3 0 是本研究室筛得的一株核黄素高产突变株 .对其细胞学特性的研究表明 ,其菌丝及孢子形态同原株相比没有明显变化 ,但同等条件下 ,其生长速度快于原株 ,菌落色泽也较原株深 ,而产孢子性能有所下降 .T3 0 在完全培养基平板上连续传代菌落形态会发生分离 ,不同形态的菌落核黄素产量有较大的差异 ,其中中等大小 ,边缘整齐 ,中间略凹 ,菌苔厚 ,颜色深黄 (2 8℃ ,CM ,72h)的菌落 ,核黄素发酵性能较优良 .

Eremothecium ashbyii T_(30)过量合成核黄素发酵工艺条件研究

以本室筛得的核黄素高产突变株E ashbyiiT30 为出发株 ,探讨了发酵工艺条件对核黄素产量的影响。结果表明 :不同氮源、碳源、发酵用水、培养基灭菌方式及种子液质量都对核黄素产量有较大的影响 ,而且在发酵过程中 ,发酵 2 4h时添加 2 5μmol/L的碘乙酸或发酵 4 0h时补加约 2 0g/L的葡萄糖或发酵 4 8h时补加约 17% (v/v)的新鲜培养基 (无油 )同对照组相比 ,分别增产 2 7 1% ,2 4 3%和 2 0 9%。

核黄素产生菌阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)抗反馈抑制突变株的选育

在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。

紫外线诱变原生质体选育核黄素高产菌株

以产核黄素生产用菌——阿舒假囊酵母RS-89为出发菌株,用对致期生长的菌丝体,经0.5%蜗牛酶+0.5%纤维素酶作用2h可获得大量原生质体,其再生率为6.1%。对经UV诱变的原生质体再生株进行初筛、发酵复筛,从中获得了菌落大、色素深、产量高于出发菌株30%的高产稳定株——UP-91。

利用豆渣黄浆水发酵生产核黄素的研究

以工业豆渣黄浆为主要原料,利用阿氏假囊酵母生产核黄素。对发酵生产核黄素的工艺条件进行优化,并对影响核黄素产率的营养因素及生产核黄素的影响能力进行了研究。经正交实验得出该阿氏假囊酵母菌种利用豆渣的最佳培养基,在28℃发酵培养13d,核黄素产量达到最高。

核黄素产生菌阿舒假囊酵母发酵条件的初步研究

对阿舒假囊酵母摇瓶发酵条件进行了初步研究。首先,考察了不同碳源(葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和淀粉)和有机氮源(牛肉膏、酵母膏、玉米浆和蛋白胨)对阿舒假囊酵母发酵的影响,结果表明葡萄糖和酵母膏最利于核黄素的合成。在此基础上,采用L9(43)正交设计对阿舒假囊酵母的发酵培养基进行优化,结果表明有机氮源对核黄素产量的影响最显著,优化后的发酵培养基配方为:葡萄糖50g/L,酵母膏20g/L,玉米浆20g/L,KH2PO42.0g/L,MgSO41.0g/L,NaCl1.0g/L,此最佳配方下的核黄素产量达1145.67(±82.08)mg/L,比原始发酵培养基配方下的核黄素产量提高了230.05%。最后,对阿舒假囊酵母摇瓶培养条件进行了研究,结果表明装液量为30mL、接种量为5%、发酵培养基初始pH值控制在6.0时,所得到的核黄素产量最高。

促进因子对阿舒假囊酵母合成核黄素的影响

研究在发酵培养基中添加不同促进因子(玉米浆、酵母膏和豆油)对阿舒假囊酵母合成核黄素的影响。试验结果表明:添加10g/L玉米浆是最促进阿舒假囊酵母菌体生长和核黄素合成的最适质量浓度;40g/L酵母膏分别在0h补加20g/L,24h和48h各补加10g/L,其核黄素产量达到1587.37mg/L,比在0h1次添加40g/L酵母膏的产量提高了21.07%;在发酵培养基中添加2～5g/L豆油,对核黄素的合成均有促进作用。

核黄素产生菌T30的补料发酵

对核黄素产生菌Ｔ３０补料发酵进行了研究。结果表明，发酵液呈非牛顿特性，充足的溶氧是核黄素高产的关键。补料发酵可以提高核黄素的产量，补料以补糖为主，补单糖或双糖均可。补糖时间与发酵液的ｐＨ值和菌体生长情况密切相关。发酵４８ｈ以后，控制发酵液的ｐＨ值在５．４～６．２之间，多次少量补糖，核黄素的产量可提高２０％～３０％．经补糖发酵后，Ｔ３０的核黄素产量可达８ｇ／Ｌ以上。

电视显微摄影技术在微生物教学及科研中的应用

通过对一株核黄素高产株阿舒假囊酵母Ｔ３０的菌丝形态、孢子囊、孢子、发酵过程中出现的膨大菌体及发酵终点核黄素结晶产物的显微观察，介绍一种适用于微生物材料（如：细菌、霉菌、酵母菌等）、动植物材料（如：动物组织、植物花朵）、生物大分子物质（如：淀粉颗粒）、工业结晶（如：核黄素晶体）及金相实验、普通物理实验的显微观察、检测和记录的方法。这一技术可普遍地应用于电视教学及科研实践。

阿舒假囊酵母过量合成核黄素性能的改良

以６０Ｃｏ的ｒ射线为诱变剂，核黄素合成途径的中间产物的结构类似物为“筛子”，筛选了阿舒假囊酵母（Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍａｓｈｂｙｉ）的四种抗性突变株：杀结核菌素抗性突变株（Ｔｕｂｒ）、２－脱氧葡萄糖抗性突变株（２－ＤＧｒ）、８－氮杂鸟嘌呤（８－ＡＧｒ）和抗残液突变株。杀结核菌素抗性突变株Ｔ３０的摇瓶核黄素产量由出发菌的２．５～２．８ｍｇ／Ｌ提高并稳定在３．５ｍｇ／Ｌ以上，经初步优化（培养基配方）后，稳定在５．４ｇ／Ｌ以上。

核黄素产生菌的原生质体诱变选育

用紫外线对核黄素产生菌的原生质体进行诱变选育获得一株核黄素的高产突变株其核黄素发酵单位较出发菌株提高66%

维酶素片的质量评价研究

目的:评价维酶素片的质量,并对质量标准进行完善。方法:按法定标准检验与探索性研究相结合,对国家药品计划抽验的224批次样品与调研企业所得样品进行检验,通过对发酵菌种(阿氏假囊酵母菌)进行鉴定研究、特征图谱研究、黄曲霉毒素含量测定与维生素B 2含量等考察,对维酶素片的质量进行分析与评价。结果:法定标准检验结果显示224批维酶素片合格率99.1%。探索性研究结果显示,不同生产厂家生产的维酶素片性状有较大差异,分析原因为3个原料药生产厂家使用的发酵菌种和处方均有差异;共10批次样品检测出黄曲霉毒素B 1,存在用药安全性隐患。结论:综合法定标准检验与探索性研究实验,维酶素片质量总体一般。建议相关企业提高原料标准,增加黄曲霉毒素检查项,保证原料质量,提高产品安全性;建议相关企业考察并优化处方生产工艺,提高制剂质量。建议质量标准增加发酵菌种(阿氏假囊酵母菌)的鉴别项和特征图谱检查项,以确保标准可控,以及用药安全有效。

阿舒假囊酵母合成的精油及其抗真菌活性与机理

利用发酵法对阿舒假囊酵母进行发酵,用萃取法和水蒸气蒸馏法从发酵液中提取精油;通过气相色谱-质谱(GC-MS)法确定其成分;分别利用抑菌圈和二倍稀释法实验法测定了精油的抗真菌能力、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;利用荧光标记法、精油处理酵母后细胞内容物检测法及透射电子显微镜研究了精油的抗菌机理.结果表明,阿舒假囊酵母发酵法得到的精油产率为0. 54 g/L.用GC-MS法鉴定了22种化学成分,占精油总量的98. 82%.精油主要由单萜、倍半萜、芳香醇和倍半萜烃类物质组成.精油对白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母具有良好的抗菌活性,其最小抑菌浓度分别为31. 25,31. 25,62. 5,31. 25,15. 625和15. 625μg/m L;最小杀菌浓度分别为62. 5,62. 5,125. 0,62. 5,31. 25和31. 25μg/m L.结果表明,精油的抗菌机理可能是破坏真菌的细胞壁、细胞膜,使胞内物质外泄,最终导致真菌死亡.该研究结果为发酵法合成精油及其应用提供了新思路.

阿舒假囊酵母摇瓶分批补料发酵产核黄素的研究

利用摇瓶分批补料培养模式考察了补料基质对核黄素合成的影响。首先考察了葡萄糖补加浓度对阿舒假囊酵母菌体生长和核黄素合成的影响,结果表明,葡萄糖的补加对阿舒假囊酵母的菌体生长具有促进作用,但是当葡萄糖的补加浓度超过0·5g/100mL发酵液时,会对核黄素的合成产生严重的阻遏或抑制效应。在此基础上,考察了补加不同碳源对核黄素发酵的影响,结果显示,补加1·0g/100mL发酵液的蔗糖或麦芽糖虽然均利于菌体生长,但同样会对核黄素的合成具有负作用。最后考察氮源的补加对阿舒假囊酵母发酵的影响,结果表明,补加酵母膏和玉米浆能显著促进菌体的生长,且二者最终的核黄素合成量分别为1582·1mg/L和1816·77mg/L,均明显高于不补加任何氮源实验方案下的1135·48mg/L。

几种丝状真菌原生质体的制备及其再生成菌体的研究

以黑曲霉、米曲霉、木霉、阿舒假囊酵母等几种工业生产用重要真菌为实验对象。通过研究其菌龄、酶的选择及配比、酶解时间等对原生质体制备的影响,以及再生频率的大小和再生过程的显微摄影观察,初步摸索到酶法制备上述丝状真菌原生质体及其原生质体再生成菌体的条件。从而为在原生质体水平上对这些菌株进行遗传操作,尤其是外源基因导入这些菌株对其进行遗传改良提供了实验基础。

维酶素生产菌种的选育和保藏

采用单孢子,高浓度抗生素选育和石蜡油封管保藏,有效地制止了阿氏假囊酵母菌(Eremothecium ashbyii Gullermond)的回变,确保了生产菌种的纯化,缩短了发酵周期,经实践证明该方法简便可靠。

维酶素发酵工艺的优化研究

本文通过正交设计优选出三个优良的液体菌种配方和一种较好的发酵工艺,使维酶素生产的发酵期由15天缩短为7天,生产原料成本降低50％,效价增值范围高达28.6～100％,给企业带来了较大的经济效益.

维酶素发酵主要影响因素的研究

本研究应用正交试验,从可能影响维酶素发酵周期和产品质量的若干因素中,对几个影响较显著的因素进行了实验,为维酶素工艺规程的制定和工艺要点的控制提供了依据。