川续断皂苷Ⅵ调控Notch1信号通路对大鼠正畸牙移动及骨改建的作用

目的探讨川续断皂苷Ⅵ在大鼠正畸牙移动、牙槽骨改建以及Notch1信号通路中的作用。方法40只大鼠建立正畸牙移动模型,随机分为模型组、川续断皂苷Ⅵ组、抑制剂组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组,每组10只,另设对照组。川续断皂苷Ⅵ组大鼠在双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,抑制剂组大鼠在同样位置注射γ-外分泌酶抑制剂(DAPT)溶液0.6 mL/kg,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠在同样位置注射DAPT溶液0.6 mL/kg,1 h后再注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,1次/2 d,共注射7次。测量各组大鼠第一磨牙移动距离,HE染色观察牙周组织病理学改变,TRAP染色检测破骨细胞数,RT-PCR法和蛋白印迹法检测牙周组织中Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch1、Jagged1 mRNA和蛋白水平。结果模型组和抑制剂组大鼠牙周膜纤维排列紊乱,宽度增加,骨吸收陷窝少,抑制剂组表现的更明显;川续断皂苷Ⅵ组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组牙周膜纤维排列较规则,增宽不明显,骨吸收陷窝增多,川续断皂苷Ⅵ组大鼠以上各变化更显著;与模型组比较,川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与川续断皂苷Ⅵ组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离缩短,破骨细胞数减少,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论川续断皂苷Ⅵ可加速正畸牙移动,增加牙周组织中破骨细胞数量,促进牙周改建,其可能是通过激活Notch1信号通路发挥作用。

川续断皂苷Ⅵ对睡眠剥夺小鼠神经发生及认知功能的改善作用研究

本文旨在探讨川续断皂苷Ⅵ(asperosaponin Ⅵ,ASA Ⅵ)对睡眠剥夺小鼠认知功能的改善作用及相关机制。采用多平台水环境法对C57BL/6J小鼠进行睡眠剥夺,期间腹腔注射ASA Ⅵ进行干预,采用新物体识别实验及Morris水迷宫实验评估小鼠的认知功能,运用q-PCR、免疫组化、Western blotting分别检测小鼠海马区的炎症水平、神经发生及信号通路变化。结果显示:与对照组相比,模型组小鼠海马中的小胶质细胞呈激活状态,炎症因子的表达水平显著提高(P<0.05),新生神经元数量显著减少(P<0.05),并导致认知功能下降。ASA Ⅵ干预显著改善了睡眠剥夺小鼠的认知功能,抑制海马中促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达(P<0.05),同时显著提高抗炎性细胞因子IL-4、IL-10和神经营养因子BDNF的表达水平(P<0.05)。ASA Ⅵ干预还显著提高了睡眠剥夺小鼠海马中的p-PI3K、PI3K、Akt蛋白表达水平及新生神经元数量(P<0.05)。PI3K/Akt抑制剂LY294002处理显著降低ASA Ⅵ的干预效果。结果表明,ASA Ⅵ可改善睡眠剥夺小鼠学习记忆能力,其机制与PI3K/Akt信号通路激活相关。因此,作为抗炎、神经保护药物,ASA Ⅵ具有潜在的开发前景。

续断“发汗”前后两个主要成分在大鼠体内的药代动力学研究

目的:建立基于高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)测定大鼠口服“发汗”前后续断中主要成分马钱苷和川续断皂苷Ⅵ的血药浓度测定方法,研究其药代动力学特征。方法:通过给大鼠灌胃服用“发汗”前后续断水煎液,分别于给药前和给药后在指定时间取眼眶窦血。采用HPLC-MS技术测定大鼠血浆中“发汗”前后续断中马钱苷与川续断皂苷Ⅵ的浓度。结果:大鼠口服给药5 min后,血中可以检测到马钱苷与川续断皂苷Ⅵ,“发汗”前续断马钱苷:半衰期为93.79 min,川续断皂苷Ⅵ的半衰期为86.51 min;“发汗”后续断:马钱苷和川续断皂苷Ⅵ的半衰期为69.71 min,85.78 min;“发汗”前续断的马钱苷与川续断皂苷Ⅵ的Cmax和AUC较大,表明“发汗”前续断的马钱苷与川续断皂苷Ⅵ更有利于发挥疗效。结论:该方法适用于“发汗”前后的续断在大鼠体内马钱苷和川续断皂苷Ⅵ血药浓度的测定及药代动力学研究,实验结果表明,未“发汗”续断中的马钱苷与川续断皂苷Ⅵ更有利于发挥疗效。

川续断皂苷Ⅵ通过JNK信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化

【目的】探讨川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞方向分化的机制。【方法】全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs。实验分为诱导组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组等5组。采用茜素红染色和骨钙素定量法检测细胞成骨分化程度;采用碱性磷酸酶(ALP)染色测定ALP活性;采用生物信息学方法预测c-Jun氨基末端激酶(JNK)相关因子。【结果】与诱导组比较,1μmol/L续断皂苷Ⅵ组茜素红染色明显增加,ALP活性增强,骨钙素表达量增加(P<0.05)。与1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组比较,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组茜素红染色程度降低,ALP活性减弱,骨钙素含量显著减少(P<0.05)。生物信息学表明c-Jun和转录激活因子4(ATF4)、骨形态发生蛋白2(BMP2)之间存在直接的相互联系。【结论】川续断皂苷Ⅵ诱导BMSCs成骨分化的机制可能与JNK信号通路的激活有关。

利用斑马鱼模型评价川续断皂苷Ⅴ和Ⅵ的抗骨质疏松活性

为探讨斑马鱼模型评价中药微量成分在体抗骨质疏松活性的适用性与合理性,以25μmol/L泼尼松龙诱导的斑马鱼幼鱼骨质疏松模型考察川续断皂苷V和川续断皂苷VI抗骨质疏松活性。采用茜素红对斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 25μmol/L泼尼松龙使斑马鱼骨量显著丢失,与模型组比较,川续断皂苷V和川续断皂苷VI及依替膦酸二钠阳性药均能阻止泼尼松龙诱导的斑马鱼骨量丢失,提示斑马鱼模型成功评价了微量川续断皂苷V和川续断皂苷VI的抗骨质疏松活性,具有在体化、微板化,简单、高效的特点。

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。

续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA VI对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响。结果:适宜浓度下的ASA VI能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达。ASA VI能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构。结论:ASA VI促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA VI诱导的成骨分化过程。

不同种植密度和施肥量对川续断生长及产量和品质的影响

人工栽培管理条件下,要达到高产优质的生产目标,合理密植和科学施肥是中草药种植的关键环节。本试验研究不同种植密度和施肥量对药用植物川续断农艺性状、产量性状和品质性状的影响。结果表明:降低种植密度可促进川续断根系生长,但不利于产量提高;施用肥料对川续断生长具有明显的促进作用,但过量施用复合肥对川续断增产不利;不同种植密度对川续断皂苷Ⅵ含量无显著影响,而有机肥配合适量复合肥可显著提高川续断皂苷Ⅵ含量。苗期促进茎叶生长,成熟期促进根茎发育,保证产量和有效成分含量,最优种植行株距25 cm×30 cm,每公顷种植川续断植株390 000株;最佳经济施肥量为有机肥2 130 kg/hm^2和复合肥660 kg/hm^2。本研究为川续断合理种植管理及高产优质提供了科学理论依据。

跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析

目的:建立跌打活血散双通道指纹图谱分析方法以评价该制剂质量。方法:以C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 m L·min-1;蒸发光散射检测器漂移管温度:115℃;氮气流速:2.7 L·min-1;进样量:20μL,采用HPLC-DADELSD联用法建立UV 254 nm与ELSD双通道指纹图谱,对7家生产企业的14批跌打活血散进行相似度评价。结果:在上述色谱条件下,相似度评价结果表明不同企业产品间存在一定差异,经对照品比对确认了指纹图谱中14个色谱峰(儿茶素、表儿茶素、羟基红花黄色素A、阿魏酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1/Re、川续断皂苷VI、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、11-羰基-β-乙酰乳香酸)。结论:建立的跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析方法简便、可靠,可更为全面有效地控制该产品质量。

正交实验法优选乌梅透骨口服液制备工艺

目的优选乌梅透骨口服液的制备工艺。方法以处方中川续断皂苷VI含量为考察指标,采用L9(34)正交设计法,分别考察水提和醇沉影响因素并确定最佳制备工艺。结果该口服液的最佳制备工艺为加入8倍量水,煎煮1.5h,提取3次,水提液相对密度为1.12,醇沉浓度为65%,冷藏(4℃)静置2d。结论优选出的制备工艺合理可行。

续断中有效成分木通皂苷D大鼠胆汁内排泄研究

【目的]建立液质联用方法同时检测给药后大鼠胆汁中木通皂苷D及其代谢产物，研究木通皂苷D在大鼠胆汁中的排泄情况。【方法】大鼠灌胃给药木通皂苷D后按照设定时间点收集胆汁，通过建立的液相质谱联用方法分析胆汁中的木通皂苷D及其代谢产物的含量变化情况。【结果】实验同时检测到了木通皂苷D与其3个代谢产物，并对浓度较大的木通皂苷D和HNsaponinF进行了定量。木通皂苷D及HNsaponinF在3．2～2000ng／mL与0．8～500．g／mL范围内线性关系良好，日间日内精密度均小于7．72％，给药24h内累积排泄量为5845．5ng与3996．8ng。【结论】该方法符合生物样品测定要求，可用于胆汁中木通皂苷D及其代谢产物HNsaponinF的定量分析。

川续断皂苷Ⅵ修复兔肌腱病

背景:近年来肌腱病是一种高发的骨科慢性损伤,目前仍缺少有效的治疗手段,川续断具有补肝肾、强筋骨、续折伤等功效。目的:旨在研究川续断中主要成分川续断皂苷Ⅵ对兔肌腱病的修复作用。方法:48只兔随机分为正常组(n=8)、模型组(n=32)和生理盐水组(n=8),其中模型组于左跟骨附着点注射前列腺素E2建立兔跟腱病模型,随后随机分为4个亚组,分别采用0,10,20,40 mg/kg川续断皂苷Ⅵ治疗,1次/d,连续4周。动物实验于2019-11-04经成都体育学院动物伦理委员会批准,批准号:成体伦理[2020]21号。结果与结论:(1)与正常组相比,模型组基质金属蛋白酶1表达水平较高;而与模型组相比,川续断皂苷Ⅵ中、高剂量组基质金属蛋白酶1表达下调(P<0.05);模型组金属蛋白酶抑制剂1水平高于正常组,而在川续断皂苷Ⅵ低、中、高剂量组均可降低金属蛋白酶抑制剂1的表达水平(P<0.05);与模型组相比,川续断皂苷Ⅵ低、中、高剂量转化生长因子β1表达水平上调(P<0.05);与模型组相比,川续断皂苷Ⅵ高剂量纤溶酶原激活物抑制剂1表达水平升高(P<0.05);(2)川续断皂苷Ⅵ高剂量组纤维组织排列及分布恢复均接近正常肌腱组织。提示川续断皂苷Ⅵ可平衡细胞外基质胶原异常代谢,诱导肌腱细胞增殖,利于保持肌腱胶原的稳定性促进愈合,可能是一种潜在的治疗肌腱病的药物。

乌梅透骨口服液的质量控制

目的:建立乌梅透骨口服液的质量控制方法。方法:采用TLC法对组方中的川续断、当归、五味子进行鉴别:用柱层析方法处理样品,用HPLC法测定样品中川续断皂苷Ⅵ的含量。结果:在薄层色谱中能检出川续断、当归、五味子;川续断皂苷Ⅵ在0.05～1.5 mg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为96.99%,RSD为2.10%(n=9)。结论:所建立的定性方法专属性强,定量方法准确,重复性好,可有效控制该制剂质量。

HPLC法测定骨松宝胶囊中续断皂苷Ⅵ的含量

目的:建立骨松宝胶囊中续断皂苷Ⅵ含量的高效液相色谱法测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(27∶73);检测波长:270 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:35℃;进样:5μL。结果:续断皂苷Ⅵ的进样量在0.26-3.59μg.mL-1范围内与峰面积积分值呈较好的线性关系,平均加样回收率为98.75%,RSD%为0.62%。结论:采用HPLC法测定骨松宝胶囊中续断皂苷Ⅵ的含量简便、可行、准确、可操作性好,可用于其质量控制。

三仙壮骨胶囊提取工艺研究

目的优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺。方法采用高效液相色谱法测定川续断皂苷VI的含量,并以川续断皂苷VI的含量作为指标,采用正交设计试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为:加10倍量的水煎煮2次,每次1 h。结论该提取方法合理、可行,为生产提供了实验依据。

续断皂苷类成分的体外抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定方法评价续断总皂苷及其主要组成成分川续断皂苷Ⅵ的体外抗氧化活性.结果显示续断总皂苷的抗氧化活性显著优于川续断皂苷Ⅵ,DPPH自由基半数清除率IC50分别为0.9和3mg.mL-1,ABTS自由基的IC50分别是0.25和2mg.mL-1.FRAP法测得续断总皂苷铁离子的还原能力相当于88.67 mmolFeSO4,川续断皂苷Ⅵ相当于7.02mmol FeSO4.续断总皂苷和川续断皂苷Ⅵ具有一定的抗氧化能力,且呈明显的量效关系.

续断煮散颗粒制备工艺研究

目的:建立续断煮散颗粒的制备工艺。方法:对续断煮散颗粒制备的影响因素——粉末粒度、成型加水量及干燥时间进行了系统研究,以出粉率、川续断皂苷VI溶出量、干膏收率等为考察指标对制备工艺进行评价。结果:确定了续断煮散颗粒的最佳制备工艺,即取续断中粉,按0.4mL/g均匀喷水,充分混匀,采用挤出法制备成型,于80℃烘箱中干燥60min,取出,整粒,即得。结论:该方法简便可行,质量稳定可控,剂量准确,操作简单,对煮散颗粒的制备工艺研究具有示范作用。

川续断不同炮制品中总皂苷及川续断皂苷Ⅵ、Ⅹ含量测定

目的:考察川续断不同炮制品中总皂苷及川续断皂苷Ⅵ、Ⅹ含量的变化。方法:川续断不同炮制品分为川续断生品、盐制品及酒制品,利用紫外分光光度法测定各炮制品中总皂苷的含量,高效液相色谱法测定各炮制品中川续断皂苷Ⅵ、Ⅹ的含量。结果:与续断生品比较,酒制品和盐制品中总皂苷含量有所下降;盐制品中川续断皂苷Ⅵ含量显著增加、川续断皂苷Ⅹ含量显著降低;酒制品中川续断皂苷Ⅵ含量显著增加、川续断皂苷Ⅹ含量略有降低,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:川续断不同炮制品中总皂苷及川续断皂苷Ⅵ、Ⅹ的含量明显不同,为川续断不同炮制品质量标准制订提供参考。

HPLC法测定益肾续骨片中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的:本文借助HPLC(高效液相色谱法)来测定分析川续断皂苷Ⅵ在益肾续骨片中的含量。建立益肾续骨片中续断皂苷Ⅵ的含量测定方法,完善益肾续骨片质量标准资料,能够更好地保证制剂的有效性,安全性。方法:采用HPLC测定。色谱柱采用的为Inertsil ODS-XP柱(5μm,4.6×150mm),流动相是27:73的乙腈(ACN)-水溶液,设定212nm的测定波长,流速与柱温各为1.0 mL/min、30℃。结果:川续断皂苷Ⅵ进样浓度在35.9~359μg/mL内与峰面积积分值呈良好的线性关系,回归方程:Y=2139X+2612.4(r=0.9999);加样回收率均值为98.74%,RSD为1.26%(n=6)。结论:此法具较好重复性,精确性,同时可获得可靠结果,在测定益肾续骨片中川续断皂苷Ⅵ含量、制剂质量控制方面具应用价值。

祛风止痛胶囊质量标准研究

目的:对祛风止痛胶囊的质量标准进行提高。方法:用薄层色谱法对祛风止痛胶囊中续断、威灵仙进行定性鉴别;用HPLC法测定川续断皂苷Ⅵ的含量,采用Appllo C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(30∶70),流量1.0 m L·min^(-1),柱温30℃,检测波长为212 nm。结果:薄层色谱鉴别方法斑点清晰,重现性好;川续断皂苷Ⅵ在0.87~11.72μg范围内线性关系良好(r=1.000 0),加样回收率为96.0%,其RSD为1.4%(n=6)。结论:所建方法可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。