HDAC9基因对LPS诱导冠状动脉平滑肌细胞增殖与凋亡及炎症反应影响

目的探讨蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因对脂多糖(LPS)诱导的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)增殖、凋亡及炎症反应的影响。方法采用LPS诱导HCASMC,实验分为空白对照组、模型组、阴性对照组和转染组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测HDAC9 mRNA和蛋白表达;MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果与空白对照组相比,模型组细胞中HDAC9 mRNA和蛋白表达水平升高(F=91.145、185.108,q=19.403、25.646,P<0.05)、细胞活力升高(F=77.940,q=17.819,P<0.05)、凋亡率降低(F=98.321,q=15.563,P<0.05)、TNF-α与IL-1β及IL-8的含量增多(F=91.145~325.808,q=10.813~15.180,P<0.05)。敲低HDAC9能够抑制细胞活力和炎症反应,并促进细胞凋亡。结论敲低HDAC9可抑制LPS诱导的HCASMC增殖及炎症反应,并促进细胞凋亡。

慢性哮喘肺组织组蛋白去乙酰化酶活性降低对气道平滑肌细胞表型转变的影响

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及人原代支气管平滑肌细胞,采用蛋白质印迹、MTT、Transwell及三维凝胶收缩等方法检测抑制HDAC活性对气道平滑肌细胞表型转变的影响及其相应的细胞增殖、迁移、收缩能力的变化。结果慢性哮喘组小鼠肺组织HDAC活性为(0.371±0.054)μmol/(L·μg),较正常对照组的(0.603±0.034)μmol/(L·μg)显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。TSA(0.5μmol/L)作用后12～24h,体外培养的大鼠气管平滑肌环及人支气管平滑肌细胞的α-sm-actin、SM22-α表达明显增加,作用后24h及48h支气管平滑肌细胞数目分别为(1.719±0.044)×104及(1.808±0.009)×104个,明显低于空白对照组的(1.911±0.048)×104及(2.537±0.01)×104个(P<0.05)。血小板源性生长因子(PDGF)诱导的支气管平滑肌细胞迁移数也在TSA作用后显著降低(88±7.632vs52±7.5,P<0.05)。此外,TSA作用24h后的三维凝胶收缩率[(9.885±7.084)%]较空白对照组[(44.844±3.808)%]及PDGF组[(41.315±7.943)%]明显降低(P<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺部HDAC的活性下降,可能与气道平滑肌细胞向"收缩型"转变有关,但HDAC活性下降并不增加细胞的收缩能力。

组蛋白去乙酰化酶4抑制肌细胞增强因子2C介导的肺动脉高压小鼠肺血管重构研究

目的观察经组蛋白去乙酰化酶4抑制剂(HDAC4i)处理后小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C) mRNA及其蛋白表达水平变化,以及小鼠肺血管的病理生理改变,探讨HDAC4是否调节MEF2C介导的肺动脉平滑肌细胞增殖。方法健康雄性BALB/C小鼠32只,随机分为肺动脉高压模型(PAH)组(野百合碱处理)、HDAC4i组(HDAC4i处理)、PAH+HDAC4i组(野百合碱联合HDAC4i处理)及阴性对照组(NC组)4组,每组8只。在第2周、第4周监测4组小鼠肺动脉血流动力学改变、右心室肥厚指数[RV/(LV+S)],采用荧光定量PCR与蛋白质印迹技术检测小鼠肺组织MEF2C mRNA及其蛋白表达水平变化,采用免疫组化检测小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)及HDAC4蛋白表达及定位。结果第2周和第4周,PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠RV/(LV+S)均明显高于NC组(P<0.01);PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠右心室收缩压(RVSP)均明显高于NC组(P<0.01)。与NC组比较,第4周PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组MEF2C mRNA及其蛋白表达量均升高,且MEF2C mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示:与NC组比较,PAH组、PAH+HDAC4i组及HDAC4i组小鼠肺动脉平滑肌细胞呈现OPN表达水平上升,而α-SMA与HDAC4蛋白表达水平明显下降。结论 HDAC4抑制MEF2C介导的肺动脉高压小鼠肺血管重构。