黄芪甲苷Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路增加Th1/Th2细胞比率减轻IgA肾病小鼠肾损伤

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对IgA肾病(IgAN)小鼠1型辅助T(Th1)细胞/Th2细胞平衡的影响及其可能作用机制。方法建立BALB/c小鼠IgAN模型,造模成功小鼠随机分为模型组、AS-Ⅳ低、中和高剂量组各10只,另设对照组10只。AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠灌胃(12.5、25、50)mg/kg AS-Ⅳ混悬液(生理盐水配制),对照组及模型组给予等量生理盐水。测定各组小鼠24 h尿蛋白(24 hUPr)含量和尿红细胞计数;测定小鼠血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平;ELISA检测各组小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和IL-10水平;流式细胞术检测小鼠外周血Th1/Th2细胞比率;HE染色观察小鼠肾组织病理学变化;反转录PCR和Western blot法分别检测小鼠肾组织中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域1(TIM-1)、Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠第12周和第15周尿红细胞计数、24 h UPr、BUN、Scr、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例、TIM-1与TLR4 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ALB、IFN-γ水平、Th1细胞比例和Th1/Th2细胞比率升高,且以AS-Ⅳ高剂量组效果最佳。结论AS-Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路,增加Th1/Th2细胞比率,抑制炎症反应,减轻IgAN小鼠肾损伤。

黄芪甲苷对H_2O_2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄芪甲苷对H2O2引起PC12细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。方法用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,通过MTT法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察细胞内核酸形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内活性氧的产生及细胞周期变化情况;Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A、磷酸化p38及T-p38的表达。结果成功建立了H2O2致PC12细胞氧化应激损伤模型;黄芪甲苷能够提高H2O2损伤的PC12细胞的活力,提升因H2O2导致的细胞凋亡率的下降,降低H2O2所致的胞内ROS升高的状况。机制研究表明:黄芪甲苷通过恢复H2O2诱导细胞周期蛋白Cyclin D1表达下调的情况,调控各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;进一步研究发现黄芪甲苷是通过抑制H2O2对p38的激活发挥作用的。结论黄芪甲苷对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达来实现的,调控过程与p38/MAPK通路密切相关。该发现为临床上抗氧化治疗策略提供有益的实验依据。

正交试验法优选黄芪甲苷的提取工艺

为了对比煎煮法与回流提取法的优劣,探讨黄芪甲苷的最佳提取方法与工艺,以黄芪甲苷得率为指标,对提取黄芪甲苷的方法和影响因素进行了考查,结果表明:在预浸泡8 h,药材粉碎的前提下煎煮法主要影响因素为pH值,回流提取法主要影响因素为pH值和乙醇体积分数。进而确定:煎煮法最佳提取工艺,首次煎煮时间为1 h,pH值为12,提取温度为60℃;回流提取法最佳工艺,乙醇体积分数为60%,pH值为12,乙醇用量为药材质量的6倍。

黄芪甲苷抑制迟发型超敏反应的作用

目的考察黄芪甲苷(AS-IV)对迟发型超敏反应的影响。方法应用2,4-二硝基氯苯(DNCB)造成小鼠变态反应性接触性皮炎(ACD)模型,分别考察(AS-IV)诱导相和效应相给药对耳廓肿胀的影响,并进行耳病理组织学检查;ELISA方法检测小鼠血清IFN-γ水平。MTT法检测ConA诱导的脾细胞增殖。结果 (AS-IV)诱导相给药可明显抑制ACD小鼠耳肿胀,而效应相给药未观察到明显效应;病理组织学结果显示(AS-IV)诱导相给药可减轻模型小鼠局部水肿及血管扩张,减少淋巴细胞浸润;(AS-IV)诱导相给药明显降低血清IFN-γ水平;离体实验未发现(AS-IV)对ConA诱导的脾细胞增殖有明显影响。结论 (AS-IV)诱导相给药有抑制迟发型超敏反应的作用,该作用可能与抑制IFN-γ有关。

不同厂家产黄芪注射液中黄芪甲苷的含量考察

目的 :以黄芪甲苷为含量测定指标 ,考察不同生产厂家生产的黄芪注射液的质量。方法 :建立HPLC ELSD测定黄芪甲苷的方法 ,对黄芪注射液中的黄芪甲苷进行含量测定。HypersilODS2 C18(2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm)色谱柱 ,柱温 :4 0℃ ,流动相 :乙腈 水 (36∶6 4 ) ,流速 :1.0mL·min-1,ELSD检测器漂移管温度 :10 0℃ ,气体 (空气 )流速 :3.0L·min-1。结果 :黄芪甲苷在 2 .4～ 12 μg呈良好的线性关系 ,相关系数为r=0 .9997,加样回收率为 10 1.6 % ,RSD为 2 .9% ,n =5。测定了 5个厂家生产的 10批黄芪注射液 ,结果样品间的黄芪甲苷含量的差异较大。结论 :用HPLC ELSD测定黄芪注射液中黄芪甲苷含量的方法快速简便 ,灵敏度高 ,结果可靠 ,重现性较好 ,可作为黄芪注射液质量评价的依据。目前 ,商品黄芪注射液中黄芪甲苷含量差异较大 。

黄芪甲苷介导Akt/mTOR/HIF-1α通路调控氧糖剥夺PC12细胞自噬的机制研究

探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的PC12细胞自噬损伤的保护作用及可能机制。体外建立OGD PC12细胞自噬损伤模型,PC12细胞分为正常组,OGD组,AS-Ⅳ低、中、高剂量组,阳性药右美托咪定(DEX)组。MTT法检测PC12细胞存活率,透射电子显微镜观察自噬小体及自噬溶酶体,MDC荧光染色法观测自噬小体的荧光强度,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α自噬相关蛋白表达情况。与正常组比较,OGD组细胞存活率显著降低(P<0.01),自噬小体显著增多(P<0.01),MDC荧光强度显著增强(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、HIF-1α显著上调(P<0.05或P<0.01),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著下调(P<0.05或P<0.01)。与OGD组比较,AS-Ⅳ低、中剂量组及DEX组细胞存活率显著提高(P<0.01),自噬小体显著减少(P<0.01),MDC荧光强度显著减弱(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、HIF-1α显著下调(P<0.05或P<0.01),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著上调(P<0.01)。AS-Ⅳ低、中剂量可通过激活Akt/mTOR,继而影响HIF-1α,抑制OGD诱导的PC12细胞自噬损伤,发挥抗神经元自噬损伤的保护作用;AS-Ⅳ高剂量组与OGD组相比差异无统计学意义。该研究可为AS-Ⅳ防治OGD诱导的细胞自噬损伤提供一定的靶标参考,为黄芪及AS-Ⅳ的二次开发积累一定实验室数据。

黄芪甲苷对哮喘模型小鼠气道炎症及IL-22的影响

目的观察白介素22(IL-22)在哮喘模型中的作用,研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对哮喘小鼠模型气道炎症及IL-22的调控作用,探讨AS-Ⅳ治疗哮喘的作用机制。方法 32只4周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德(BUD)组和AS-Ⅳ组4组,用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠以制备哮喘模型。小鼠肺组织行HE及ABPAS染色,进行气道炎症评分,ELISA法检测4组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-22的水平,实时荧光定量PCR(RTPCR)检测小鼠肺组织中IL-22 mRNA的表达水平,流式细胞术检测小鼠脾单细胞悬液中Th22的比例。结果与对照组相比,哮喘小鼠肺组织炎症评分增加(P<0.05),BALF中IL-22水平增高(P<0.01),肺组织中IL-22 mRNA表达水平升高(P<0.01),脾单细胞悬液中Th22比例增加(P<0.01),差异具有统计学意义。给予BUD及AS-Ⅳ治疗后,小鼠气道炎症评分降低(P<0.05),IL-22 mRNA的表达水平及Th22细胞的比例均较哮喘组降低(P<0.01),差异具有统计学意义。结论 AS-Ⅳ对哮喘气道炎症发挥治疗性作用,这可能与AS-Ⅳ通过抑制Th22细胞分化、抑制IL-22的表达和分泌有关。