基于NF-κB/NLRP3炎症小体探讨黄芪甲苷Ⅳ对系统性红斑狼疮模型小鼠免疫功能的影响

【目的】探讨黄芪甲苷Ⅳ对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的治疗作用及机制。【方法】将40只雌性自发性MRL/lpr SLE模型小鼠随机分为5组,模型组、泼尼松组、黄芪甲苷Ⅳ组、黄芪甲苷Ⅳ+CHPG[核因子KappaB(NF-κB)通路激活剂]组和黄芪甲苷Ⅳ+尼日利亚菌素[NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)激活剂]组,每组8只。以8只雌性MRL/MpJ小鼠作为正常组。给药期间,称量体质量。给药结束后,称量脾脏、胸腺、肾脏质量,计算脏器指数,检测尿液样本中的24 h尿蛋白水平,血液样本中生化指标肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN),自身抗体[抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗snRNP/Sm抗体],炎症介质[白细胞介素(IL)-1β、IL-18]水平,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理损伤,Masson染色观察肾组织纤维化,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肾脏和脾脏组织中NF-κB/NLRP3炎症小体通路相关蛋白表达。【结果】与模型组比较,泼尼松组和黄芪甲苷Ⅳ组小鼠体质量增加,脾脏指数、胸腺指数和肾脏指数降低,血清ANA抗体、抗dsDNA抗体、抗snRNP/Sm抗体水平降低,SCr、BUN、24 h尿蛋白水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,肾脏和脾脏组织中p-p65/p65、p-IκBα/IκBα、cleaved caspase-1/pro caspase-1比值及NLRP3蛋白相对表达量降低(均P<0.05),肾组织病理损伤和纤维化减轻,且2个给药组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NF-κB激活剂和NLRP3炎症小体激活剂能够在一定程度上消除黄芪甲苷Ⅳ对SLE小鼠上述指标的改善作用。【结论】黄芪甲苷Ⅳ能够改善SLE小鼠的免疫功能,减轻肾损伤和炎症反应,其作用机制可能与其抑制NF-κB/NLRP3炎症小体途径的活化有关。

黄芪甲苷Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路增加Th1/Th2细胞比率减轻IgA肾病小鼠肾损伤

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对IgA肾病(IgAN)小鼠1型辅助T(Th1)细胞/Th2细胞平衡的影响及其可能作用机制。方法建立BALB/c小鼠IgAN模型,造模成功小鼠随机分为模型组、AS-Ⅳ低、中和高剂量组各10只,另设对照组10只。AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠灌胃(12.5、25、50)mg/kg AS-Ⅳ混悬液(生理盐水配制),对照组及模型组给予等量生理盐水。测定各组小鼠24 h尿蛋白(24 hUPr)含量和尿红细胞计数;测定小鼠血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平;ELISA检测各组小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和IL-10水平;流式细胞术检测小鼠外周血Th1/Th2细胞比率;HE染色观察小鼠肾组织病理学变化;反转录PCR和Western blot法分别检测小鼠肾组织中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域1(TIM-1)、Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠第12周和第15周尿红细胞计数、24 h UPr、BUN、Scr、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例、TIM-1与TLR4 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ALB、IFN-γ水平、Th1细胞比例和Th1/Th2细胞比率升高,且以AS-Ⅳ高剂量组效果最佳。结论AS-Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路,增加Th1/Th2细胞比率,抑制炎症反应,减轻IgAN小鼠肾损伤。

黄芪甲苷Ⅳ对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化影响

目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响及作用机制。方法:刮取人的牙齿根中1/3的牙周膜,采用组织块法对hPDLSCs进行培养;流式细胞术鉴定hPDLSCs表面CD105、CD90、CD44、CD45和CD34表达;使用碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色以及油红O染色,对细胞的多向分化能力(成骨和成脂分化)进行鉴定;hPDLSCs用不同浓度AS-Ⅳ(0、20、50、100、150μmol/L)处理,通过CCK-8法检测hPDLSCs增殖活性;各组hPDLSCs(0、20、50、100、150μmol/L AS-Ⅳ)共培养7、14 d,采用ALP染色和ALP活性检测及ARS染色检测不同浓度AS-Ⅳ对hPDLSCs成骨分化的影响;实验分为对照组和实验组(150μmol/L AS-Ⅳ),均用成骨诱导液培养14 d,通过qRT-PCR法检测ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)和骨钙素(OCN)的mRNA表达水平,Western blotting检测ALP、RUNX2、OCN和β-catenin蛋白表达水平。结果:hPDLSCs具备间充质干细胞特征,细胞表面标志物CD105、CD44和CD90均表现为阳性,而CD34、CD45显示为阴性;hPDLSCs可成骨分化和成脂分化,具有多向分化潜能;CKK-8实验显示,AS-Ⅳ促进hPDLSCs增殖(P<0.05);ALP染色和活性检测及ARS染色结果显示,AS-Ⅳ能促进人hPDLSCs的成骨分化;qRT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,AS-Ⅳ(150μmol/L)组ALP、RUNX2、OCN mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05~P<0.01),β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:AS-Ⅳ能促进hPDLSCs成骨分化,其机制可能为通过抑制Wnt/β-catenin信号通路实现。

黄芪甲苷Ⅳ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用(英文)

目的探讨从黄芪提取物黄芪甲苷Ⅳ对异常血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法离体培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别测定黄芪甲苷Ⅳ作用前后异常血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、细胞一氧化氮(NO)和钙离子浓度的变化。用WST法测定细胞的增殖;细胞凋亡通过annexinV标记法用流式细胞仪测定;细胞内NO和钙离子用荧光素DAF-2和Flue-3/AM分别标记,运用激光共聚焦显微镜测定其浓度变化;细胞醛糖还原酶的活性通过测定NADPH在340nm的吸收光谱来表征。结果黄芪甲苷Ⅳ显著抑制了由血清诱导的平滑肌细胞增殖(P<0.01);流式细胞测定表明黄芪甲苷Ⅳ促进平滑肌细胞的凋亡(P<0.01);黄芪甲苷Ⅳ和醛糖还原酶抑制剂依帕斯他显著抑制了醛糖还原酶的活性(P<0.01);在黄芪甲苷Ⅳ作用下,平滑肌细胞NO和钙离子浓度增加。结论黄芪甲苷Ⅳ可能通过抑制醛糖还原酶的活性,促进细胞凋亡,增加NO的产生和钙离子浓度的途径来抑制异常血管平滑肌细胞的增殖。

黄芪甲苷Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的观察黄芪甲苷(Astragaloside,Astra)-Ⅳ对梗死小鼠心肌新生血管成熟及缺氧诱导因子(Hypoxia induced factor,HIF)-1α和血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell factor,VEGF)蛋白表达的影响。方法结扎法制备小鼠心肌梗死(Myocardium Infarct,MI)模型,Astra-Ⅳ腹腔注射[2 mg/(kg·d)]21 d,通过小动物超声系统评价小鼠心功能;计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值;CD31和α-SMA双荧光染色法观察梗死周边心肌组织新生和成熟血管密度;经鼠尾注射FITC-Lectin观察新生血管的灌注情况;Western blot检测MI区及其边缘组织HIF-1α、VEGF表达的变化。结果 Astra-Ⅳ可提高小鼠的FS(%)和EF(%)[(61.0±2.7)%vs.(40.2±3.9)%,P<0.05;(44.1±3.2)%vs.(29.1±4.1)%,P<0.05],减少MI范围[28.8±8.4)%vs.(45.1±9.3)%;P<0.05];MI+Astra-Ⅳ组心肌新生血管密度(214.0±21.3/mm^2),成熟血管密度(7.0±2.1/mm^2),有效灌注新生血管密度为(0.39±0.11)×10~5/pixels,与MI组比较均具有显著差异(P<0.01);MI+Astra-Ⅳ组显著增加周围组织的HIF-1α、VEGF蛋白水平(P<0.01)。结论 Astra-Ⅳ缩小MI面积,提高梗死心肌功能,并促进促血管新生和成熟,实现缺血组织有效灌注,其分子机制可能与HIF-1α和VEGF蛋白的表达增加有关。

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H_(2)O_(2)诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H_(2)O_(2)诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、H_(2)O_(2)模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和ccaspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增加Bcl2表达,减少BAX表达,Bc12/BAX的比值与H_(2)O_(2)模型组相比显著升高,同时抑制c-caspase的表达。AST4促进Nrf-2核转位,增加下游抗氧化蛋白HO-1的表达。结论AST4可通过激活Nrf-2/HO-1信号通路,促进Nrf-2核转位,增加HO-1的表达,调节氧化/抗氧化平衡,提高机体抗氧化水平,保护细胞免受氧化损伤和减少细胞凋亡。

黄芪甲苷Ⅳ对TGF-β1/Smad2介导的癫痫合并抑郁小鼠的保护作用

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ对癫痫合并抑郁小鼠的治疗和保护作用及机制。方法 60只C57/BL6小鼠,随机分为对照组、癫痫组、黄芪甲苷Ⅳ低剂量组(20 mg/kg)、黄芪甲苷Ⅳ高剂量组(40 mg/kg)、黄芪甲苷Ⅳ+LY2109761组(40 mg/kg+1μg/只),每组12只。以氯化锂(180 mg/kg)联合匹罗卡品(50 mg/kg)制造小鼠癫痫合并抑郁模型,造模前7 d,除对照组和癫痫组,其余各组连续灌胃给药对应剂量的黄芪甲苷,造模前3 d,黄芪甲苷Ⅳ+LY2109761组小鼠给予LY2109761,1μg/只,鼻滴。造模结束后30~90 min,观察小鼠癫痫发作次数与程度,造模结束后24 h,检测小鼠糖水偏好,游泳不动时间及悬尾不动时间。行为学检测结束后取脑组织用于Nissl染色、Western blot实验。结果行为学测试显示,氯化锂联合匹罗卡品成功点燃小鼠癫痫症状,并造成小鼠抑郁样行为。黄芪甲苷Ⅳ预给药能够显著改善小鼠癫痫症状与抑郁样症状,而转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)抑制剂逆转了黄芪甲苷Ⅳ的治疗效果。此外,氯化锂联合匹罗卡品造成TGF-β1表达下降,其下游Smad2磷酸化水平降低,海马组织中Caspase-3剪切增加,而Bcl-2/Bax表达比例降低,最终造成小鼠海马组织中神经元凋亡。黄芪甲苷组TGF-β1蛋白表达显著升高,p-Smad2表达增加,Caspase-3蛋白剪切抑制,Bcl-2/Bax表达比例增加,神经元损伤减少。结论氯化锂联合匹罗卡品造成小鼠出现癫痫与抑郁样症状。黄芪甲苷Ⅳ通过增加TGF-β1表达,提高Smad2磷酸化水平,减少Cleaved-caspase-3的表达,抑制神经元凋亡,最终改善小鼠癫痫和抑郁样症状。

黄芪甲苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质代谢的作用

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响。方法 5周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、高脂高糖组、高脂高糖+AS-Ⅳ[30 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[60 mg/(kg·d)]组、高脂高糖+AS-Ⅳ[120 mg/(kg·d)]组。高脂高糖饮食构建NAFLD小鼠动物模型,同时用不同浓度的AS-Ⅳ[30、60、120 mg/(kg·d)]进行灌胃。正常饮食组给予等体积1%羧甲基纤维素(1%CMC)灌胃,每周测体质量、随机血糖,干预13周后,处死小鼠,留取并称量肝脏,采用H&E染色以及油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积情况。结果高脂高糖诱导的NAFLD小鼠较正常饮食组小鼠的体质量、肝脏湿重及随机血糖增加(P <0.05);AS-Ⅳ未显著减轻NAFLD小鼠的体质量、肝脏湿重及随机血糖(P> 0.05)。与正常饮食组相比,高脂高糖诱导的NAFLD小鼠肝脏脂滴形成增加(P <0.05);而与高脂高糖组相比,不同浓度的AS-Ⅳ干预后,小鼠肝脏脂滴形成减少,以浓度为60 mg/(kg·d)的AS-Ⅳ组最明显(P <0.01)。结论黄芪甲苷Ⅳ能改善非酒精性脂肪肝小鼠的肝脏脂质沉积。

黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇通过STAT3-NF-κB途径对胃癌细胞的作用研究

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇对胃癌细胞的作用及其可能的机制。方法黄芪甲苷Ⅳ和紫杉醇按给药剂量分为0μg/ml组、5μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、40μg/ml组、80μg/ml组和160μg/ml组处理胃癌细胞AGS。CCK-8试剂盒检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2和STAT3-NF-κB途径相关蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果黄芪甲苷Ⅳ在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,黄芪甲苷Ⅳ IC_(50)=63.99μg/ml;紫杉醇在10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,紫杉醇IC_(50)=40.08μg/ml。与对照组相比,黄芪甲苷Ⅳ组、紫杉醇组和联合组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05);与联合组比较,黄芪甲苷Ⅳ组和紫杉醇组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能是通过抑制STAT3-NF-κB途径实现的。

黄芪甲苷Ⅳ通过激活PPAR-γ抑制NF-κB介导的炎症反应减少AD大鼠脑中淀粉样蛋白沉淀

目的探讨黄芪甲苷IV对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑中β淀粉样蛋白和学习记忆功能的影响及其机制。方法将72只老年雄性SD大鼠随机分为6组,对照组、模型组、多奈哌齐组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷高剂量+抑制剂组,每组12只。利用Aβ_(1-42)脑室注射与AlCl3连续灌胃建立AD模型,造模期间持续使用黄芪甲苷或多奈哌齐进行治疗,水迷宫结束后检测大脑组织中Aβ_(1-42)、APP及炎症因子表达,Western blot检测PPAR-γ及炎症相关蛋白表达。结果黄芪甲苷Ⅳ与多奈哌齐疗效一致,能够显著改善大鼠学习认知能力,抑制脑中APP水解成Aβ_(1-42),减少脑中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6表达。黄芪甲苷Ⅳ能够有效升高PPAR-γ蛋白表达,减少NLRP3炎性小体的表达。此外,PPAR-γ抑制剂则逆转黄芪甲苷Ⅳ改善大鼠认知功能的作用,造成大鼠脑中炎症因子含量升高,促进APP水解生成Aβ_(1-42)。结论黄芪甲苷通过增加PPAR-γ蛋白表达,抑制大鼠脑中炎症因子表达,减少APP水解生成Aβ_(1-42),改善大鼠认知学习能力降低。

黄芪甲苷Ⅳ对尿毒症大鼠肾脏损伤的保护及相关机制研究

目的 研究黄芪甲苷Ⅳ对尿毒症模型大鼠肾脏受损的保护作用以及相关分子调控机制。方法 将大鼠分为模型组、黄芪甲苷Ⅳ低剂量组(50 mg·kg^(-1)))、黄芪甲苷Ⅳ高剂量组(100 mg·kg^(-1)))、通路抑制组(Nrf2抑制剂5 mg·kg^(-1)))、高剂量给药+通路抑制组(黄芪甲苷Ⅳ100 mg·kg^(-1))+Nrf2抑制剂5 mg·kg^(-1)))、对照组(假手术组),每组16只。给药干预后电镜下观察大鼠肾血管病变情况;使用ELISA试剂盒检测各组大鼠血清β2微球蛋白(β2-MG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;发光免疫法检测肾脏组织中活性氧(ROS)水平;对血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、核因子E2相关因子2(Nrf2)的共表达进行荧光定位;免疫组织化学法测定血红素氧合酶1(HO-1)、内皮型一氧化氮(eNOS)阳性表达;Western Blot法测定各组细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)蛋白相对表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏毛细血管出现明显的受压狭窄、管腔内皮细胞膨胀肿大,并伴随红细胞积聚等现象,β2-MG、BUN、Scr等毒素因子以及炎症因子TNF-α、IL-6水平明显上调(均P<0.05),肾脏组织中ROS含量、Nrf2+CD31+水平以及HO-1、eNOS表达均明显上调(均P<0.05)。与模型组比较,黄芪甲苷Ⅳ低、高剂量组大鼠肾脏病理受损情况有明显改善,血清β2-MG、BUN、Scr等毒素因子以及炎症因子TNF-α、IL-6、肾脏ROS水平及eNOS表达均明显下调(均P<0.05),Nrf2、HO-1相关蛋白表达明显上升(P<0.05);通路抑制组大鼠肾脏毛细血管受压狭窄、管腔内皮细胞膨胀肿大,并伴随红细胞积聚等现象更加严重,且以上血清及组织中致病机制相关因子指标含量高低与给药组均相反(均P<0.05)。结论 黄芪甲苷Ⅳ对尿毒症大鼠肾脏受损有一定的保护作用,其机制与其对Nrf2/HO-1途径的激活从而介导机体抗炎抗氧化系统激活存在一定联系。

黄芪甲苷Ⅳ防治心力衰竭作用

心力衰竭是各种心血管疾病的严重阶段,严重危害人类的生命健康。黄芪甲苷Ⅳ是中药黄芪的主要有效成分,对心力衰竭有很好的防治作用,作用机制可能与其改善心功能和结构紊乱、减轻心脏损伤、抑制炎症反应、降低氧化应激反应、抑制细胞凋亡、调控细胞自噬、调节钙离子代谢、调控线粒体能量代谢,促进血管生成和降低miRNA-1表达有关。本研究综述黄芪甲苷Ⅳ治疗心力衰竭的最新进展,为黄芪甲苷Ⅳ临床应用提供依据。

黄芪甲苷Ⅳ预防肥胖性高血压的作用机制研究

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AsⅣ)预防肥胖性高血压的作用机制。方法将35只雄性Wistar大鼠分为正常脂肪饲料组(NC组,n=10)和高脂肪饲料组(n=25)。16周后,将18只肥胖大鼠随机分为对照组(n=6)、AsⅣ组(n=6)和AsⅣ+α-bungaratoxin(α-BGT)组(n=6)。测量各组干预前后体质量、血压,血浆和肾组织去甲肾上腺素(NE)水平。采用Western blot或实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组下丘脑组织中瘦素受体(LepRb)、磷酸化信号转换器和转录激活因子-3(p-STAT3)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、细胞因子信号抑制因子(SOCS3)、酪氨酸磷酸酶(PTP1B)、皮质素原(POMC)、神经肽Y(NPY)水平。检测各组下丘脑和脂肪组织中α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)、核因子κB激酶亚单位β/核因子κB抑制剂(IKKβ/NF-KB)和促炎细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的水平。结果与对照组相比,AsⅣ组干预后葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)改善,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);连续干预6周后,对照组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血浆和肾脏组织中NE水平升高,AsⅣ组SBP、DBP和NE水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与NC组相比,对照组大鼠血浆瘦素水平升高,LepRb mRAN表达降低,瘦素信号分子p-STAT3的表达下降,p-PI3K、SOCS3 mRNA和PTP1B mRNA的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。而AsⅣ组p-STAT3、LepRb mRNA和POMC mRNA表达增加,p-PI3K、SOCS3 mRNA和PTP1B mRNA水平降低。与对照组比较,AsⅣ组α7nAChR蛋白和mRNA表达升高,p-IKKβ、NF-KB蛋白及其mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与AsⅣ组比较,AsⅣ+α-BGT组α7nAChR阻断剂α-BGT降低了α7nAChR mRNA和蛋白表达水平,IKKβmRNA、NF-KB mRNA、p-IKKβ、NF-KB、IL-1β和TNF-α蛋白水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组和AsⅣ+α-BGT组比较,AsⅣ组α7nAChR mRNA表达升高,p-IKKβ、NF-KB、IL-1β、TNF-α表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AsⅣ可通过抑制炎症反应和改善瘦素抵抗有效预防肥胖相关高血压,AsⅣ的改善作用与α7nAchR表达增加密切相关。

黄芪甲苷孵育的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的急性肾损伤小鼠的保护作用

目的:建立顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠模型,尾静脉输注人脂肪源性干细胞(hADSC)及黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞(Ast-hADSC),探讨其对AKI小鼠肾损伤的修复作用。方法:应用PKH26标记hADSC及Ast-hADSC;雄性BALB/C裸鼠随机分为4组(normal组、model组、hADSC及Ast-hADSC干预组),干预组及模型组腹腔注射顺铂建立AKI模型,于建模后24 h尾静脉输注100μl hADSC及Ast-hADSC悬液,模型组给予等量生理盐水。分别留取建模后24 h及静脉输注后1 d、3 d、7 d、14 d小鼠血清及肾组织标本,检测血Scr、BUN水平,HE染色观察肾组织病理变化,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,激光共聚焦观察hADSC及Ast-hADSC在小鼠肾组织的分布。结果:模型组小鼠Scr、BUN、肾组织病理改变及细胞凋亡区域均显著高于正常组及细胞干预组,其中Scr、BUN分别在第3天、第7天达到最高值,肾小管损伤严重;相同时间点Ast-hADSC组肾组织病理改变及细胞凋亡区域较hADSC组明显降低,至14 d可基本恢复至正常水平;激光共聚焦显示PKH26标记的hADSC及Ast-hADSC于14 d在小鼠肾组织有少量表达,其中少量红色荧光与肾小管上皮细胞呈融合状态。结论:hADSC移植可减轻AKI小鼠肾脏结构和功能的损伤;经Ast孵育后,可在一定程度上提高hADSC对受损肾组织的修复作用。

不同厂家产黄芪注射液中黄芪甲苷的含量考察

目的 :以黄芪甲苷为含量测定指标 ,考察不同生产厂家生产的黄芪注射液的质量。方法 :建立HPLC ELSD测定黄芪甲苷的方法 ,对黄芪注射液中的黄芪甲苷进行含量测定。HypersilODS2 C18(2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm)色谱柱 ,柱温 :4 0℃ ,流动相 :乙腈 水 (36∶6 4 ) ,流速 :1.0mL·min-1,ELSD检测器漂移管温度 :10 0℃ ,气体 (空气 )流速 :3.0L·min-1。结果 :黄芪甲苷在 2 .4～ 12 μg呈良好的线性关系 ,相关系数为r=0 .9997,加样回收率为 10 1.6 % ,RSD为 2 .9% ,n =5。测定了 5个厂家生产的 10批黄芪注射液 ,结果样品间的黄芪甲苷含量的差异较大。结论 :用HPLC ELSD测定黄芪注射液中黄芪甲苷含量的方法快速简便 ,灵敏度高 ,结果可靠 ,重现性较好 ,可作为黄芪注射液质量评价的依据。目前 ,商品黄芪注射液中黄芪甲苷含量差异较大 。

黄芪甲苷IV减轻尿毒症模型大鼠肾血管内皮损伤

目的探讨黄芪甲苷IV通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路对尿毒症模型大鼠血管内皮的保护作用。方法将大鼠分为假手术组、模型组、黄芪甲苷低(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组、Nrf2抑制剂组(2 mg/kg)、黄芪甲苷高剂量+Nrf2抑制剂(200 mg/kg+2 mg/kg)组,每组12只。各组腹腔注射干预给药结束后,用酶联免疫吸附法(ELISA)测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)、血β2-微球蛋白(β2-MG)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;透射电镜观察肾组织血管结构病变;免疫荧光法检测活性氧簇(ROS);免疫荧光共定位法测血管内皮标志物CD31与Nrf2在肾组织中表达;免疫组化法检测肾组织HO-1及血管内皮损伤相关标志物-内皮型一氧化氮(eNOS)在肾组织中表达;蛋白免疫印迹法检测血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠肾小管周毛细血管管腔红细胞聚集、内皮细胞肿胀及增大、管腔狭窄及受压严重;Scr、BUN、β2-MG、TNF-α及IL-6等分泌量变化明显(P<0.05);肾组织ROS、肾血管组织HO-1及eNOS阳性表达;CD31与Nrf2阳性共表达、肾组织ANGPTL6及MCP-1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,黄芪甲苷低、高剂量组大鼠肾小管周毛细血管管腔红细胞聚集、内皮细胞肿胀及增大缓解;血清毒素及炎性因子水平、肾组织ROS、肾血管内皮损伤相关蛋白ANGPTL6、MCP-1、eNOS表达降低(P<0.05);肾血管组织HO-1、CD31与Nrf2阳性共表达水平均升高(P<0.05);Nrf2抑制剂组大鼠肾小管周毛细血管管腔红细胞聚集、内皮细胞肿胀、增大进一步加重。上述指标变化趋势与黄芪甲苷Ⅳ剂量组相反(P<0.05)。结论黄芪甲苷Ⅳ可能通过促进Nrf2/HO-1通路介导的抗炎、抗氧化途径激活,减轻尿毒症大鼠肾血管内皮损伤。

黄芪甲苷对心力衰竭保护作用机制的研究进展

心力衰竭(HF)已成为严重威胁人类健康的全球性疾病之一,而中药单体将为HF新药开发提供有价值的化合物。黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)是黄芪的主要有效成分,对HF具有保护作用。该文综述AS-Ⅳ通过保护心肌缺血、调节肌浆网钙离子(Ca^(2+))泵、促进血管生成、改善心肌能量代谢、抑制心肌纤维化、减少心肌细胞凋亡、抗炎性反应等方面治疗HF的研究进展及不足,以期为临床应用提供参考依据。

黄芪甲苷Ⅳ干预低糖介导的肿瘤免疫抑制微环境作用及其机制研究

目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ(astragaloside Ⅳ,As-Ⅳ)干预低糖介导的肿瘤免疫抑制微环境作用及其分子机制研究。方法:采用MTT实验检测As-Ⅳ在体外低糖微环境下对CD4+T细胞增殖率;采用ELISA实验和qPCR实验检测白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、CD40L和转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平;采用Western blot法检测CD4+T细胞葡萄糖转运蛋白(Glut-1)、糖酵解关键酶[糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、丙酮酸激酶(PK)]、AKT/mTOR信号和AKT/GSK3β信号通路活性的表达;采用分子对接和加入AKT抑制剂实验进行验证;采用B16-PKM2-OE建立低糖肿瘤微环境动物模型进行验证。结果:MTT结果显示,As-Ⅳ能够促进低糖微环境下CD4+T细胞的增殖(P<0.05);ELISA实验和qPCR实验检测结果显示,As-Ⅳ可以提高肿瘤组织中IL-2、IFN-γ、CD40L水平,降低TGF-β1的水平(P<0.05);Western blot法检测结果显示,As-Ⅳ能够促进CD4+T细胞细胞膜表面Glut-1蛋白表达,同时呈浓度依赖性上调糖酵解关键酶表达,激活AKT/mTOR信号和AKT/GSK-3β信号;分子对接技术和加入AKT抑制剂实验结果提示As-Ⅳ激活AKT/mTOR信号和AKT/GSK-3β信号;动物实验结果显示As-Ⅳ通过激活低糖微环境下CD4+T细胞增殖与活化发挥抗肿瘤作用。结论:As-Ⅳ通过激活AKT/Glut信号促进低糖微环境下CD4+T细胞增殖与活化发挥抗肿瘤作用。

黄芪甲苷Ⅳ对2型糖尿病大鼠视网膜的保护作用

目的:本研究旨在探讨黄芪甲苷Ⅳ对高脂肪饮食和链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠视网膜病变(DR)的作用。方法:雄性Wistar大鼠分为:正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷Ⅳ0.02、0.04、0.08 g/kg组和羟苯磺酸钙0.5 g/kg组。高脂肪饮食和STZ诱导DR大鼠模型,各组大鼠灌胃相应药物或生理盐水,1次/d,连续12 w。称体质量,测定空腹血糖(FBG)和血糖化血红蛋白(HbA1c)含量;眼底照相造影估算视网膜血管直径;伊文思蓝染料外渗技术测定视网膜血管通透性;测定视网膜白细胞数目;试剂盒检测视网膜中抗氧化标志物和促炎细胞因子水平;Western blot法检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子A(VEGF-A)蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体质量明显降低,血糖、糖化血红蛋白含量明显升高(P<0.05),出现血管渗漏并伴有血管扩张,大鼠视网膜渗漏增加,白细胞面积明显增加(P<0.05),视网膜中SOD、CAT和GSH活力或含量明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显升高(P<0.05),VCAM-1、HIF-1α和VEGF-A蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型对照组比较,黄芪甲苷IV 0.04、0.08 g/kg组大鼠体质量明显增加,血糖含量和糖化血红蛋白含量明显降低(P<0.05),大鼠视网膜小动脉和小静脉轻度扩张,视网膜渗漏和白细胞面积明显减少(P<0.05),视网膜中SOD、CAT和GSH活力或含量明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6含量和VCAM-1、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:黄芪甲苷IV对DR的保护作用可能与抗炎、抗氧化、下调HIF-1α/VEGF-A信号通路有关。

黄芪甲苷Ⅳ对去氧神经鞘氨醇导致肾脏细胞损伤的作用

目的建立去氧神经鞘氨醇(doxSA)诱导的肾脏细胞损伤模型,探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST)通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对doxSA造成肾脏细胞损伤的作用。方法对HK-2细胞进行培养,将培养的细胞通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测活性后,根据是否加入doxSA和AST随机分为对照(Cont)组、doxSA组、doxSA+AST组、AST组。各组干预给药结束后,用CellTiter-Glo■2.0试剂盒测量肾脏上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)含量;用免疫荧光法检测线粒体活性和形态;聚合酶链反应(PCR)检测血红素氧化酶1(HO-1)和NAD(P)H脱氢酶醌1(NQO1)的mRNA水平;细胞转染测肾脏上皮细胞的氧化应激。用方差分析评估各组差异是否有统计学意义。结果在62.5μg·mL^(-1)浓度下,doxSA有明显的肾脏细胞损害作用,后续实验使用62.5μg·mL^(-1)的doxSA处理HK-2细胞建立doxSA。Cont组、doxSA组、doxSA+AST组和AST组的ATP含量(百分数)分别为(100.00±2.21)%、(44.06±3.61)%、(64.51±4.20)%和(100.00±14.21)%,4组不同处理方式的ATP含量差异有统计学意义,F=38.718,P<0.001。线粒体功能及形态检测显示,doxSA对细胞的毒副作用主要来自于线粒体损伤,表现为线粒体活性降低和数目减少。AST干预可以恢复受损线粒体的活性和形态,对线粒体有保护作用。细胞氧化应激水平检测结果显示,与Cont组相比,doxSA组的热力值更高,说明细胞氧化应激明显;与doxSA组相比,doxSA+AST组的热力值变低,表明AST干预显著降低细胞氧化应激水平。doxSA组肾脏上皮细胞Nrf2下游基因HO-1和NQO1 mRNA表达量分别为0.47±0.03和0.34±0.01,较正常Cont组的0.98±0.07和0.96±0.12降低50%以上(P<0.001),AST干预后细胞HO-1和NQO1 mRNA表达值分别为1.37±0.16和1.72±0.12,较doxSA组的0.47±0.03和0.34±0.01升高,差异有统计学意义(P=0.019),表明AST干预后细胞Nrf2通路被激活。结论AST增加HO-1、NQO1的表达和线粒体活性,发挥抗氧化作用,AST通过Nrf2通路介导的抗氧化途径激活,发挥肾脏保护作用。