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苎麻线粒体基因CoxⅡ和atpA与细胞质雄性不育相关性分析 被引量:13
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作者 段继强 李建永 +2 位作者 杜光辉 梁雪妮 刘飞虎 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期434-445,共12页
【目的】探讨线粒体CoxⅡ和atpA基因与苎麻CMS的关系。【方法】根据GenBank报道的双子叶植物线粒体CoxⅡ和atpA基因编码区高度保守序列设计简并引物,通过PCR技术从苎麻细胞质雄性不育系、保持系和恢复系(简称"三系")mtDNA中... 【目的】探讨线粒体CoxⅡ和atpA基因与苎麻CMS的关系。【方法】根据GenBank报道的双子叶植物线粒体CoxⅡ和atpA基因编码区高度保守序列设计简并引物,通过PCR技术从苎麻细胞质雄性不育系、保持系和恢复系(简称"三系")mtDNA中扩增目的基因片段;采用DNAWalking策略从3′端和5′端扩增基因片段的未知侧翼序列,分离完整的线粒体CoxⅡ、atpA基因;基于全基因序列和基因表达(RT-PCR法)分析这两个基因在苎麻"三系"间的差异。【结果】分离的苎麻CoxⅡ和atpA基因片段与GenBank中一些双子叶植物同类基因的同源性分别高达95%和97%以上,获得的CoxⅡ、atpA全基因包含了完整的开放阅读框。"三系"的CoxⅡ基因在mtDNA水平、转录水平、蛋白质水平上均无明显差异。雄性不育系atpA基因在mtDNA水平、氨基酸序列和蛋白质二级结构上与保持系和恢复系存在比较明显的差异;RT-PCR分析还表明,不育系atpA基因在现蕾期和开花后期的表达量明显低于可育系。【结论】CoxⅡ基因与苎麻CMS可能无关,而不育系atpA基因的序列变异和/或异常表达可能与苎麻CMS关系密切。 展开更多
关键词 苎麻 细胞质雄性不育 CoxⅡ基因 atpa基因 RT-PCR
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川草2号老芒麦(Elymus sibiricus L.)atpA基因的克隆及其调控表达 被引量:11
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作者 何文兴 徐莺 +3 位作者 唐琳 魏琴 李静 陈放 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期67-74,共8页
ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atp... ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atpA基因全长cDNA为1 754 bp,开放阅读框(ORF) 长1 518 bp,编码505个氨基酸. 氨基酸序列与小麦、水稻、玉米atpA基因分别具有95%、94%、94%的相似性. 对2℃低温胁迫及解除胁迫后恢复过程中共13个时段的RNA印迹分析表明,atpA基因在低温胁迫12 h转录受到强烈抑制,在低温胁迫开始后的4~8 h及解除胁迫后的16~24 h,其转录水平明显强于对照. 实验结果为揭示CF1 α亚基对调控ATPase在植物御冷性反应的作用,以及α亚基在植物低温信号转导中的作用提供了新的线索. 展开更多
关键词 atpa基因 mRNA差异显示(DDRT-PCR) 低温胁迫 川草2号老芒麦
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莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻中转录活性的检测 被引量:3
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作者 潘卫东 吕玉民 +3 位作者 张贵星 牛向丽 侯桂琴 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期35-38,共4页
目的 :验证莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的转录活性。方法 :以绿色荧光蛋白 (En hancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)为报告基因 ,将报告基因插入莱茵衣藻叶绿体atpA启动子与rbcL终止子之间 ,构建载体pSP71 -atpA -EGF... 目的 :验证莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的转录活性。方法 :以绿色荧光蛋白 (En hancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)为报告基因 ,将报告基因插入莱茵衣藻叶绿体atpA启动子与rbcL终止子之间 ,构建载体pSP71 -atpA -EGFP ,用基因枪法转入杜氏盐藻叶绿体中 ,通过荧光显微镜观察EGFP基因在atpA启动子控制下的表达 ,以验证atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的生物活性。结果 :荧光显微镜下观察到EGFP在杜氏盐藻叶绿体中得到了表达。结论 :莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中有转录起始活性 。 展开更多
关键词 盐藻 莱茵衣藻 叶绿体 atpa 启动子
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PCR法扩增盐藻叶绿体atpA基因 被引量:3
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作者 侯桂琴 王宁 +4 位作者 谢华 姜国忠 柴玉荣 王天云 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期12-15,共4页
目的 :克隆杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段。方法 :把GenBank中近 1 0种藻类的atpA全基因的氨基酸序列进行比较 ,设计简并引物 ,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增atpA基因片段 ,然后胶回收所扩片段并与T -vector相连 ,转化大肠杆菌JM1 0 9... 目的 :克隆杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段。方法 :把GenBank中近 1 0种藻类的atpA全基因的氨基酸序列进行比较 ,设计简并引物 ,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增atpA基因片段 ,然后胶回收所扩片段并与T -vector相连 ,转化大肠杆菌JM1 0 9,挑阳性克隆鉴定 ,并测序 ,再将序列与所选藻类有关序列比较同源性。结果 :从盐藻叶绿体基因组中扩增出约 4 0 0bp的片段。测序结果显示此片段长 4 0 5bp ,推导的氨基酸序列与莱茵衣藻的同源性为 92 % ,普通小球藻为 88% ,原始绿藻为 87% ,卵形肾藻为 86 % ,Cyanidioschyzonmerolae为 85 %。结论 展开更多
关键词 杜氏盐藻 叶绿体 atpa 简并引物
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基因atpA、purHD和ndh的过量表达对大肠杆菌DH5α生长的影响 被引量:2
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作者 张艳军 张晓云 +1 位作者 李志敏 叶勤 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1042-1047,共6页
【目的】理解大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株DA19在基本培养基中生长和乙酸积累差异的机理。【方法】根据前期针对两个菌株蛋白质组和培养中物料及能量平衡的分析,通过PCR分别扩增大肠杆菌DH5α及DA19的atpIBEFHAGDC基因、purHD基因和与... 【目的】理解大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株DA19在基本培养基中生长和乙酸积累差异的机理。【方法】根据前期针对两个菌株蛋白质组和培养中物料及能量平衡的分析,通过PCR分别扩增大肠杆菌DH5α及DA19的atpIBEFHAGDC基因、purHD基因和与NADH氧化代谢相关ndh基因及其各自的调节区,以及NADH脱氢酶Ⅰ基因(nuoA-N)的调节区。将atpA、purHD和ndh基因分别克隆到载体pTrc99a中,转化DH5α,研究基因过量表达对生长的影响。【结果】测序结果表明两个菌株的这些DNA序列与公布的大肠杆菌K-12的相应序列完全一致,在DH5α菌株中分别过量表达atpA、purHD或ndh基因可以在一定程度上改善菌体的生长。【结论】过量表达purHD或ndh基因比过量表达atpA基因的效果更好,但与DA19的生长相比仍然存在较大差距,反映了代谢全局调节的重要性。 展开更多
关键词 大肠杆菌 表达 atpa purH ndh
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水稻线粒体atpA基因的克隆及其与细胞质雄性不育的关系 被引量:18
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作者 李大东 王斌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期1-4,28,共5页
本研究以水稻BT型细胞质雄性不育系秋光A和相应的保持系秋光B为材料,提取线粒体DNA,用限制性内切酶完全酶解,以玉米线粒体atp A基因和菠菜叶绿体atp A基因做为探针,进行分子杂交,将保持系线粒体atpA基因定位在3.5 kb的Bam HI酶切片段上... 本研究以水稻BT型细胞质雄性不育系秋光A和相应的保持系秋光B为材料,提取线粒体DNA,用限制性内切酶完全酶解,以玉米线粒体atp A基因和菠菜叶绿体atp A基因做为探针,进行分子杂交,将保持系线粒体atpA基因定位在3.5 kb的Bam HI酶切片段上,并且以pBR322为载体,克隆了这一片段。另外,在Bam HI完全酶解谱带的杂交结果中,不育系线粒体基因组中有两条阳性杂交带,分别是3.5kb和2.9kb,而保持系线粒体基因组中只有3.5kb一条阳性杂交带,因而认为水稻不育系线粒体基因组中可能有两个atp A基因拷贝,而相应的保持系线粒体基因组中只有一个atp A基因拷贝。 展开更多
关键词 水稻 atpa基因 胞质雄性不育
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向日葵细胞质雄性不育系线粒体基因组atpA位点的研究 被引量:6
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作者 季静 王罡 +2 位作者 H.Serieys E.Belhassen A.Bervillé 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1998年第4期367-374,共8页
对21种向日葵细胞质雄性不育(CMS)品系的线粒体基因组atpA基因位点处的DNA分子变异进行了分析和研究。首次通过基因组DNA及mtDNA与一含有部分atpA基因和orf H522的4.1kb探针Southern分子杂交分析及mtDNA限制性内切酶图谱分析证明,在atp... 对21种向日葵细胞质雄性不育(CMS)品系的线粒体基因组atpA基因位点处的DNA分子变异进行了分析和研究。首次通过基因组DNA及mtDNA与一含有部分atpA基因和orf H522的4.1kb探针Southern分子杂交分析及mtDNA限制性内切酶图谱分析证明,在atpA基因位点区域有4种DNA序列存在于21种细胞质雄性不育品系中。首次指出在向日葵CMS品系中即使细胞质来源相同,不育基因却有多种存在形式,并通过实验结果推测了导致细胞质雄性不育的机理。 展开更多
关键词 向日葵 CMS atpa基因位点 orfH522
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杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 侯桂琴 刘红涛 +2 位作者 潘卫东 薛乐勋 姜东亚 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期474-478,共5页
根据莱因衣藻、卵形肾藻、普通小球藻等10种藻类的atpA全基因氨基酸高度保守序列,设计简并引物,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增出约400bp的片段,将该片段连接到T-vector上进行序列测定。结果表明,核苷酸长度为405bp,编码135个氨基酸... 根据莱因衣藻、卵形肾藻、普通小球藻等10种藻类的atpA全基因氨基酸高度保守序列,设计简并引物,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增出约400bp的片段,将该片段连接到T-vector上进行序列测定。结果表明,核苷酸长度为405bp,编码135个氨基酸。推导的氨基酸序列与莱因衣藻的同源性为92%,普通小球藻88%,Mesostigmaviride87%,卵形肾藻86%,Cyanidioschyzonmerolae85%。以所克隆的DNA片段为探针,与盐藻叶绿体基因组进行SouthernBlot杂交结果有明显的杂交信号。据此可推断本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段。该基因序列已被GenBank收录,接受号为AY435096。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 叶绿体 atpa 简并引物
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基于液相色谱/四极杆飞行时间质谱的产ATPA的芽胞杆菌筛选 被引量:1
9
作者 陈德局 陈峥 +3 位作者 张海峰 陈小强 朱育菁 刘波 《氨基酸和生物资源》 CAS 2016年第4期37-41,共5页
本文采用液相-四级杆飞行时间质谱的方法筛选产2-amino-3-(3-hydroxy-5-tert-butylisoxazol-4-yl)propanoic acid(ATPA)的芽胞杆菌菌株。通过分析50株芽胞杆菌菌株发酵液中胞外化合物成分,筛选出合成ATPA的2株芽胞杆菌,为嗜碱芽胞杆菌(B... 本文采用液相-四级杆飞行时间质谱的方法筛选产2-amino-3-(3-hydroxy-5-tert-butylisoxazol-4-yl)propanoic acid(ATPA)的芽胞杆菌菌株。通过分析50株芽胞杆菌菌株发酵液中胞外化合物成分,筛选出合成ATPA的2株芽胞杆菌,为嗜碱芽胞杆菌(Bacillus alcalophilus)FJAT-10014和栗褐芽胞杆菌(Bacillus plakortidis)FJAT-8757,该成分在发酵液中的相对含量分别为1.43%和1.28%,ATPA与色谱库检索得分(score)分别为93.41和95.01。 展开更多
关键词 液相色谱/四极杆飞行时间质谱(LC-QTOF MS) 芽胞杆菌 α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(atpa) 红藻氨酸受体(KARs)
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基因加倍对棉花线粒体atpA基因RNA编辑率的影响 被引量:1
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作者 张晓 李才华 +6 位作者 王婧 张兰兰 牟晓雨 王昕玥 甘刘美 周鹏展 张锐 《生物技术进展》 2022年第5期737-745,共9页
植物线粒体基因组中存在RNA编辑(C-U)现象,且有完全编辑和部分编辑之分。棉花细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterile,CMS)系和保持系线粒体基因组中atpA基因各有两个拷贝,存在基因加倍现象,但atpA基因加倍对其RNA编辑率的影响尚不清... 植物线粒体基因组中存在RNA编辑(C-U)现象,且有完全编辑和部分编辑之分。棉花细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterile,CMS)系和保持系线粒体基因组中atpA基因各有两个拷贝,存在基因加倍现象,但atpA基因加倍对其RNA编辑率的影响尚不清楚。通过Southern blot、染色体步移技术确定出该基因每个拷贝具体的DNA序列,发现一个拷贝是完整的,一个拷贝是截短的。用RT-PCR、环化RT-PCR方法扩增出每个拷贝相应的cDNA,结果表明:棉花CMS系和保持系atpA基因完整拷贝和截短型拷贝都转录。完整拷贝、截短型拷贝中分别存在6、4个RNA编辑位点。完整拷贝6个RNA编辑位点在保持系中的编辑率都是100%;在CMS系中编辑率分别是100%、85%、100%、92%、100%、100%。截短型拷贝4个位点在保持系中的编辑率分别是55%、37%、55%、27%;在CMS系中编辑率分别是100%、90%、100%、100%。据此推测截短型拷贝在保持系中承受选择压较小,很可能已失去功能;而在CMS系中仍承受较大选择压,很可能具有新的功能。 展开更多
关键词 棉花 线粒体基因组 atpa 基因加倍 RNA编辑
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德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备
11
作者 刘飞 焦月华 +3 位作者 郭文奎 于微 谷春涛 霍贵成 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第3期21-24,共4页
利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西... 利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔。利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体。最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性。结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20 000和1∶80 000;Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合。本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析。 展开更多
关键词 德氏乳杆菌保加利亚亚种 atpa抗原 蛋白表达 抗体制备
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早园竹叶绿体atpA基因序列及系统进化分析 被引量:4
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作者 高家翔 胖铁良 +3 位作者 唐征 张兰 何承忠 杨凯 《西南林学院学报》 2009年第2期31-36,共6页
在构建叶绿体DNA基因组文库的基础上,克隆了早园竹叶绿体atpA基因,与禾本科水稻、玉米等11种植物atpA基因的SNP对比分析发现,早园竹与供试禾本科植物叶绿体atpA基因序列间共有110个SNP位点,其中与水稻Indica,Japonica和野生稻之间仅有1... 在构建叶绿体DNA基因组文库的基础上,克隆了早园竹叶绿体atpA基因,与禾本科水稻、玉米等11种植物atpA基因的SNP对比分析发现,早园竹与供试禾本科植物叶绿体atpA基因序列间共有110个SNP位点,其中与水稻Indica,Japonica和野生稻之间仅有1个SNP位点;与玉米、高粱、甘蔗及杂交甘蔗之间有2个SNP位点;而与小麦、大麦、匍茎剪股颖和黑麦草之间的SNP位点较多。基于atpA基因序列和编码氨基酸序列构建的Neighbor-joining系统进化树显示,供试的禾本科植物在系统进化上可划为2个进化类群和4个进化亚群,水稻与早园竹处于同一亚群。表明早园竹在进化关系上与水稻最近,其次与甘蔗、玉米和高粱进化关系较近,而与麦类及其近缘植物的进化关系较远。 展开更多
关键词 早园竹 禾本科植物 atpa基因 序列分析 系统关系
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紫花苜蓿atpA基因的克隆及表达模式分析 被引量:1
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作者 李莉萍 李旭漉 +2 位作者 张晓捷 谷丽丽 张博 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1413-1421,共9页
叶绿体atpA基因位于ATP合酶的CF_(1)上,编码α亚基,是光合作用不可缺少的关键基因。本研究利用RT-PCR技术,从‘新疆大叶’苜蓿(Medicago sativa L.‘Xinjiang Daye’)中克隆出atpA基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术进... 叶绿体atpA基因位于ATP合酶的CF_(1)上,编码α亚基,是光合作用不可缺少的关键基因。本研究利用RT-PCR技术,从‘新疆大叶’苜蓿(Medicago sativa L.‘Xinjiang Daye’)中克隆出atpA基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术进行基因表达模式检测。结果显示,MsatpA基因编码510个氨基酸,相对分子质量为55.71 KD,等电点为5.22。MsAtpA蛋白含有多个磷酸化位点且无跨膜结构和信号肽,二级结构中α-螺旋占比最高;亚细胞定位预测该基因编码的蛋白位于叶绿体中,与同为豆科苜蓿属的黄花苜蓿(Medicago falcata)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)的AtpA氨基酸序列同源性较高。表达模式检测结果显示,MsatpA基因在叶中的表达量最高,根中最少;结荚期的基因表达量显著高于其他发育时期;MsatpA基因响应低温、高温、盐和渗透胁迫应答,且呈现出不同的表达特点。研究结果为紫花苜蓿atpA基因功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 atpa 紫花苜蓿 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
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atpA基因缺失对貉源大肠杆菌生物学特性的影响 被引量:1
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作者 侯冠欣 马亚娟 +5 位作者 王苗 孙欣艺 王利丽 张闫 张春晓 张志强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期794-800,共7页
为研究编码ATP合酶α亚基对大肠杆菌生物学特性的影响,本研究利用λ-Red同源重组技术构建貉源致病性大肠杆菌LCE-1(WT)atpA基因缺失菌株LCE-1ΔatpA(KO)和基因回补株LCE-1ΔatpA/pBR322-atpA(RS),并均采用PCR和测序鉴定。在此基础上,进... 为研究编码ATP合酶α亚基对大肠杆菌生物学特性的影响,本研究利用λ-Red同源重组技术构建貉源致病性大肠杆菌LCE-1(WT)atpA基因缺失菌株LCE-1ΔatpA(KO)和基因回补株LCE-1ΔatpA/pBR322-atpA(RS),并均采用PCR和测序鉴定。在此基础上,进一步分析atpA基因缺失对大肠杆菌的生长特性、生化特性的影响,结果显示,在LB培养基中KO菌株与WT菌株相比生长无明显差异,但在M9培养基中生长明显减缓;KO菌株的部分生化特性也发生了变化,对蔗糖、肌醇的分解利用发生改变,α-葡萄糖苷酶、β葡萄糖醛酸酶、精氨酸双水解酶活性也发生了改变。通过试管及微量结晶紫法分析3株菌生物被膜(BF)的形成能力,结果显示atp基因缺失能够显著降低大肠杆菌BF的形成能力(P<0.01)。对这3株菌进行酸应激、碱应激、热应激以及氧化应激测定这3种菌株对环境变化的应激能力,结果显示atp基因缺失能够显著提高大肠杆菌对酸应激、碱应激、热应激和氧化应激的敏感性。通过K-B纸片法对这3株菌的耐药性进行测定,结果显示KO菌株对多种抗生素的敏感性有所增强。利用KO、WT菌株分别感染小鼠进行致病性试验,结果显示,WT菌株的LD50为4.12×10^(7) cfu/mL,KO菌株的LD50为3.43×10^(8) cfu/mL,KO菌株毒力下降1个数量级。本研究构建了大肠杆菌的atpA基因缺失株,并证实AtpA蛋白在细菌的生化特性以及应对各种应激过程中具有重要作用,是大肠杆菌一个重要的多功能蛋白。 展开更多
关键词 貉源致病性大肠杆菌 λ-Red同源重组 atpa基因缺失
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Applied anatomy study of anterior tragal perforating artery(ATPA)
15
作者 吕文亮 《外科研究与新技术》 2011年第4期270-270,共1页
Objective To investigate anterior tragal perforating aftery( ATPA) and provide anatomic basis for flap derived from preauricular area. Methods Twenty ( 40 sides) cadaver heads fixed in 10% formalin solution and perfus... Objective To investigate anterior tragal perforating aftery( ATPA) and provide anatomic basis for flap derived from preauricular area. Methods Twenty ( 40 sides) cadaver heads fixed in 10% formalin solution and perfused with red - colored latex were used to perform gross anatomy study. Two heads of fresh cadaver 展开更多
关键词 atpa Applied anatomy study of anterior tragal perforating artery SMAS
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优化的反向PCR结合TAIL-PCR法克隆棉花线粒体atpA双拷贝基因及其侧翼序列 被引量:8
16
作者 张晓 张锐 +7 位作者 孙国清 史计 孟志刚 周焘 侯思宇 梁成真 于源华 郭三堆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期104-115,共12页
双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的i... 双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的iPCR方法对该酶切产物进行自连和扩增,将2个拷贝的侧翼序列区分开。根据iPCR结果,进一步用TAIL-PCR扩增更远侧翼的序列。利用这套方法,获得了棉花可育胞质和不育胞质线粒体双拷贝atpA基因的所有EcoR I限制片段(2.2~5.1 kb)和HindⅢ限制片段(8.5~11.7 kb),克隆到2个拷贝各自的侧翼序列。研究结果说明,优化的iPCR与TAIL-PCR相结合是克隆双拷贝基因及其侧翼序列的一种高效方法。 展开更多
关键词 反向PCR TAIL-PCR 细胞质雄性不育 棉花 atpa 双拷贝基因 侧翼序列
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新型维甲酸衍生物ATPA对白血病细胞株K562增殖及分化的影响 被引量:6
17
作者 洪凡青 陈飞虎 +4 位作者 王璐 陈慧慧 吴菲 吴繁荣 汪渊 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期28-33,共6页
目的:本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基依曲替酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl acitretinate,ATPA)对白血病K562细胞体外增殖和分化的作用。方法:用不同浓度的ATPA作用白血病K562细胞后,在体外通过MTT法检测和... 目的:本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基依曲替酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl acitretinate,ATPA)对白血病K562细胞体外增殖和分化的作用。方法:用不同浓度的ATPA作用白血病K562细胞后,在体外通过MTT法检测和绘制细胞生长曲线来分析细胞增殖;瑞特染色法观察细胞形态学改变;氯化硝基四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium chloride,NBT)还原实验分析细胞的分化指标;采用FCM法检测细胞表面分化抗原及细胞周期的变化。结果:ATPA呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,明显的抑制作用从药物作用48h后开始出现,在72h后作用更明显。倒置显微镜下观察发现ATPA作用后K562细胞形态趋向成熟,NBT阳性细胞率增加;G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,呈G0/G1期阻滞;细胞表面分化抗原CD71表达减少。结论:ATPA对白血病K562细胞具有抑制增殖和一定的诱导分化作用。 展开更多
关键词 白血病 实验性 阿维A 细胞增殖 细胞分化 K562细胞 维甲酸衍生物 atpa
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GluR5、GluR6在马桑内酯与ATPA致痫的大鼠星形胶质细胞中的不同表达
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作者 彭芳 李劲梅 +2 位作者 李琼 姚治平 周东 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期590-594,共5页
目的探讨GluR5、GluR6在马桑内酯与ATPA致痫的大鼠星形胶质细胞中的不同表达及其在致痫模型中可能的作用机制。方法采用ATPA和马桑内酯(coriaria lactone,CL)分别诱导处理大鼠星形胶质细胞,加入等量生理盐水培养的星形胶质细胞作为对照... 目的探讨GluR5、GluR6在马桑内酯与ATPA致痫的大鼠星形胶质细胞中的不同表达及其在致痫模型中可能的作用机制。方法采用ATPA和马桑内酯(coriaria lactone,CL)分别诱导处理大鼠星形胶质细胞,加入等量生理盐水培养的星形胶质细胞作为对照组,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中GluR5、GluR6的mRNA和蛋白质水平。结果 ATPA作用后星形胶质细胞GluR5的mRNA和蛋白质表达较对照组升高(P<0.05),GluR6的表达较对照组无明显变化(P>0.05);CL作用后星形胶质细胞GluR5和GluR6表达均明显降低(P<0.05)。结论 ATPA上调星形胶质细胞的GluR5受体,而CL下调星形胶质细胞的GluR5、GluR6受体,提示GluR5、GluR6在不同致痫剂诱导的癫痫活动中有不同的作用机制,CL对GluR5和GluR6可能存在负反馈调节,具体分子机制尚需进一步研究。 展开更多
关键词 癫痫 GluR5 GLUR6 马桑内酯 atpa
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伊蚊V-ATPA基因RNAi干涉载体构建及其转基因衣藻对伊蚊致死作用
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作者 费小雯 肖洒 +4 位作者 贺长皓 李亚军 黄晓晴 李江月 邓晓东 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1961-1969,共9页
蚊媒传病严重危害全世界人类的生命健康,其中,伊蚊在传播疾病方面扮演着十分重要的角色,是登革热、寨卡病毒病、黄热病、基孔肯雅病的媒介昆虫。因此,对伊蚊的控制在防治上述传染病中起着重要的作用。本项研究构建了伊蚊V-ATPA基因的RNA... 蚊媒传病严重危害全世界人类的生命健康,其中,伊蚊在传播疾病方面扮演着十分重要的角色,是登革热、寨卡病毒病、黄热病、基孔肯雅病的媒介昆虫。因此,对伊蚊的控制在防治上述传染病中起着重要的作用。本项研究构建了伊蚊V-ATPA基因的RNAi表达载体pMaa7IR/V-ATPAIR,通过玻璃珠法转化莱茵衣藻(Chlamydomonas reinharditii),得到的转基因藻株喂饲伊蚊幼虫,结果显示pMaa7IR/V-ATPAIR转基因藻株对伊蚊幼虫的成活率、化蛹时间和数量、成虫羽化时间和数量均存在较大的影响。V-ATPA RNAi转基因藻株对伊蚊有一定的致死作用。由于微藻是蚊子幼虫天然食物,在自然界广泛存在,并且目前小球藻,螺旋藻,衣藻等绿藻门微藻均可进行工厂化大规模生产,技术成熟,生产成本低廉,所以可以长期大规模投放在封闭区域,形成优势藻种,这为生物杀蚊阻断登革热、寨卡病毒病等恶性传染病的流行提供新的思路。 展开更多
关键词 伊蚊 莱茵衣藻 V-atpa基因 RNAI
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随机振动下产品包装系统减振优化研究
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作者 林聪 张元标 +1 位作者 陈俊菲 陆怡宇 《振动工程学报》 EI CSCD 北大核心 2024年第8期1349-1358,共10页
应用高级传递路径分析(ATPA)方法试验研究了随机振动不同振动等级下电脑主机包装件各缓冲衬垫到关键元件的振动传递特性,并进行了缓冲衬垫振动贡献分析与减振优化设计。结果表明:电脑主机两个关键元件的实测振动响应与ATPA方法的合成响... 应用高级传递路径分析(ATPA)方法试验研究了随机振动不同振动等级下电脑主机包装件各缓冲衬垫到关键元件的振动传递特性,并进行了缓冲衬垫振动贡献分析与减振优化设计。结果表明:电脑主机两个关键元件的实测振动响应与ATPA方法的合成响应一致,验证了ATPA方法的正确性;当各缓冲衬垫面积相同时,电脑主机关键元件同侧的两个缓冲衬垫对其加速度响应起决定作用,为关键缓冲衬垫;关键缓冲衬垫的面积影响着关键元件加速度响应PSD峰值大小和频率范围,随着关键缓冲衬垫面积的增加,关键元件加速度响应PSD峰值逐渐减小至饱和状态,共振峰形状变平滑,振动响应能量分散到更宽的频率范围。减振优化设计可保持非关键缓冲衬垫不变,只增加关键缓冲衬垫的面积。 展开更多
关键词 包装动力学 随机振动 减振优化 atpa 振动传递特性
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