德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备

利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔。利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体。最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性。结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20 000和1∶80 000;Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合。本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析。