眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用研究

目的:观察眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用。方法:样品组于造模前2h给予Atrase B,样品组与模型组舌下静脉给予眼镜蛇毒因子致肺损伤。50min后,各组取支气管肺泡灌洗液测定总细胞数、蛋白含量、TNF-α、ICAM-1、IL-8含量,比色法测定肺匀浆中性粒细胞髓过氧化物酶含量,取肺组织行病理切片检查。结果:Atrase B可明显降低损伤的肺组织中TNF-α、ICAM-1、MPO含量,减轻肺组织中炎症反应;对肺系数、肺含水量和支气管肺泡灌洗液蛋白含量的影响无统计学意义。结论:Atrase B可减少中性粒细胞在肺组织聚集,减轻补体激活导致急性肺损伤的症状。

全反式维甲酸和其他药物联用对癌细胞的影响

全反式维甲酸(ATRA)是维生素A的主要活性体,能够诱导如细胞分化、增殖等基本生命活动.目前,ATRA在白血病、肝癌、肺癌、神经胶质瘤、神经纤维素瘤、膀胱癌、皮肤癌等癌症应用中可以有效地抑制癌细胞增殖和向远处扩散.ATRA也被证实可以与激酶抑制剂、酶抑制剂、天然化合物及传统化疗药物等联合使用,降低癌细胞的耐药性,改善单一用药治疗效果等,还可以降低患者的治疗成本.综述了2000年以来ATRA在癌症治疗中与其他药物联用的研究及部分机制,从而为ATRA在癌症治疗中的应用提供思路和依据.

抗转铁蛋白受体单抗可变区基因克隆和序列分析

目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单抗在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体单抗杂交瘤细胞系7579中,对其单抗可变区基因进行克隆和序列分析。利用逆转录PRG技术扩增轻、重链可变区基因,再分别与pGEM-T载体连接、并克隆于JM109受体菌之中。利用荧光染色链终止法测定其序列,采用DNASIS7分析软件和与NIH基因库比较分析。结果:轻、重链可变区分别由139和128氨基酸残基组成,包括信号作、互补决定区和骨架氨基酸残基等功能序列。分别属于鼠免疫球蛋白重连Ⅱc和k链Ⅵ家族。结论:来自单抗的可变区的基因是完整的和具有潜在功能性的,为体外获得抗转铁蛋白受体基因工程抗体奠定了基础。

ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。 方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL - 60、K5 62细胞为研究对象 ,细胞形态学观察采用Wright s染色法及荧光染色法 ;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术 ;PMLmRNA表达采用RT -PCR法。 结果 1 ATRA处理后 ,NB4和HL - 60细胞形态学上出现分化表现 ,K5 62细胞无变化 ;经雄黄处理后 ,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。 2 ATRA处理后 ,NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML蛋白恢复定位 ,HL - 60、K5 62细胞内PML蛋白定位分布无变化 ;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML聚积于POD结构 ,随后降解 ;在HL - 60及K5 62细胞 ,PML发生相似改变。3 ATRA、雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。 结论在不同诱导剂刺激下 ,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制 ;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。

全反式维甲酸联合三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的疗效观察

背景与目的:三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病作用机制与全反式维甲酸(all-transretinonicacid,ATRA)有所不同,前者主要是加速细胞的凋亡,后者是诱导细胞的分化。但两者均能抑制急性早幼粒细胞白血病组织因子(tissuefactor,TF)mRNA的转录,降低TF水平和促凝活性,从而改善患者的出凝血异常。本研究旨在探讨两药联合应用能否提高疗效及是否加重不良反应。方法:采用历史对照分组。2000年1月～2001年10月的22例急性早幼粒细胞白血病作为ATRA组,其中初治17例,复发5例;单用ATRA治疗,剂量为25mg/(m2·d),分两次口服,一个疗程最长不超过50天。2001年11月～2003年6月的急性早幼粒细胞白血病19例为联合治疗组,其中初治15例,复发4例,采用As2O3与ATRA联合治疗。治疗剂量为0.1%As2O3溶液10ml,加入5%葡萄糖溶液中静脉滴注,每天1次,持续4～6h,28天为一疗程,ATRA的剂量用法同前组。结果:ATRA治疗组22例中19例(初治16例,复发3例)获完全缓解,完全缓解率为86.4%。联合治疗组19例中17例(初治15例,复发2例)获完全缓解,缓解率为89.5%。病死率ATRA组为18.6%,共3例(1例初治,2例复发);联合治疗组为10.5%,共2例(均为复发者)。完全缓解率和病死率两组比较无统计学差异(P>0.05)。达到完全缓解的中位时间。

补骨合剂对全反式维甲酸诱导的骨髓基质细胞凋亡的保护作用

目的:应用体外培养骨髓基质细胞,在细胞和分子水平观察补骨合剂对细胞凋亡的影响,探讨补骨合剂治疗骨质疏松症的机制。方法:分离SD大鼠骨髓基质细胞,通过形态学方法和流式细胞术检测凋亡细胞周期和线粒体膜电位改变以及Bcl-2、Bax蛋白基因表达,对补骨合剂在细胞凋亡过程中的作用进行评价。结果:补骨合剂的早期应用可以使阻滞于G0/G1期的细胞减少,进入S期进行DNA合成的细胞增多;诱导凋亡的细胞在补骨合剂组Bcl-2表达明显高于全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)诱导组,而Bax表达明显低于ATRA诱导组,且补骨合剂组线粒体的膜电位下降均显著低于ATRA诱导组。结论:补骨合剂治疗骨质疏松症的机制是补骨合剂的早期应用可以使ATRA诱导的凋亡细胞减少,从而促进细胞有丝分裂,抑制细胞凋亡;对骨髓基质细胞线粒体膜上的Bcl-2具有保护作用,同时通过阻止Bax从胞浆中移至线粒体膜上而使Bcl-2在与Bax形成的同源二聚体中占据优势来阻止线粒体膜上的通透性转换孔道开放,从而阻止线粒体释放凋亡诱导因子造成的线粒体膜电位改变和生物合成的破坏,达到抑制凋亡的目的。

傅里叶变换红外光谱法研究HL-60细胞的分化过程

利用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)研究了人白血病细胞HL60在全反式维甲酸(ATRA)作用下向粒细胞分化的过程。结果表明,分化后的HL60细胞FTIR图谱发生了显著变化,体现在与蛋白质、脂类、核酸和多糖等生物大分子相关的特征性谱带上。细胞内脂类物质烃链增长,含量增加。指纹图谱区域(900～1300cm-1)的谱带随着分化进程呈现规律性的变化。其中,核酸含量相对增加,并在1052和1153cm-1附近出现了新的谱峰,二阶导数谱进一步发现在1022cm-1处出现新峰,这说明蛋白糖基化,磷酸化以及核酸氢键加强作用在HL60细胞分化的过程中起着重要作用。通过计算一些图谱参数,并与硝基四唑氮蓝(NBT)还原实验相比较,证明红外图谱的变化与分化程度成正相关。

白血病基因产物靶向治疗的基础和临床研究

全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病 (APL)获得了很大成功 ,已经成为白血病靶向治疗研究的代表性模式。ATRA与As2 O3的作用靶点均为异常转录因子PML RARα,前者通过针对RARα ,而后者通过PMLSUMO化后使PML RARα致病蛋白降解 ,导致APL细胞分化和凋亡。ATRA与As2 O3联合治疗初发APL ,证实了两药的相互协同作用 ,获得了迄今为止成人急性白血病治疗的最好疗效。酪氨酸激酶抑制剂格力维 (Gleevec)在慢性粒细胞白血病 (CML)治疗中获得了成功。联合应用格力维与砷剂治疗CML已在临床和实验中初步证实其有效性 ,这一治疗方案是基于针对ABL异常的酪氨酸激酶活性与降解BCR ABL融合蛋白的双重靶向作用。白血病多靶点联合治疗的思路将进一步拓展至ANLL M2b型白血病 ,为该类白血病提供新的治疗方案 ,有可能使该类白血病获得更为有效的治疗效果。

黑海参脂肪酸的气相色谱/质谱法分析

黑海参(Holothuria atra)体壁经Folch法提取总脂,用HCl-甲醇进行甲酯化处理,以气相色谱/质谱法分析总脂中的脂肪酸组成。从黑海参中共分析出28种化合物,包括25种脂肪酸甲酯和3种脂肪醛二甲基缩醛。黑海参体壁中的饱和脂肪酸含量为22.93%,以C16:0(5.49%)和C18:0(4.38%)为主;不饱和脂肪酸含量为65.19%,其中单不饱和脂肪酸33.86%,主要为C20:1(n-9)(15.90%);多不饱和脂肪酸为31.33%,主要为C20:4(n-6)(19.57%)和C20:5(n-3)(5.86%)。脂肪醛二甲基缩醛含量为7.28%,表明黑海参体壁总脂中含有较丰富的缩醛型甘油酯。

全反式维甲酸对结肠癌不同增殖潜能细胞株增殖的抑制作用研究

目的:研究ATBA对结肠癌不同增殖能力细胞株生长抑制的可能机制,为ATRA应用于结肠癌的治疗提供可靠依 据。方法:应用细胞观察、FACS和MTT方法,研究ATRA对结肠癌不同增殖能力细胞株LS174T和CW-2细胞的生长抑制现 象。结果:LS174T的生长速度明显比CW-2细胞快。ATRA对体外培养的结肠癌细胞株LS174T和CW-2细胞的生长有明显 抑制和诱导细胞分化作用。结论:ATRA对LS174T和CW-2细胞的生长有抑制作用,抑制细胞增殖的程度与ATRA的浓度有 关,ATRA对结肠癌细胞有一定的抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化作用。

RARβ在胃癌细胞生长调节中的作用

为探讨 RARβ受体介导全反式视黄酸 ( ATRA)抑制胃癌细胞生长的作用机理 ,用 Northern印迹测定 RARβ m RNA表达水平 ,脂质体介导的转染方法将含有 RARβ基因的表达载体转染MKN- 45细胞并稳定表达 ,MTT和软琼脂集落形成等实验测定细胞生长速率和生长状态 ,氯霉素乙酰转移酶活性 ( CAT)测定视黄酸应答元件βRARE的转录活性以及 AP- 1 ( activator protein- 1 )活性 .RARβ在 ATRA敏感细胞株 MGC80 - 3、BGC- 82 3和 SGC- 790 1中表达 ,而在 ATRA抗性细胞株 MKN- 45中不表达 .当 RARβ基因转染 MKN- 45细胞时 ,细胞变为 ATRA敏感 ,由此导致ATRA抑制 MKN- 45细胞生长和软琼脂集落形成 .ATRA可以加强诱导 MGC80 - 3、BGC- 82 3和SGC- 790 1细胞βRARE的转录活性 ,但对 MKN- 45细胞影响不大 ,不能抑制细胞 AP- 1活性 .当RARβ基因转染 MKN- 45细胞后 ,ATRA则能够诱导细胞 βRARE的转录活性 ,并抑制细胞的 AP-1活性 .RARβ表达与 ATRA抑制胃癌细胞生长密切相关 .ATRA诱导 βRARE转录活性和抑制AP- 1活性可能是其调控胃癌细胞生长的机制之一 .

全反式维甲酸联合三羟异黄酮对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic ac id,ATRA)联合三羟异黄酮(Gen iste in)抑制肺癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用。方法采用不同剂量ATRA、Gen iste in及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡率检测。结果A549肺癌细胞经ATRA、Gen iste in及两者联合处理后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G2/M期,细胞凋亡明显增加,其中以两者联合用药最为显著。结论ATRA联合Gen iste in能协同抑制肺癌A549细胞的恶性增殖并促进其凋亡。

ATRA诱导结肠癌细胞株LoVo分化与凋亡

目的 体外研究维甲类化合物的衍生物ATRA对LoVo 结肠癌细胞株的作用。方法 观察ATRA作用下LoVo 细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果 ATRA使细胞增殖抑制,细胞阻滞于G0 /G1 期,高浓度组出现亚“G0/G1 ”峰。ALP比值增高,高浓度组电镜下见凋亡细胞,TDT法测凋亡细胞比例增高,但传6 代后不增加。结论 提示ATRA可诱导LoVo 细胞分化及凋亡,但有一定限度;实验结果为临床应用ATRA

SD大鼠肺气肿模型的建立及全反式维甲酸干预作用探讨

目的观察不同浓度的全反式维甲酸（all-transretinoicacid，ATRA）对猪胰蛋白酶复制的大鼠肺气肿模型的治疗作用。方法建立猪胰蛋白酶（porcine pancreatic elastase，PPE）复制的大鼠肺气肿模型，将体重170-220g的60只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（N）、模型组（P）、小剂量ATRA治疗组（R1）、中剂量ATRA治疗组（R2）、大剂量AT-RA治疗组（R3）、棉籽油组（C）各10只。后5组向大鼠气管内滴注1U·g^-1PPE，N组同样滴注等量生理盐水，饲养76d，治疗组和棉籽油组分别向大鼠腹腔内连续注入大、中、小剂量ATRA和棉籽油14d。测量干预前后的大鼠肺体积，血气分析和病理形态学图像分析了解不同浓度ATRA对于PPE复制的大鼠肺气肿模型的治疗效果。结果R1、R2、R，组、P组、C组的大鼠肺体积明显大于N组（P〈0．01），C组和P组的肺体积无差异，各治疗组的肺体积较P组有差异，各治疗组之间的肺体积无差异。肺泡形态学结果显示R1、R2、R3组、P组、C组与N组比较，每个视野内的肺泡数（Na）明显减少，平均肺泡面积（MAA）增大，平均内衬间隔（MLI）较大，差异有显著性（P〈0．05）；R1、R2组相对于P组Na增加，MAA减少，差异有统计学意义，但两组之间无差别；R3组、C组和P组的各指标无明显差别。血气分析结果P组、R1、R2、R3组和C组的二氧化碳分压（PaCO2）比N组升高，P组、C组和R，组的氧分压（PaO2）、氧饱和度（SaO2）值明显低于N组，R1、R2组的PaO2、SaO2值与N组无差异，与P组也无差异。结论中、低剂量组的ATRA对肺气肿模型的治疗在肺泡修复上明显效果，但肺功能的改善不明显；大剂量组ATRA治疗后效果不明显。

骨肉瘤诱导分化与多药耐药表型的生物学性状比较

[目的]探讨诱导分化剂诱导骨肉瘤分化时同骨肉瘤耐药状态产生的分化情况的异同点,以便正确认识分化与耐药相关性。[方法]以诱导分化剂ATRA,IL-4处理人成骨肉瘤细胞系,对比MG-63耐药表型MG-63/R,观察瘤细胞生物学性状。用原位杂交分析在这一转化过程上凋亡调控基因P53,bcl-2 mRNA表达,用Tunel法分析细胞的凋亡。MTT法检查细胞对药物敏感性。[结果]MG-63/R,以及IL-4,ATRA处理的MG-63,细胞均出现分化,AT-RA处理的MG-63表现多药耐药性,并同MG-63/R表现出了相似的特性而IL-4处理的细胞分化的同时并未出现耐药。[结论]肿瘤细胞分化的过程中有可能出现一种顽固的多药耐药的亚分化状态,这种差异性分化的产生可能同细胞种类、状态、药物作用特点及剂量有关,如何控制细胞向耐药状态的分化为肿瘤的治疗提出了新的难题。

JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达及意义

为了研究JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达规律,探讨其在白血病细胞分化和凋亡中的意义及可能的作用机制,应用FCM检测HL60细胞经ATRA(10-6mol/L)、AraC(10ng/ml)、TPA(10-8mol/L)作用后2、4、6、8天CD13、CD14、CD15、CD11b改变及细胞周期变化;应用半定量RT-PCR及蛋白印迹技术检测JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达趋势以及相关凋亡因子Bcl2、HSP27和HSP70的表达。结果表明:经上述药物分别处理HL60细胞后,不同时段FCM相关指标检测结果证明其分别向粒、单核、巨噬细胞样分化。JWA基因表达呈时间依赖性升高;Bcl2则呈时间依赖性下降;HSP70在ATRA及TPA组与JWA表达呈正相关,与Bcl2呈负相关,而各组HSP27并无表达。ATRA处理HL60细胞后JWA基因表达趋势与原代细胞相反,且不需要ATRA诱导分化作为前提。分别以AraC10ng/ml和AraC20ng/ml处理HL60细胞后,JWA基因的表达呈反向变化,即前者呈时间依赖性增加,而后者则下降。结论:JWA基因在实现ATRA及TPA诱导白血病细胞分化和凋亡中可能具有双重调节作用;JWA基因表达的高低与AraC诱导分化作用及细胞毒作用有关;HL60细胞与原代白血病细胞在诱导分化机制方面可能不尽相同。

全反式维甲酸可增强大鼠系膜细胞uPA和MMP-2表达

目的 研究全反式维甲酸对体外培养大鼠系膜细胞uPA和MMP 2表达的影响 ,探讨全反式维甲酸抗肾小球硬化的机制。方法 分别应用Northernblot、Westernblot和酶谱法检测全反式维甲酸对培养大鼠系膜细胞uPA和MMP 2表达的影响。结果 ATRA可促进系膜细胞uPA和MMP 2蛋白表达 ,提高其酶活性 ,并增强MMP 2mRNA表达。结论 ATRA可增强大鼠系膜细胞的uPA和MMP - 2表达 。

全反维甲酸对人肺癌细胞株A549细胞间黏附分子-1表达及体外侵袭力的影响

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的表达在肿瘤的诊断、判断病程进展、转移潜能与预后方面有很大的潜在价值,受到众多学者关注.ICAM-1高表达的肿瘤细胞可能更易于脱离瘤体,随淋巴细胞游走而发生转移[1].流行病学、动物实验及临床研究均已证实全反式维甲酸(ATRA)类可用于肺癌的化学预防及治疗[2].我们研究了ATRA对肺癌细胞株A549体外增殖、侵袭力及ICAM-1、sI-CAM-1表达水平的影响,旨在阐明ATRA对肿瘤转移潜能的影响及ICAM-1分子在肿瘤侵袭中的作用,探讨ATRA对肿瘤的化学防治作用的可能机制.

雄黄治疗维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病-M_3及诱导凋亡的作用

目的 研究雄黄体外诱导人急性早幼粒细胞白血病 M3细胞凋亡的作用 ,并观察其对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3的治疗效果。方法 用雄黄处理在体外培养耐维甲酸的人白血病细胞 ,电子显微镜观测白血病细胞凋亡过程 ,并前后对照观察应用雄黄治疗维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3的疗效。结果 在 1 .0～ 2 .0 μmol·L- 1 的浓度下 ,雄黄作用于白血病细胞 2 4h后 ,可见到较为典型的细胞凋亡形态学变化 :细胞核固缩 ,染色体凝集 ,呈新月型紧贴于核膜周边 ,核碎裂 ,染色质片断化 ,凋亡小体形成等。用雄黄治疗的 2 0例患者 ,完全缓解(CR) 1 7例 ,部分缓解 (PR) 1例 ,总有效率 (CR +PR) 90 %。结论 雄黄能够诱导耐维甲酸的白血病细胞凋亡 ,可用于维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3治疗 ,且缓解率及长期生存率高。