表达NDV HN蛋白的减毒雏沙门菌ΔcrpC79-13(pcDNA3.0-HN)的构建及生物学特性研究

为了构建表达鸡新城疫病毒(N D V)血凝素-神经氨酸酶(H N)蛋白的重组减毒雏沙门菌,以p M D18-HN为模板,经PCR扩增出HN基因后定向插入真核表达载体pc DNA3.0中,构建重组质粒pc DNA-3.0-HN,再通过电转化的方法将重组质粒转入雏沙门菌Δcrp C79-13中,构建重组减毒雏沙门菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN),并进一步研究其生物学特性及侵染Vero细胞后HN蛋白在细胞内的表达情况。PCR和酶切结果显示,重组菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN)构建成功;生物学特性结果显示,重组菌失去了利用麦芽糖、丙三醇和山梨醇及分解H2S等的能力,生长速度显著地低于野生株C79-13,且可稳定遗传HN基因;间接免疫荧光试验结果显示,在重组菌侵染Vero细胞后第48小时可检测到HN蛋白特异性荧光。雏鸡口服攻毒试验结果表明,重组菌Δcrp C79-13(pc DNA3.0-HN)的半数致死量约为野生株C79-13的421.6×106倍。以上结果表明,本研究成功构建了能瞬时表达NDV HN蛋白的口服重组减毒雏沙门菌,为进一步将其开发为新型鸡白痢-新城疫基因工程口服活疫苗奠定了基础。