心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性ELISA吸附分析及其临床初步应用

应用特异抗体建立了人心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性酶联免疫吸附分析。该法灵敏度为0.lng/孔,批内及批间变异系数分别为2.7％～9.2％和3.7％～19.1％,回收率近100％(高剂量组10ng/孔),工作范围0.1～10ng/孔。用该法检测了11例急性心肌梗塞病人入院后2周的血清样品,并调查了20例正常健康人血清样品,结果所有急性心梗病人血清样品在一定时间内心肌肌球蛋白轻链水平增高。大多数病人(9例)初次升高后1～2d达正常水平,以后又升高5～9d。轻链高峰在入院后第2.2±1,2d(第一峰)和7.1±1.9d(第二峰)出现,峰值分别是45.7±33.5ng/ml和62.2±32.9ng/ml,高水平肌球蛋白轻链在病人血中保持11±3.4d。然而,在健康人血清中未见有可测量的轻链存在。

多肽抗原检测心肌肌球蛋白重链抗体方法研究

目的建立抗肌球蛋白重链(AMHC)自身抗体的间接酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨此抗体与病毒性心脏病的关系。方法以合成肽作为抗原,建立ELISA方法,检测心肌炎40例,扩张型心肌病48例和30名正常人血清中AMHC自身抗体。结果阳性血清批内和批间变异系数分别为0.086与0.127,用抗原吸收后,吸光度(A)值下降了62.9%,慢性病毒性心肌炎,扩张型心肌病患者AMHC自身抗体阳性率分别为42.1%和47.9%,显著高于急性病毒性心肌炎组(9.5%)和正常对照组(3.3%)。结论用多肽抗原代替天然肌球蛋白检测AMHC自身抗体,特异性和敏感性高,操作简便,为临床开展心肌炎、心肌病的免疫学监测提供了新的检测方法。

心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体间接酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立以重组心肌肌钙蛋白I-C(cTnI-C)融合蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测人血循环中的抗cTnI自身抗体,为判断心肌损伤的预后提供依据。方法采用自行构建表达的cTnI-C融合蛋白作为包被抗原,以棋盘法优化实验条件,建立检测人血清cTnI自身抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA法在121例急性心肌梗死(AMI)中筛查抗cTnI自身抗体,并用蛋白印迹法(WB)进行确证。结果 121例AMI血清抗cTnI抗体的阳性率为10.74%,ELISA试验的灵敏度100%,特异性95.37%,Kappa值为0.815。结论以cTnI-C融合蛋白作为包被蛋白建立的间接ELISA法具有良好的敏感度、特异性,可用于人血清抗cTnI自身抗体的筛查。