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肺炎链球菌自溶素基因的克隆、表达及蛋白纯化 被引量:3
1
作者 徐江红 陈兵 +2 位作者 章德广 郭建 顾凌澜 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期191-194,200,共5页
目的克隆肺炎链球菌自溶素(LytA)基因并在大肠埃希菌中表达及蛋白纯化。方法用PCR方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将其插入原核表达载体pET32a(+),构建pET32a(+)-LytA重组质粒,经IPTG诱导使该基因在大肠埃希菌BL... 目的克隆肺炎链球菌自溶素(LytA)基因并在大肠埃希菌中表达及蛋白纯化。方法用PCR方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将其插入原核表达载体pET32a(+),构建pET32a(+)-LytA重组质粒,经IPTG诱导使该基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,亲和层析法纯化目的蛋白,将获得的蛋白用Western blot鉴定。结果扩增出的DNA序列与GenBank中的LytA基因序列一致,成功构建了pET32a(+)-LytA重组质粒并在大肠埃希菌中高效表达,所表达的蛋白经Western blot证实为肺炎链球菌自溶素融合蛋白。结论成功克隆了肺炎链球菌自溶素基因,并将其在大肠埃希菌中表达、纯化,为新型肺炎链球菌疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素基因 克隆和表达
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单核细胞增生性李斯特菌自溶素研究进展 被引量:2
2
作者 崔焕忠 张辉 +2 位作者 范译文 康倩 钱爱东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期290-293,共4页
自溶素是由细菌产生的可以降解细菌细胞壁的肽聚糖水解酶,参与细菌的分裂、细胞壁更新、细菌自溶等生理过程。自溶素也是细菌的重要毒力因子之一,参与细菌的黏附与侵袭,与细菌的致病性密切相关。本文对单核细胞增生性李斯特菌的胞壁水解... 自溶素是由细菌产生的可以降解细菌细胞壁的肽聚糖水解酶,参与细菌的分裂、细胞壁更新、细菌自溶等生理过程。自溶素也是细菌的重要毒力因子之一,参与细菌的黏附与侵袭,与细菌的致病性密切相关。本文对单核细胞增生性李斯特菌的胞壁水解酶p60、酰胺酶Ami、自溶素IspC、自溶素Auto与胞壁水解酶MurA等自溶素的蛋白结构、生理功能及致病性进行了简要介绍。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 自溶素 研究进展
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猪链球菌2型新的感染相关因子自溶素的鉴定与分析 被引量:4
3
作者 顾宏伟 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期68-72,共5页
根据Sanger研究所公布的猪链球菌2型(SS2)P1/7株的自溶素序列,设计检测引物,取SS2我国2次流行株、其它临床分离株和参考株,及猪链球菌1型、1/2型、7型和9型,共33株,分别以其DNA为模板,PCR扩增。结果表明,SS2除无毒株T15阴性外,其他临床... 根据Sanger研究所公布的猪链球菌2型(SS2)P1/7株的自溶素序列,设计检测引物,取SS2我国2次流行株、其它临床分离株和参考株,及猪链球菌1型、1/2型、7型和9型,共33株,分别以其DNA为模板,PCR扩增。结果表明,SS2除无毒株T15阴性外,其他临床分离株27株(含人源2株)均阳性;其它猪链球菌为,SS7阳性,SS1、SS1/2和SS9均阴性。同时设计引物向两侧扩增,以四川流行株ZY05719和江苏流行株HA9801的DNA为模板,扩增自溶素ORF完整的编码基因,软件分析结果显示,该基因含有6个重复的"GBS_Bsp-like"域和1个"N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶"域,与SS2欧洲株有较高同源性(99.8%),但与SS2加拿大株差异较大。在DNASTAR分析所编码蛋白的抗原性的基础上,另设计引物,以ZY05719株DNA为模板,PCR扩增具有良好免疫原性的片段基因,并定向克隆至表达载体pET30a(+)中,进行重组表达,SDS-PAGE和Western blot表明,所获得重组自溶素具有良好反应原性。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 感染相关因子 自溶素
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肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究 被引量:1
4
作者 邹琴 杨光 +2 位作者 罗红 宫晓红 孙文平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期52-55,共4页
通过对肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA全序列基因的克隆和表达,获得部分小片段蛋白,初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌(ATCC49619)... 通过对肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA全序列基因的克隆和表达,获得部分小片段蛋白,初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌(ATCC49619)基因组中扩增lytA全序列片段,构建克隆载体PGM T/lytA, 测序后与M66菌株比对显示,肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamHⅠ。以BamHⅠ、HindⅢ双酶切后,目的基因出现2个小片度,以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a(+)/lytA′,经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA′。将LytA′免疫小鼠,测定抗体效价,同时进行Western blot鉴定。测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98%,具有高度保守性,碱基不同主要位于下游部分,在444~450 bp之间新出现BamHⅠ酶切位点。构建的小片段重组表达质粒pET32a(+)/lytA′在BL21(DE3)中高效表达,获得纯化蛋白LytA′,免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为1:32,经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性,为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 酶切 免疫活性
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变异链球菌自溶素研究新进展 被引量:1
5
作者 韩耀伦 郝玉庆 《国际口腔医学杂志》 CAS 2008年第S1期53-55,共3页
自溶素是细菌自身产生的可降解细菌细胞壁的蛋白水解酶,与细菌细胞分裂、生物膜形成、表面黏附、遗传感受态和细胞壁更新有关。自溶素的活性受到严格调控。本文从变异链球菌自溶素的蛋白基因结构、自溶素功能及调控几个方面介绍变异链... 自溶素是细菌自身产生的可降解细菌细胞壁的蛋白水解酶,与细菌细胞分裂、生物膜形成、表面黏附、遗传感受态和细胞壁更新有关。自溶素的活性受到严格调控。本文从变异链球菌自溶素的蛋白基因结构、自溶素功能及调控几个方面介绍变异链球菌自溶素的研究现状。 展开更多
关键词 变异链球菌 自溶素结构 自溶素功能 自溶素调控
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肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定 被引量:3
6
作者 杨永红 朱保权 +3 位作者 宁淑敏 安真光 王棣 王兴民 《微生物学免疫学进展》 2000年第2期49-53,共5页
肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌 ,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难 ,本实验以寡核苷酸引物YH1 YH2、YH7 YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,通过改变各种反应条... 肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌 ,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难 ,本实验以寡核苷酸引物YH1 YH2、YH7 YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,通过改变各种反应条件 ,建立了这两种病原因子基因的PCR检测方法。用此方法对 2 0株肺炎链球菌标准菌株及 7株对照菌株进行了鉴定 ;其扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和和AccI进行酶切以确认扩增产物是否正确 ;用酚 氯仿抽提纯化的全细胞DNA对PCR方法的检测灵敏度进行了测定 ;并利用此方法对 2 8份临床标本分离物进行了鉴定。结果 所有 2 0株肺炎链球菌均可分别用引物YH1 YH2、YH7 YH8扩增出 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,而对照菌株均呈阴性 ;自溶素及溶血素基因的扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和AccI消化后产生的片段和预期的完全一致 ;两对产物均可从 10fg的全细胞DNA中扩增出目的DNA片段。所建立的两套PCR系统对 2 8份临床标本分离物进行鉴定 ,其中PCR阳性的 15份分离物经生化学特性检查被鉴定为肺炎链球菌。本试验所建立的两套PCR检测系统具有特异性强 ,灵敏度高及操作简单等优点 ,均可用于肺炎链球菌的鉴定。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 溶血素 PC的鉴定 病原菌
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金黄色葡萄球菌酚溶调控蛋白α小肽敲除对自溶素AtlA蛋白表达的影响 被引量:1
7
作者 谭利 李思瑞 +4 位作者 姜北 张骁鹏 陈江 胡晓梅 黎庶 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第21期2066-2071,共6页
目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的... 目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的Newman突变株。并对野生株和突变株培养上清蛋白进行研究。结果突变株培养上清中一个相对分子质量约为135×103的蛋白表达水平较野生株明显减少甚至缺失;质谱分析提示该蛋白为金黄色葡萄球菌atl A基因编码的双功能自溶素前体蛋白(Atl A蛋白);实时荧光定量PCR结果显示psmα基因敲除株atl A基因的转录水平较野生株显著降低。结论 psmα缺失后能够降低atl A基因的转录表达水平。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 PSMα小肽 自溶素 ATL A蛋白
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格氏链球菌自溶酶AtlS的研究进展 被引量:1
8
作者 王琳 刘敏 +1 位作者 郝玉庆 刘娅玲 《国际口腔医学杂志》 CAS 2013年第5期667-669,共3页
格氏链球菌自溶酶AtlS是形成正常细胞壁结构和生物膜以及细菌自溶的关键蛋白。AtlS可调节细菌应激耐受力、生物膜形成和胞外DNA的释放,其表达是一个复杂的调节系统。本文除变异链球菌等口腔链球菌自溶酶外,重点就AtlS在格氏链球菌中的... 格氏链球菌自溶酶AtlS是形成正常细胞壁结构和生物膜以及细菌自溶的关键蛋白。AtlS可调节细菌应激耐受力、生物膜形成和胞外DNA的释放,其表达是一个复杂的调节系统。本文除变异链球菌等口腔链球菌自溶酶外,重点就AtlS在格氏链球菌中的表达、信号转导通路及其相关调节研究进展作一综述。 展开更多
关键词 格氏链球菌 自溶酶 基因表达
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猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
9
作者 韩瑞 杨行 +2 位作者 张文波 陈佳玲 周晓丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3508-3519,共12页
【目的】建立快速、准确检测猪链球菌自溶素(atl)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物,采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列;构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒,并将重组质粒转... 【目的】建立快速、准确检测猪链球菌自溶素(atl)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物,采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列;构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达;以表达纯化后的atl-His融合蛋白为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;以兔多克隆抗体为一抗,用Western blotting方法检测atl-GST融合蛋白的反应原性;以纯化后的atl-GST融合蛋白为包被抗原,猪链球菌感染阳性血清作为标准血清,建立猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA检测方法。利用本试验建立的ELISA方法与商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒同时对184份血清样品进行检测并用本试验建立的方法进行临床样品检测。【结果】从猪链球菌中成功扩增出atl基因;构建的重组质粒,经诱导表达和纯化,获得大小为40 ku的atl-His和48 ku的atl-GST融合蛋白;经Western blotting验证,兔抗atl-His抗血清与atl-GST融合蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA结果显示,该检测方法的阴阳临界值为0.318,阳性血清稀释至1∶1 280检测仍为阳性;批内批间变异系数均<10%,表明该方法具有良好的重复性及敏感性。本试验所建立的ELISA方法检测出96份阳性样品,商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测出66份阳性样品,符合率为71.7%。应用建立的方法检测458份不同饲养阶段的猪血清样品,其中检出277份阳性样品,阳性率为60.4%。【结论】本试验成功建立了检测猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA方法并进行了初步应用,为猪链球菌病血清流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 自溶素 诱导表达 间接ELISA
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清香酒醅来源Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及其底物特异性初探 被引量:1
10
作者 来欢欢 张凯悦 +4 位作者 田青 董晋文 赵微 崔美林 张秀红 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期64-69,共6页
为研究Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及底物特异性,以该细菌细胞为底物分析其自溶酶的最适温度及最适pH,结合该菌株在有无外加自溶酶、自溶前后还原糖和氨基酸的变化以及对4种底物的敏感性,分析其自溶酶的底物特异性... 为研究Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及底物特异性,以该细菌细胞为底物分析其自溶酶的最适温度及最适pH,结合该菌株在有无外加自溶酶、自溶前后还原糖和氨基酸的变化以及对4种底物的敏感性,分析其自溶酶的底物特异性。结果表明,L.plantarum SL32-2在对数早期培养4 h时,自溶度最高;其自溶酶的最适pH为7.5,最适温度为37℃;添加自溶酶后,L.plantarum SL32-2的自溶度增加了12.04%、还原糖和氨基酸分别增加了1.05和42.83倍;底物特异性分析发现,L.plantarum SL32-2自溶酶中β-N-乙酰葡萄糖胺酶、酰胺酶、羧肽酶、内肽酶的活性分别为0.0036、0.0027、1.1267和2.0987 U,表明作用于肽链的酶活性远高于作用于糖链的酶。因此,有望通过添加自溶酶的方式,控制酒醅中乳酸菌的过量生长。 展开更多
关键词 乳杆菌 自溶酶 酶学性质 自溶度 底物特异性
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肺炎链球菌自溶素对感染性肺炎的诊断价值 被引量:9
11
作者 邹琴 孙文平 +2 位作者 杨光 周杰 罗红 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期4801-4804,共4页
目的通过基因原核表达技术获取肺炎链球菌自溶素LytA重组蛋白(rLytA),探讨其对感染性肺炎患者的血清学诊断价值。方法根据Genbank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物;采用PCR技术以肺炎链球菌基因组DNA为... 目的通过基因原核表达技术获取肺炎链球菌自溶素LytA重组蛋白(rLytA),探讨其对感染性肺炎患者的血清学诊断价值。方法根据Genbank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物;采用PCR技术以肺炎链球菌基因组DNA为模板扩增lytA基因序列;构建重组表达质粒pET32a(+)/lytA,经由IPTG诱导后通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA;Western blot测定表达蛋白的抗体结合活性;以rLytA为抗原,建立ELISA反应模式,测定2013年3-6月36例临床诊断为CAP并经细菌学确定的患者血清标本中相应IgG和IgM抗体,评价对肺炎链球菌感染性肺炎的诊断价值。结果成功构建原核表达质粒pET32a(+)/lytA,表达的rLytA具有较好的抗体结合活性;CAP患者血清IgM和IgG类抗LytA的抗体滴度均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其诊断的敏感性均高于常规的痰培养和血培养(P<0.01)。结论以重组蛋白LytA为抗原建立ELISA反应模式可用于肺炎链球菌感染的血清学诊断,快速、客观,具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 原核表达 酶联免疫吸附试验
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肺炎链球菌重组自溶酶(Re-LytA)滴鼻免疫小鼠的实验研究 被引量:2
12
作者 甘慧泉 鲜墨 +3 位作者 袁竹青 吴忠道 李明 周茂华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期629-633,共5页
目的评价重组肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)自溶酶(autolysin,LytA)滴鼻免疫诱导小鼠抗Sp感染的保护性效果。方法用亲和层析的方法纯化出重组SpLytA蛋白,以CpG作佐剂,对小鼠进行滴鼻免疫(A组)。对照组(B组)用无... 目的评价重组肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)自溶酶(autolysin,LytA)滴鼻免疫诱导小鼠抗Sp感染的保护性效果。方法用亲和层析的方法纯化出重组SpLytA蛋白,以CpG作佐剂,对小鼠进行滴鼻免疫(A组)。对照组(B组)用无菌盐水滴鼻;多糖疫苗组(C组)用23价多糖疫苗肌肉注射。于末次免疫后2周,用Sp分别以滴鼻和腹腔注射两种方式进行攻击感染。攻击之前采集血清和鼻咽灌洗液等样品,采用ELISA测试其抗体水平。滴鼻攻击后4d,采集小鼠鼻咽灌洗液和肺灌洗液,进行Sp细菌计数;腹腔注射攻击后7d内观察各组小鼠死亡情况。结果B组未检测到LytA抗体和多糖抗体,C组多糖抗体阳性;A组LytA抗体(包括IgG、IgA、sIgA)均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。腹腔注射攻击后,A、C组小鼠的存活率明显高于B组(P〈0.05),A组和C组之间没有明显区别(P〉0.05)。滴鼻攻击后,A组鼻咽部灌洗液sp细菌计数明显低于B组和C组(P〈0.05)。结论Re-LytA滴鼻免疫可诱导实验小鼠产生一定的抵抗Sp感染的保护性免疫力,这种保护性的免疫力可能与sIgA相关。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶酶 滴鼻免疫
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肺炎链球菌自溶素LytA研究进展 被引量:5
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作者 邹琴 罗红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期88-91,共4页
自溶素是一种内源性酶,广泛存在于细菌表面,参与细菌分裂、细胞黏附、细菌自溶以及细胞壁的更新等重要生理活动。本文对肺炎链球菌自溶素LytA结构、功能、调控及应用研究现状进行了综述。
关键词 肺炎链球菌 自溶素 抗菌药 综述
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金黄色葡萄球菌重组蛋白AtlG体外抗菌效应探讨 被引量:1
14
作者 王运铎 邓燕燕 +2 位作者 罗红 孙文平 杨光 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2521-2523,共3页
目的通过基因原核表达技术获取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)自溶素片段AtlG重组蛋白,初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的atlG基因序列设计合成特异引物,采用PCR技术以金黄色葡萄球菌的基因组为模板扩增相应atlG基因序列;分别构... 目的通过基因原核表达技术获取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)自溶素片段AtlG重组蛋白,初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的atlG基因序列设计合成特异引物,采用PCR技术以金黄色葡萄球菌的基因组为模板扩增相应atlG基因序列;分别构建克隆载体PMD19-T-atlG和表达载体pET-32а(+)/atlG;构建的表达载体经由IPTG诱导后通过等电点洗脱技术获取纯化的重组蛋白AtlG;采用微量肉汤稀释法测定AtlG对金黄色葡萄球菌及其苯唑西林耐药株的最低抑菌浓度(MIC),动态测定金黄色葡萄球菌及其耐药株对AtlG的药物敏感性,初步探讨重组蛋白AtlG的体外抗菌活性。结果成功构建了原核表达载体pET-32а(+)/atlG,表达的重组蛋白AtlG对金黄色葡萄球菌标准株和苯唑西林耐药株的MIC分别为16μg/ml和64μg/ml;相比于未加药物的对照组,rAtlG对标准株作用1h后细菌数显著降低(P=0.045),抑菌效果持续到5h测定点(P=0.006);对苯唑西林耐药株作用3h后显示出抑菌效果(P=0.003),5h后与对照组相比差异无统计学意义。结论 50μg/ml的rAtlG对金黄色葡萄球菌标准株抑菌作用发生快、持续时间长,对苯唑西林耐药株也有一定的抑菌作用,具有作为抗菌药物的可能性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 自溶素 抗菌药物 最低抑菌浓度
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Discovery of a novel gene involved in autolysis of Clostridium cells
15
作者 Liejian Yang Guanhui Bao +3 位作者 Yan Zhu Hongjun Dong Yanping Zhang Yin Li 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2013年第6期467-474,共8页
Cell a utolysis plays important physiological roles in the life cycle of clostridial cells.Unders tanding the genetic ba-sis of the autolysis phenomenon of pathogenic Clostridi-um or solvent producing Clostridium cell... Cell a utolysis plays important physiological roles in the life cycle of clostridial cells.Unders tanding the genetic ba-sis of the autolysis phenomenon of pathogenic Clostridi-um or solvent producing Clostridium cells might provide new insights into this important species.Genes that might be involved in autolysis of Clostridium acetobutylicum,a model clostridial species,were investigated in this study.Twelve putative autolysin genes were predicted in C.ace-tobutylicum DSM 1731 genome through bioinformatics analysis.Of these 12 genes,gene SMB_G3117 was select-ed for testing the in tracellular autolysin activity,growth profi le,viable cell numbers,and cellular morphology.We found that overexpression of SMB_G3117 gene led to earlier ceased growth,signifi cantly increased number of dead cells,and clear electrolucent cavities,while disrup-tion of SMB_G3117 gene exhibited remarkably reduced intracellular autolysin activity.These results indicate that SMB_G3117 is a novel gene involved in cellular autolysis of C.acetobutylicum. 展开更多
关键词 cell autolysis autolysins CLOSTRIDIUM gene SMB_G3117
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肺炎链球菌菌体蛋白LytA和CbpA对感染小鼠的诊断价值 被引量:7
16
作者 霍琳红 孙文平 +3 位作者 杨光 陈晨 邓燕燕 罗红 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期366-370,共5页
目的通过基因工程技术获取肺炎链球菌自溶素(autolysin,LytA)和胆碱结合蛋白A(choline binding proteinA,CbpA),探讨其对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断价值。方法根据GenBank中lytA和cbpA基因保守序列设计合成特异性引物,采用... 目的通过基因工程技术获取肺炎链球菌自溶素(autolysin,LytA)和胆碱结合蛋白A(choline binding proteinA,CbpA),探讨其对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断价值。方法根据GenBank中lytA和cbpA基因保守序列设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌基因组中扩增lytA和cbpA保守序列片段;经由IPTG诱导并通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA和CbpA;Westernblot测定表达蛋白的抗体结合活性。以LytA和CbpA为抗原,建立ELISA反应模式测定感染小鼠血清中相应的IgG和IgM抗体,评价诊断价值。结果成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/lytA和pET-32a(+)/cbpA,表达的重组蛋白LytA和CbpA具有较好的抗体结合活性。实验组小鼠(肺炎链球菌感染组)IgM和IgG类抗LytA抗体滴度高于对照组(正常对照组和乙型链球菌感染对照组),差异有统计学意义(P〈0.05),CbpA抗体与正常对照组差异有统计学意义,与乙型链球菌感染组差异无统计学意义(P〉0.05)。CbpA蛋白对感染小鼠诊断的敏感性较高(IgG:83.3%;IgM:75.0%),而LytA特异性较高(IgG:100%;IgM:100%)。结论协同利用重组蛋白CbpA诊断敏感性及LvtA的特异性,对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断具有一定价值,为进一步用于临床检验奠定基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 胆碱结合蛋白A 酶联免疫吸附试验
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肺炎链球菌重组蛋白LytA体外抗菌效应探讨 被引量:8
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作者 谢兴凤 吕明睿 +3 位作者 罗红 孙文平 杨光 陈晨 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期17-20,24,共5页
目的构建肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌表达系统中表达,获取LytA重组蛋白(rLytA),初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采... 目的构建肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌表达系统中表达,获取LytA重组蛋白(rLytA),初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌ATCC49619标准株基因组中扩增lytA基因序列,分别构建克隆载体PGM-T/lytA和表达载体pET32a(+)/lytA,将pET32a(+)/lytA转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后用透析袋等电点洗脱技术纯化目的蛋白rLytA;采用微量肉汤稀释法测定rLytA和青霉素G对肺炎链球菌及其青霉素G耐药株的最低抑菌浓度(MIC),动态测定肺炎链球菌及其耐药株对rLytA和青霉素G的药物敏感性,评价rLytA的体外抗菌活性。结果成功构建了原核表达载体pET32a(+)/lytA,获得的rLytA对肺炎链球菌标准株和青霉素G耐药株的MIC分别为8μg/ml和16μg/ml;以rLytA对标准株及耐药株MIC的3倍浓度,分别作用于标准株及耐药株,与未加药物的对照组相比,rLytA作用于标准株3h后细菌数显著减少(P<0.05),且效果持续至7h(P<0.05);对青霉素G耐药株作用3h时显示具有抑菌效果(P<0.01),且抑菌作用持续至7h(P<0.01)。结论一定浓度的rLytA对肺炎链球菌标准株和耐药株均显示出抑菌作用,且持续时间长,具有作为抗菌药物的可能性。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 抗菌药物 基因表达
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金黄色葡萄球菌重组蛋白AtlM的体外抗菌效应初步探讨 被引量:2
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作者 邓燕燕 张寒 +3 位作者 罗红 孙文平 杨光 陈晨 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期537-540,共4页
目的通过基因工程技术获取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)自溶素片段AflM重组蛋白(rAtlM),初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌atlM基因序列(AC:D17366)设计合成特异引物,采用PCR技术扩增相应的序列并构建重... 目的通过基因工程技术获取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)自溶素片段AflM重组蛋白(rAtlM),初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌atlM基因序列(AC:D17366)设计合成特异引物,采用PCR技术扩增相应的序列并构建重组表达质粒pET.32a(+)/atlM,经由IPTG诱导后通过等电点洗脱技术获取纯化的rAtlM;采用微量肉汤稀释法测定rAtlM对ATCC25923及其苯唑西林诱导耐药株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);体外试验测定rAtlM对ATCC25923菌株及其耐药株的抗菌活性。结果成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/atlM,表达的重组蛋白AtlM对ATCC25923标准株和耐药株的MIC分别为8μg/ml和64μg/ml。体外抑菌试验显示rAtlM作用于ATCC25923标准株和耐药株1h后即对细菌生长具有抑制作用(P值分别为0.004和0.026),对标准株作用持续到5h测定点(P=0.012),对苯唑西林耐药株作用持续到3h测定点(P=0.001),5h后与未加药物的对照组相比差异无统计学意义(P=0.102)。结论50μg/ml的rAtlM对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)及苯唑西林耐药株初步显示出一定的抑菌作用,具有作为抗菌药物的可能性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 自溶素 抗菌药 基因表达
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金黄色葡萄球菌PGRP的原核表达及生物信息学分析 被引量:1
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作者 孟圆 刘思雨 +4 位作者 马秋虹 王运铎 杨光 孙文平 罗红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1062-1065,共4页
目的构建金黄色葡萄球菌PGRP基因片段的原核表达,对表达产物进行生物信息学分析。方法根据GenBank中收录的金黄色葡萄自溶素(autolysin,AtlA)基因序列(AC:D17366),设计其中pgrp基因片段的特异性引物,并通过NCBI Blast,在收录的所有金黄... 目的构建金黄色葡萄球菌PGRP基因片段的原核表达,对表达产物进行生物信息学分析。方法根据GenBank中收录的金黄色葡萄自溶素(autolysin,AtlA)基因序列(AC:D17366),设计其中pgrp基因片段的特异性引物,并通过NCBI Blast,在收录的所有金黄色葡萄球菌菌株中对相应的基因序列进行保守性分析。提取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)的全基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增pgrp基因序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32а(+)/pgrp,通过IPTG诱导表达重组蛋白PGRP。利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0Server)分析rPGRP蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等生物学信息。结果成功构建重组质粒pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32а(+)/pgrp,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中金黄色葡萄自溶素AtlA基因序列(AC:D17366)的相似性为95.7%。获得的rPGRP分子质量单位约为20×103。生物信息学方法分析rPGRP片段由155个氨基酸组成,分子质量单位(Mr)为17.440 95×103,理论pI为5.45,是一种稳定的亲水性蛋白,该蛋白无信号肽且为非跨膜蛋白,属于胞外蛋白。结论成功构建金黄色葡萄球菌自溶素酰胺酶PGRP的原核表达系统。获得的约20×103肽聚糖识别蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 自溶素 肽聚糖识别蛋白
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肺炎链球菌自溶素与自溶相关性研究进展 被引量:1
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作者 谢兴凤 罗红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第12期I0002-I0004,F0003,共4页
自溶素是由细菌本身产生的能够水解细菌细胞壁的内源性蛋白水解酶,是一种共价结合物,参与细菌许多重要的生理活动。本文主要介绍了肺炎链球菌自溶素LytA、自溶素参与的生物学效应、自溶素的致病机理、自溶素与自溶的关系及其在新型抗菌... 自溶素是由细菌本身产生的能够水解细菌细胞壁的内源性蛋白水解酶,是一种共价结合物,参与细菌许多重要的生理活动。本文主要介绍了肺炎链球菌自溶素LytA、自溶素参与的生物学效应、自溶素的致病机理、自溶素与自溶的关系及其在新型抗菌药物方面的开发应用等内容。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 自溶素 自溶 综述
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