自噬基因Beclin-1在急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义

目的观察自噬基因Beclin-1在急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义。方法选取2008年3月—2011年3月我院收治的急性淋巴细胞白血病76例作为试验组,同时选取健康人76例作为对照组,采用免疫组化技术检测两组外周血中有核细胞中Beclin-1的阳性表达率,并比较试验组中男性与女性及急性淋巴细胞白血病L1型与L2型Beclin-1阳性表达率的差异。结果试验组Beclin-1阳性表达率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组中男性与女性及急性淋巴细胞白血病L1型与L2型Beclin-1阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在急性淋巴细胞白血病患者外周血的有核细胞中自噬基因Beclin-1的阳性表达率要低于正常健康人群。

甲状腺癌组织自噬相关基因Beclin-1和LC3的蛋白表达及其临床病理学意义

目的探讨甲状腺癌中自噬相关基因Beclin-1和LC3的表达及意义。方法收集2013-2016年威海市市立医院甲状腺外科手术切除的甲状腺癌63例标本,以距肿瘤边缘5cm以上的组织定义为配对癌旁组织,并收集同期住院的甲状腺腺瘤(42例)和结节性甲状腺肿组织标本(31例)。采用免疫组织化学SP法检测上述标本中Beclin-1和LC3的表达情况及两者之间的相关性。结果各组织Beclin-1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺癌中Beclin-1的阳性表达率(39.68%,25/63)明显低于甲状腺腺瘤(69.05%,29/42)、结节性甲状腺肿(83.87%,26/31)和癌旁正常组织中(85.71%,54/63)的阳性表达率(P<0.05)。LC3蛋白在甲状腺癌的阳性表达率为25.40%(16/63),在甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、癌旁正常组织中的阳性表达率分别为40.48%(17/42)、38.72%(12/31)、42.86%(27/63)。在甲状腺癌中LC3表达低于以上正常的3种组织。4者比较LC3的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin-1蛋白的表达与颈部淋巴结转移有关(χ~2=8.433,P=0.000)。经Spearman相关性检验分析,在甲状腺癌中LC3与Beclin-1蛋白成正相关(r=0.272,P=0.031)。结论 Beclin-1、LC3在甲状腺癌中低表达,在甲状腺癌中Beclin-1与LC3的表达量呈正相关。

自噬相关蛋白Atg5和Beclin-1在宫颈癌组织中的表达及与临床病理的相关性

目的探讨自噬相关蛋白Atg5和Beclin-1在宫颈癌组织中的表达及与临床病理的相关性。方法选取60例宫颈癌患者作为研究对象,将其分为恶性组,取同期60例良性子宫肌瘤或子宫腺肌瘤行全子宫切除手术的患者作为良性组,另取同期60例健康者的子宫颈组织标本进行分析,将其分为对照组。分析三组患者自噬相关基因5及Beclin1两种蛋白的表达情况、阳性率以及临床病理情况;应用回归分析,分析自噬相关基因5及Beclin1两种蛋白与宫颈癌病理的相关性。结果三组患者Atg5 mRNA及Beclin-1 mRNA表达情况对比差异显著,恶性组明显低于良性组和对照组(P<0.05);三组患者Atg5阳性与阴性患者例数对比差异显著,Beclin1阳性与阴性患者例数对比差异显著(P<0.05);60例宫颈癌患者中,Atg5阳性与Atg5阴性患者月经状态、年龄、肿瘤大小对比无明显差异(P>0.05),两组患者的临床分期、淋巴结转移、组织分化程度对比差异显著(P<0.05),Beclin1阳性与Beclin1阴性患者月经状态、年龄、肿瘤大小对比无明显差异(P>0.05),两组患者的临床分期、淋巴结转移、组织分化程度对比差异显著(P<0.05);Spearman相关分析显示,月经状态、年龄、肿瘤大小与自噬相关基因Beclin1和Atg5不相关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移和组织分化程度与自噬相关基因Beclin1和Atg5呈负相关(P<0.05)。结论自噬相关基因5(Atg5)及Beclin-1两种蛋白在宫颈癌患者的癌组织中表达低于良性肿瘤患者和健康人士,随着患者病情加重,自噬相关基因5(Atg5)及Beclin-1两种蛋白表达明显降低,自噬相关基因5(Atg5)及Beclin-1与宫颈癌患者的临床分期、淋巴结转移和组织分化程度呈负相关,因此可以应用自噬相关基因5(Atg5)及Beclin1来判断宫颈癌患者病情的严重程度。

细胞缝隙连接蛋白43、自噬相关基因Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性研究

目的探究细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)、自噬相关基因Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性。方法选取2011年5月至2017年4月许昌市人民医院术后确诊的125例甲状腺癌患者,68例甲状腺良性疾病患者,因其他原因进行手术或甲状腺活检的42例甲状腺组织正常者,均行Cx43、Beclin-1免疫组化染色检测。比较不同甲状腺组织中Cx43、Beclin-1表达水平,并分析Cx43、Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性。结果甲状腺癌组织中Cx43、Beclin-1阳性表达率低于甲状腺良性病变组织、正常甲状腺组织,差异有统计学意义(P <0. 05)。甲状腺癌患者TNMⅠ+Ⅱ期Cx43阳性表达率高于Ⅲ+Ⅳ期,差异有统计学意义(P <0. 05)。Cx43与甲状腺癌患者TNM分期呈负相关(P <0. 05);自噬相关基因Beclin-1与甲状腺癌患者TNM分期无关(P> 0. 05)。结论 Cx43表达与甲状腺癌患者TNM分期呈负相关,自噬相关基因Beclin-1与甲状腺癌患者TNM分期无关。

BQ-123对蛛网膜下腔出血大鼠神经功能缺陷的改善作用及其机制

目的:探讨内皮素受体拮抗剂(BQ-123)对蛛网膜下腔出血(SAH)神经功能损伤的影响,阐明其作用机制。方法:120只雄性SD大鼠分为假手术组、SAH模型组、低剂量(50μg·kg^(-1))BQ-123组和高剂量(75μg·kg^(-1))BQ-123组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型;HE染色观察各组大鼠海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学法和RT-PCR法检测海马区磷酸化雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、自噬相关基因beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-Ⅱ的表达;穿梭箱实验检测各组大鼠学习记忆功能,抓力测定实验评价各时间点各组大鼠前肢拉力情况。结果:与假手术组比较,SAH组大鼠海马区神经细胞结构损伤,神经细胞存活率降低(P<0.05),磷酸化mTOR、beclin-1和LC3-ⅡmRNA表达水平升高(P<0.05),大鼠学习记忆功能和拉力值降低(P<0.05);与SAH组比较,BQ-123组大鼠海马区神经细胞结构损伤减轻,神经细胞存活率升高(P<0.05),磷酸化mTOR mRNA表达水平降低(P<0.05),beclin-1和LC3-ⅡmRNA表达水平升高(P<0.05),动物学习记忆功能和拉力值增加(P<0.05);与低剂量BQ-123组比较,高剂量BQ-123组上述变化更为明显(P<0.05)。结论:BQ-123可显著改善SAH大鼠神经功能缺陷,其机制与调控mTOR-自噬通路信号途径有关。

NSCLCCT影像学表现与癌组织Beclin1、LC3表达的关系

目的研究自体吞噬相关基因Beclin 1与微管相关蛋白1轻链3(LC3)在NSCLC(NSCLC)组织中的表达,并分析其与NSCLC CT影像学表现的关系。方法选择2016年4月-2017年12月我院收治的并确诊的NSCLC 90例为病例组,另以距NSCLC肿物边缘大于3 cm的肺组织,且经病理HE染色确诊为非肿瘤组织55例作为正常对照组,运用免疫组化(SP)法测定两组标本组织中的Beclin1、LC3表达情况,分析NSCLC患者CT征象,采用Spearman相关分析Beclin1与LC3表达的相关性。结果病例组癌组织中的Beclin1、LC3阳性表达率均明显低于对照组癌旁正常组织(P <0. 05)。Beclin1、LC3表达与肿瘤大小、TNM分期、分化程度均相关(P <0. 05),而与患者性别、年龄、病理类型、淋巴结转移均无关(P> 0. 05)。病例组NSCLC患者癌组织中Beclin1、LC3表达均与有无深分叶征、棘突征、血管集束征、纵隔淋巴结肿大及胸膜外脂肪线是否消失相关(P <0. 05),而与有无毛刺征、空洞征无关(P> 0. 05)。Spearman相关分析显示,病例组NSCLC患者癌组织中Beclin1与LC3表达呈正相关(r=0. 478,P=0. 037)。结论 Beclin1、LC3在NSCLC组织中呈低表达,且Beclin1、LC3表达水平与NSCLCCT影像学表现密切相关。运用CT影像学表现可以在一定程度上评估Beclin1、LC3在NSCLC组织中的表达水平,将NSCLC的CT影像学表现与自噬分子Beclin1、LC3结合研究,有益于此类患者临床诊断及预后前瞻性的评估。

自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路影响A549肺癌细胞自噬和凋亡

目的探讨自噬基因Beclin-1表达沉默对A549肺癌细胞自噬和凋亡的影响以及其作用机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）和Westernblot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1mRNA和蛋白的表达；噻唑蓝（MTT）法检测各组A549细胞生长增殖；单丹磺酰戊二胺（MDC）法检测各组A549细胞自噬的变化；用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡；Westernblot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4（ECRG4）蛋白表达变化。结果与对照组比较，感染Beclin-1小干扰RNA（siaNa）慢病毒颗粒后，A549细胞中Beclin-1mRNA和蛋白表达显著减少（P〈0．05），Beclin-1mRNA的沉默效率分别为35．56％、89．22％和66．78％；感染Beclin-1siRNA慢病毒颗粒后，A549细胞凋亡率为（4．31±0．49）％，和对照组比较显著降低（P〈0．05）；感染Beclin-1siRNA慢病毒颗粒后，A549细胞群体平均倍增时间为（37．7±2．6）h，和对照组比较，平均倍增时间缩短（P〉0．05）；感染Beclin—1siRNA慢病毒颗粒后，和对照组比较，A549细胞自噬细胞阳性数量减少（P〉0．05）；感染Beclin-1siRNA慢病毒颗粒后，和对照组比较，ECRG4蛋白表达下降（P〈0．05）。结论自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路影响A549肺癌细胞自噬和凋亡。

外周血Beclin-1、Atg5表达与老年脓毒症患者预后的相关性

目的研究外周血自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(Atg5)表达与老年脓毒症患者预后的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月河北北方学院附属第一医院收治的136例老年脓毒症患者作为脓毒症组,选取同期一般资料匹配的55例受试者作为对照组,检测外周血Beclin-1、Atg5的表达水平。根据脓毒症组28 d预后情况分为存活和死亡患者,比较存活和死亡患者临床资料的差异并采用COX回归模型分析预后的影响因素,采用Kaplan-Meier曲线和受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1、Atg5对预后的评估价值。结果脓毒症组外周血Beclin-1、Atg5的表达水平低于对照组,且死亡患者外周血Beclin-1、Atg5的表达水平低于存活患者(P<0.05)。经COX回归分析,中性粒细胞/淋巴细胞比值、单核细胞/淋巴细胞比值、Beclin-1、Atg5、急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)是脓毒症组患者预后的影响因素(P<0.05);经Kaplan-Meier曲线和ROC曲线分析,Beclin-1、Atg5对脓毒症组患者的预后具有评估价值;在logistic模型中生成Beclin-1联合Atg5评估预后的新指标,该指标预测预后的曲线下面积为0.672,优于单一指标。结论老年脓毒症患者外周血Beclin-1、Atg5水平降低且与预后恶化有关,Beclin-1联合Atg5用于预后评估的价值优于单一指标。

自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路抑制A549肺癌细胞增殖

目的 探讨自噬基因Beclin-1过表达对A549肺癌细胞自噬和增殖的影响以及其作用机制.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1 mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝（MTT）法检测各组A549细胞生长增殖;单丹磺酰戊二胺（MDC）法检测各组A549细胞自噬的变化;Western blot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4（ECRG4）蛋白表达变化.结果 与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,A549细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,Beclin-1过表达组细胞群体平均倍增时间[（46.0＆#177;2.4）h]显著延长（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,自噬细胞阳性数量[（10.0＆#177;1.5）个]显著增加（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,ECRG4蛋白表达增加（P＜0.05）.结论 自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路抑制A549肺癌细胞增殖.

四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎大鼠的实验研究

目的:通过膝骨关节炎大鼠模型研究四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎(KOA)大鼠的作用机制。方法:8周龄SD大鼠27只,随机分为正常对照组、KOA模型组、四妙散组,KOA模型组和四妙散组采用前交叉韧带切除法制作KOA模型,手术6周后四妙散组以四妙散药液灌胃,正常对照组和KOA模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃4周后取膝关节软骨组织,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定凋亡细胞所占比例,采用荧光定量PCR检测关节软骨组织中凋亡和自噬相关基因表达水平。结果:与正常对照组比较,KOA模型组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著升高,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著升高,自噬相关蛋白LC3的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KOA模型组比较,四妙散组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著降低,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著降低,自噬相关蛋白LC3的表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:软骨细胞凋亡是KOA发病中的重要因素,该凋亡可能通过FADD-CASP3途径发挥作用。软骨细胞自噬作用的激活可抑制细胞凋亡,可能是延缓及控制KOA进展的一个新机制,四妙散可能通过该机制发挥治疗作用。

SLE患儿外周血自噬基因的表达与疾病发生及活动水平的关系

目的:探讨系统系性红斑狼疮(SLE)患儿外周血自噬基因的表达与疾病发生及活动水平的关系。方法:选取50例SLE患儿为研究对象,根据SLE疾病活动度评分(SLEDAI)分为SLE-1组(初诊、未经治疗且SLEDAI≥10分)和SLE-2组(经治疗且SLEDAI<10分),每组各25例;另选15名健康儿童为正常对照组(NC组)。比较三组儿童血清补体C3及C4、免疫球蛋白IgG、IgA及IgM、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Scr)、血沉(ESR)水平,分别采用RT-PCR及Western blotting检测3组儿童外周血单核细胞(PBMC)中自噬基因Beclin-1、ATG-5、ATG-7、p62 mRNA表达水平及蛋白表达量。结果:SLE-1及SLE-2组患儿C3、C4、PLT、Hb水平低于NC组(P<0.05),且SLE-1组低于SLE-2组(P<0.05);IgG、IgM、IgA、Scr、TG、ESR高于NC组(P<0.05),且SLE-1组高于SLE-2组(P<0.05);抗ANA抗体、抗ds-DNA抗体阳性率高于NC组(P<0.05),且SLE-1组高于SLE-2组(P<0.05);PBMC中Beclin-1、ATG-7及p62 mRNA表达水平高于NC组(P<0.05),且SLE-1组高于SLE-2组(P<0.05);Beclin-1、ATG-7及p62蛋白表达量高于NC组(P<0.05),且SLE-1组高于SLE-2组(P<0.05)。结论:SLE自噬水平增强,Beclin-1、ATG-7、P62水平及蛋白量在治疗后降低,自噬可能参与了SLE的发生与发展,可能是治疗的新靶点。

丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29自噬及其机制研究

目的对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法观察细胞自噬,荧光测试仪检测自噬水平,荧光定量PCR法检测以下基因表达水平的变化:微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)。结果随着丙戊酸钠处理浓度的递增及作用时间的延长,其对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制率逐渐提高,呈剂量依赖性及时间依赖性(P均﹤0.01);同时,随着药物浓度的增加,细胞中自噬泡数量增多,荧光强度增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。经丙戊酸钠处理后,自2 mmol/L浓度始,人结肠癌细胞系HT-29自噬相关基因LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高(P均<0.01),而mTOR、p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低(P均<0.01)。结论丙戊酸钠可诱导结肠癌细胞发生自噬,其诱导结肠癌细胞发生自噬的机制可能与阻断mTOR-Akt信号转导通路及激活Beclin-1信号转导通路有关。

自噬相关基因Beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关基因beclin 1在不同卵巢组织中的表达及其临床意义。方法免疫组化和RT-PCR方法分别检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤以及上皮性卵巢癌组织中的beclin 1的蛋白及其mRNA的表达,比较三组间的表达差异。结果正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1蛋白表达阳性率明显高于上皮性卵巢癌组织(83.3%和70.0%vs.36.7%)(P<0.05);正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1mRNA的表达强度明显高于上皮性卵巢癌组(0.695±0.123和0.615±0.119vs.0.243±0.103)(P<0.05)。结论 beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达下降;上皮性卵巢癌发生、发展可能与自噬相关基因beclin 1自噬活性的抑制有关。

电针预处理内关穴对心肌缺血再灌注大鼠自噬调控基因和自噬微管相关蛋白轻链3表达的影响

目的:基于不同时间点对比电针预处理内关穴对心肌缺血再灌注(MIRI)模型大鼠自噬基因的不同表达影响,探讨电针预处理的最优时间点。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、内关组,每组12只。根据不同时间点按3、7 d分时间点观察,每组6只。采用大鼠冠状动脉左前降支穿线结扎的手段创建心肌缺血再灌注损伤模型。HE染色法检测心肌细胞病理形态学变化,RT-PCR法、Western blotting法检测自噬相关基因在心肌细胞中的表达。结果:第3天模型组心肌损伤程度高于空白组、假手术组,模型组自噬调控基因(Beclin-1)、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)蛋白表达高于空白组、假手术组,差异有统计学意义(均P<0.01)。第3天内关组心肌细胞损伤程度低于模型组,内关组自噬相关基因表达量低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。第7天空白组、模型组均存在心肌组织细胞紊乱、结构模糊、自噬泡存在等表现;模型组自噬相关蛋白表达量明显升高。第7天内关组自噬相关蛋白表达量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且心肌损伤情况较第3天改善。第7天模型组、内关组的心肌损害程度均较第3天减轻,细胞器损坏程度也有所改善。第7天模型组、内关组的蛋白表达低于第3天,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:电针预处理内关穴对MIRI模型大鼠的保护机制可能与自噬的相关调节有关,对比不同时间效应差异,第7天效果更佳。

自噬及其在胃癌中的研究进展

目的总结自噬及其在胃癌中的研究进展。方法检索并筛选近年来国内外发表的有关自噬与胃癌关系的文献并分别对自噬的特点、分子标志、调控因素及其在胃癌中的意义和作用进行综述。结果自噬既可促进细胞的死亡,也可延长肿瘤形成中癌细胞的存活。调控自噬的药物(包括中药)在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景,但基于自噬调控的抗肿瘤治疗效果仍取决于细胞内自噬的实际水平。结论目前对胃癌自噬现象的了解仍然知之甚少,阐明自噬现象的分子机理并通过合理调控自噬来杀伤癌细胞仍然需要更为深入的实验研究。