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人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性
被引量:
1
1
作者
赵亚蕊
曹鹏程
+4 位作者
郑耀武
张全爱
赵峰梅
渠志灿
赵邑
《生物技术》
北大核心
2017年第5期484-490,共7页
[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析。[方法]以pFastBacTMHTAATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293...
[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析。[方法]以pFastBacTMHTAATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达。通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度。利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质。[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98%,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性。酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0~50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)促进ATX的活性。[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATX蛋白,完成了ATX酶学性质的分析。
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关键词
自分泌运动因子
哺乳细胞
表达
纯化
酶学特性
原文传递
题名
人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性
被引量:
1
1
作者
赵亚蕊
曹鹏程
郑耀武
张全爱
赵峰梅
渠志灿
赵邑
机构
山西省生物研究所基因药物室
东北师范大学生命科学学院
出处
《生物技术》
北大核心
2017年第5期484-490,共7页
基金
国家国际科技合作专项项目("基于ATX-LAPR结构的新型靶向抗肿瘤药物的研究究"
No.2014DFA30270)
+1 种基金
山西省重点研发计划项目(国际合作方面)("人源化组织因子抗体的制备及在肠癌靶向治疗中的应用研究"
No.201603D421022)
文摘
[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析。[方法]以pFastBacTMHTAATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达。通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度。利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质。[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98%,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性。酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0~50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)促进ATX的活性。[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATX蛋白,完成了ATX酶学性质的分析。
关键词
自分泌运动因子
哺乳细胞
表达
纯化
酶学特性
Keywords
autotaxin
,
mammalian cells
,
expression
,
purification
,
enzymatic properties
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q814 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性
赵亚蕊
曹鹏程
郑耀武
张全爱
赵峰梅
渠志灿
赵邑
《生物技术》
北大核心
2017
1
原文传递
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参考文献
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